1、ICS 65.020.20 B 05 备案号： DB42 湖北省 地 方 标 准 DB42/T 1405 2018 湖北主要药用植物石斛组培育苗技术规程 Technical regulations of tissue culture for the main medicinal Dendrobium in Hubei （报批稿） 2018-09-04 发布 2018-11-24 实施 湖北省质量技术监督局 发布 DB42/T 1405 2018 I 目 次 前言 . III 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 种类选择 . 1 5 种苗繁育 . 2 5.1
2、 蒴果采收 . 2 5.2 消毒 播种 . 2 5.3 增殖培养 . 2 5.4 分化培养 . 2 5.5 生根培养 . 2 6 炼苗与健化 . 2 6.1 搭建荫棚 . 2 6.2 炼苗 . 2 6.3 健化 . 3 7 病虫害防治 . 3 7.1 防治原则 . 3 7.2 主要病害及防治方法 . 3 7.3 主要虫害及防治方法 . 3 8 种苗出圃 . 3 8.1 出圃时间 . 3 8.2 种苗 规格 . 4 8.3 出圃要求 . 4 附录 A（资料性附录） 药用石斛主要病害防治方法 . 5 附录 B（资料性附录） 药用石斛虫害防治方法 . 6 DB42/T 1405 2018 II DB
3、42/T 1405 2018 III 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖北省林业科学研究院提出。 本标准由湖北省林业厅归口管理。 本标准起草单位：湖北省林业科学研究院、湖北宗坤石斛科技开发有限公司、英山县药材和茧丝绸 产业化办公室、英山县科技局。 本标准主要起草人：陈慧玲、刘宗坤、杨彦伶、张新叶、刘正言、庞宏东、李振芳、刘涛、陈华超、 马 林江、彭婵。 DB42/T 1405 2018 1 湖北主要药用植物石斛组培育苗技术规程 1 范围 本标准规定了湖北主要药用植物石斛组培育
4、苗的术语与定义、种类选择、种苗繁育、炼苗与健化、 病虫害防治及种苗出圃。 本标准适用于湖北省范围内主要药用植物石斛的组培育苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321.1 农药合理使用准则 (一 ) GB/T 8321.2 农药合理使用准则 (二 ) GB/T 8321.3 农药合理使用准则 (三 ) GB/T 8321.4 农药合理使用准则 (四 ) GB/T 8321.5 农药合理使用准则 (五 ) GB/T 8321.6 农药
5、合理使用准则 (六 ) GB/T 8321.7 农药合理使用准则 (七 ) GB/T 8321.8 农药合理使用准则 (八 ) GB/T 8321.9 农药合理使用准则 (九 ) GB/T 8321.10 农药合理使用准则 (十 ) NY/T 1276 农药安全使用规范 总则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 石斛菌根共生菌 Dendrobium mycorrhiza symbiotic fungus 一种或几种侵染石斛属植物根部，与之共生的内生真菌，石斛属植物种子萌发、幼苗生长的碳源、 水源以及成年植株部分营养均依赖这些真菌来获取。 3.2 石斛菌根共生菌液 liquid
6、 of Dendrobium mycorrhiza symbiotic fungus 药用植物石斛进行组织培养时，在其培养基中添加的由石斛菌根共生菌经无菌分离培养后得到的液 体菌剂 。 3.3 DB42/T 1405 2018 2 炼苗 hardening off 采取 通 风 、 降温 、适当控水等措施对设施培育的幼苗 进行 强 迫 锻炼 ， 提高抗性 ， 使其定植后能够迅 速适应陆地的 自然 环境条件 的过程 。 4 种类选择 选择霍山石斛 (Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng)、铁皮石斛 (Dendrobium officinale
