1、 中华人民共和国专业标准 全氮和粗蛋白测定法 Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87 cru d e p r ot ein 本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。 1 仪器 a. 分析天平:感量 0.1mg; b . 凯氏烧瓶; c. 铁架、铁圈、石棉网; d . 煤气灯(或电炉); e. 干燥管、抽气管、橡皮管; f . 氮气球、冷凝管、锥形瓶; g. 粉碎机等。 2 试剂与溶液 2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 甲基红 40mg,溴甲酚绿 1g,溶于 60mL95% 乙醇中。 2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试
2、剂 硫酸铜 : 硫酸钾 = 6 100 ( 硫酸铜和硫酸钾都为分析纯) 。 2.3 玻璃珠( 3mm) 或锌粒。 2.4 4% 硼酸溶液 称取化学纯硼酸 4g,用蒸馏水溶解后定容至 100mL 。 2.5 浓硫酸 ( 分析纯) 2.6 40% 氢氧化钠溶液 称取化学纯氢氧化钠 40g,加蒸馏水溶解,定容至 100mL 。 2.7 0.1N 盐酸标准溶液 量取分析纯盐酸 9mL,加蒸馏水稀释至 1000mL 。 2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在 180的烘箱中烘至恒重)3 份, 每份重约 0.17g,称准至 0.0002g。分别置于 150mL 锥形瓶中,各加已煮沸过蒸馏
3、水 30mL, 温热摇动,使之溶解。再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 2 滴,然后用待标定的盐酸 溶液滴定,直至溶液刚呈暗红色为终点,记下耗用毫升数(V) 。 计算:盐酸标准溶液的当量浓度 N 按下式计算 G N = (3) V 0.05299 式中:N盐酸标准溶液的当量浓度; G 无水碳酸钠之重量,g; V 盐酸溶液之用量,mL; 0.05299每毫克当量 Na2CO3 之重量,g 。 2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取 25mL 需要标定的盐酸溶液于 150mL 锥 形瓶中,加酚酞指示剂 2 滴, 用 0.1N 氢氧化钠标准溶液滴至微红色, 在 30s 内不退色为终点。 记
4、下耗用 mL 数。 计算: N N aO H V NaOH 盐酸当量 = (2) 25 式中:N NaOH已知浓度的氢氧化钠溶液的当量浓度; V N aO H 氢氧化钠溶液的滴定量,mL; 25 待标定盐酸吸取量,mL。 2.7.3 标定程序:若要使盐酸标准溶液的当量浓度尽可能接近 0.1000N,可根据初标定浓 度加水或盐酸,多次标定后最终达到。为操作简便,可使用 2.7.2 法,最后用 2.7.1 法标定。 3 操作方法 3.1 消化 准确吸取原样 2mL( 或称取固体样品 0.5g,称准至 0.0002g) 。置于干燥的 500mL 凯氏 烧瓶中,加入硫酸铜硫酸钾混合试剂 5g,浓硫酸
5、8mL,然后放入通风橱内 ( 烧瓶口上放 置小漏斗), 加热消化至烧瓶内碳化颗粒完全消失,消化液呈浅绿色后,再继续加热 10min 左右,一般消化时间不超过 30min 。也可于瓶颈口上插一支干燥管用橡皮管连接玻璃水泵, 借以将腐蚀性气体抽去。 3.2 蒸馏 冷却后,缓慢加入蒸馏水 120mL,使其全部溶解,冷凝管下端的导管插入盛有 4% 硼酸溶 液 35mL 及 混合指示 剂 2 滴的 250mL 锥形瓶 中 的液面下, 然后,沿凯 氏烧 瓶瓶壁加 入 40% 氢 氧 化钠溶液 40mL,玻璃珠 4 5 粒或锌粒 1 2 粒,迅速连接蒸馏装置,以防氨气逸出。连接 好后,检查是否漏气,缓缓摇匀
6、,接通冷却水,加热、蒸馏,使瓶内液体蒸去三分之二停止 蒸馏。 3.3 滴定 将 锥形瓶 内 接 收液用 0.1N 盐酸 标准溶液 滴 定至暗红 色 为终点 。 记 下耗用 mL 数。 平行 试验允许误差为 0.2mL 。 同时做试剂空白试验。 4 计算 4.1 全氮 TN 含量计算如下: ( V - V o) N 0.014 TN = 100 (3) W 式中:V样品滴定时耗用盐酸标准溶液数,mL; V o 试剂空白滴定耗用盐酸标准溶液数,mL; N 盐酸标准溶液当量浓度; 0.014氮的毫克当量; W 样品 mL 数或 g 数; TN 样品全氮含量,g/100mL 或 g 。 4.2 原料粗蛋白 P 计算如下: P =6. 25TN (4) 式中:P原料粗蛋白含量,g/100mL 或 g; 6.25蛋白质中含氮系数; TN 全氮含量,g/100mL 或 g 。 附加说明: 本标准由商业部副食品局提出。 本标准由上海市酿造科学研究所起草。 本标准主要起草人须凤高。 中华人民共和国商业部 1987-11-20 批准 1988-07-01 实施