7、Kimura et Migo)、细茎石斛 (Dendrobium monilifolme(L.) Sw)为主要栽培种。 注 ：石斛属植物约 1500种，中国有 75种 2个变种，湖北有 8种，以上 3种在湖北栽培表现好。 5 种苗繁育 5.1 蒴果采收 对现有种子园中多糖含量高、高产的 2 a 3 a生健康植株进行人工授粉后精心管理，于 9月 11月 采收无病虫害、无机械损伤的成熟蒴果，以果皮绿黄色未开裂为宜。 5.2 消毒播种 5.2.1 消毒 在超净工作台上将蒴果表面用 70 %酒精棉球擦拭干净后，浸泡于 70 %酒精中 30 s，再用 0.1 %升汞 消毒 15 min，无菌水冲洗 5
8、次后 用无菌滤纸吸干表面水分。 5.2.2 播种 在超净工作台上用灭菌手术刀沿中缝线纵向切开消毒好的蒴果，刮出种子于适量的无菌水中分别制 成悬浮液，摇匀悬浮液后，吸取适量悬浮液加入装有 1/2 MS +1 %石斛菌根共生菌液培养基的培养瓶中， 并使之均匀分布，用封口膜封口。 5.2.3 培养条件 将已播种的培养瓶放入温度为（ 25 1），光照 10 h 12 h、光照强度 1500 1ux 2000 1ux组培 室培养。 5.3 增殖培养 30 d后将培养基上萌生的原球茎转接到 MS + 2.0 mg/l 6-BA + 0.2 mg/l NAA + 10 %香蕉汁 + 1 % 石斛菌根共生菌液
9、的增殖培养上培养，培养条件参照本标准 5.2.3执行。 5.4 分化培养 60 d后将增殖的原球茎转接到 MS + 0.6 mg/l 6-BA + 1.2 mg/l NAA + 10 %香蕉汁的分化培养基上 培养，培养条件参照本标准 5.2.3执行。 5.5 生根培养 60 d后将分化的丛生芽转接到 1/2 MS + 1.0 mg/l NAA + 15 %马铃薯 + 2 %石斛菌根共生菌液的生 根培养基上培养，培养条件参照本标准 5.2.3执行。 DB42/T 1405 2018 3 6 炼苗与健化 6.1 搭建荫棚 选择地势平坦处搭建 长 40 m 50 m、宽 8 m、高 3.3 m的钢架
10、大棚，覆盖避雨薄膜和遮光度 75 % 80 % 的遮阳网，棚内安装微喷雾设备 。 6.2 炼苗 组培苗生根培养 60 d后即可开瓶炼苗移栽。将苗高 3 cm 4 cm、长小叶 5片 8片，根 4 条 5 条的 试管苗带培养瓶一起移至荫棚内，进行常温闭瓶炼苗， 7 d后再开瓶炼苗 3 d 7 d。炼苗温度宜 15 30 ，光照小于 7000 Lux。 6.3 健化 6.3.1 健化基质准备 采用树皮 + 花岗岩瓜米石的双层基质作为健化基质，上层为厚度 2 cm发酵过的 1 cm大小碎松树树 皮，下层为厚度 2 cm的粒径 0.5 cm 1.0 cm花岗岩瓜米石，基质在组培苗健化前用高温蒸汽消毒后
11、装入 育苗盘。 6.3.2 组培苗健化前预处理 将已进行炼苗处理的生根组培苗从培养瓶中取出，先用清水将根系上的琼脂冲洗干净，再用 5 %甲 基托布津 1000 倍液浸根 3 min 5 min，放在阴凉通风处晾至根系呈白色后即可进行组培苗健化。 6.3.3 健化方法 用 42 cm 42 cm 5 cm的育苗盘，按 10 cm 10 cm密度进行健化，每个育苗盘栽种 16蔸，每蔸 5 株 6 株丛植，移栽时基质含水量控制在 30 % 40 %。 6.3.4 健化管理 健化种苗需喷雾 保持幼苗相对湿润， 10 d 15 d后，开始用自制石斛营养液和磷酸二氢钾 1000 倍 2000 倍液交替喷施
12、，每隔 15 d喷 1次。 7 病虫害防治 7.1 防治原则 病虫害防治遵循“ 预防为主 ， 科学防控 ， 依法治理 ， 促进健康 ”的 16字方针，实行生物、物理、化 学防治相结合的综合防治措施。 7.2 主要病害及防治方法 药用植物石斛主要病害有石斛黑斑病 Dendrobium alternaria、 石 斛炭 疽 病 Dendrobium anthracnose disease和石斛煤污病 Dendrobium sooty blotch。预防病害发生应 保持生长环境卫生，增 强环境通风透光，及时清除有病植株、杂草及残枝落叶。主要的防治方法见附录 A。 7.3 主要虫害及防治方法 DB42
13、/T 1405 2018 4 药用植物石斛主要虫害有蛞蝓 Agriolimax agrestis Linnaeus、蜗牛 Fruticicolidae和石斛菲盾蚧 Phenacaspis dendrobii Kuwana。预防虫害发生应及时捕捉害虫，同时利用生物农药防虫，及时清除有虫 植株、杂草及残枝落叶，改善环境条件。主要的防治方法见附录 B。 8 种苗出圃 8.1 出圃时间 种苗在荫棚内健化 1 a 2 a后才能出圃上山定植，以春季 3月 5月 为宜。 8.2 种苗规格 单株苗高 4 cm 5 cm，叶片浓绿，叶数 5 片 8 片，根数 4 条 5 条，根长 2.5 cm 3.5 cm，每
14、蔸 8 株 10 株。 8.3 出圃要求 起苗前 2 d 3 d应喷水保证基质湿润，减少起苗伤根。种苗要求生长健壮、无感染、无黄化，无检 疫性病虫，无病虫害。根系发达，分布均匀，无机械损伤。 DB42/T 1405 2018 5 A A 附 录 A （资料性附录） 药用植物石斛主要病害防治方法 表 A.1规定了药用石斛主要病害防治方法。 表 A.1 药用植物石斛主要病害防治方法 病害名称 危害部位 发生时间 防治方法 石斛黑斑病 叶片 3 月 5 月 50 %的多菌灵 1000 倍液喷雾，每隔 14 d 喷 1 次，连续 3 次。用量为 1 kg/ha 1.8 kg/ha。 75 %百菌清 4
15、00 600 倍液喷洒喷雾，每隔 7 d 喷 1 次，连续 4 5 次。用量为 2.25 kg/ha 3.0 kg/ha。 石斛炭疽病 叶片及茎枝 1 月 5 月 50 %多菌灵 1000倍液或 50 %甲基托布津 1000 倍液喷雾 每隔 14 d喷 1次， 连续 3 次。用量为 1 kg/ha 1.8 kg/ha。 炭福美可湿性粉剂 500 倍液喷 雾，每隔 7 d 10 d 喷 1 次，连续 3 次。用量为 1 kg/ha 1.8 kg/ha。 石斛煤污病 叶片及植株 多雨季节 50 %多菌灵稀释 1000 倍喷雾，每隔 14 d 喷 1 次，连续 3 次 ,用量为 1 kg/ha 1.
16、8 kg/ha。 45 %石硫合剂 500 倍液喷雾，每隔 7 d 喷 1 次，连续 2 次 .用量 3.0 kg/ha 3.75 kg/ha。 注 ：农药的 合理 使用应符合 GB/T 8321.1、 GB/T 8321.2、 GB/T 8321.3、 GB/T 8321.4、 GB/T 8321.5、 GB/T 8321.6、 GB/T 8321.7、 GB/T 8321.8、 GB/T 8321.9 和 GB/T 8321.10 标准 及 NY/T 1276 标准 的规定要求。 DB42/T 1405 2018 6 B B 附 录 B （资料性附录） 药用植物石斛主要虫害防治方法 表 B
17、.1规定了药用石斛主要虫害防治方法。 表 B.1 药用植物石斛主要虫害防治方法 虫害名称 危害部位 发生时间 防治方法 蛞蝓 新芽或根尖 多雨季节 在蛞蝓多发季，使用 1:（ 4 5）茶枯浸出液对苗盘进行短暂浸泡杀灭。 每隔 14 d 浸泡 1 次； 用 50 %杀螺胺乙醇可湿性粉剂 400 倍 500 倍液 喷雾，每隔 14 d 喷 1 次， 用量 2.25 kg/ha 3.0 kg/ha。 蜗牛 幼嫩茎叶和花 多雨季节 注意环境清洁卫生，及时清除枯枝落叶。 用麩皮拌 10 %螺枯威颗 粒剂或白僵菌粗孢粉诱杀。 在栽培区喷洒撤生石灰或饱和食盐水。 石斛菲盾蚧 叶片 5 月下旬 人工清除虫害枝并集中烧毁。 注 ：农药的合理使用应符合 GB/T 8321.1、 GB/T 8321.2、 GB/T 8321.3、 GB/T 8321.4、 GB/T 8321.5、 GB/T 8321.6、 GB/T 8321.7、 GB/T 8321.8、 GB/T 8321.9 和 GB/T 8321.10 标准及 NY/T 1276 标准的规定要求。 _
