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    KS P 1012-2010 Standard materials for the quality control of genetic diagnostic tests of Plasmodium falciparum malaria《恶性疟疾基因诊断试剂的质量控制标准物质》.pdf

    • 资源ID:820219       资源大小:408.86KB        全文页数:22页
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    KS P 1012-2010 Standard materials for the quality control of genetic diagnostic tests of Plasmodium falciparum malaria《恶性疟疾基因诊断试剂的质量控制标准物质》.pdf

    1、 KSKSKSKS KSKSKSK KSKSKS KSKSK KSKS KSK KS KS P 1012 KS P 1012 :2010 2010 12 30 http:/www.kats.go.krKS P 1012:2010 : ( ) ( ) () ( ) : (http:/www.standard.go.kr) : :2010 12 30 2010-0689 : : ( 02-509-7294) (http:/www.kats.go.kr). 10 5 , . KS P 1012:2010 i ii 1 1 2 1 3 .1 4 2 5 (Harmonization) 3 6 4 7

    2、, .4 A() 6 B() 7 C() , 9 D() Taq-Man PCR (Plasmodium falciparum) 11 14 KS P 1012:201015 KS P 1012:2010 ii . . , , . , , . KS P 1012:2010 Standard materials for the quality control of genetic diagnostic tests of Plasmodium falciparum malaria 1 . . 1 . 2 ( ) . 2 . 2 . . ( ) . KS A ISO Guide 30, KS A I

    3、SO/IEC Guide 15, ISO/IEC KS A ISO/IEC Guide 33, KS P ISO 15194, 3 . 3.1 KS P 1012:2010 2 3.2 (synchronicity) . 3.3 (synchronization) . . 3.3.1 3.3.2 3.3.3 1 1 3.4 (differential stage) (erythrocytic stage) 1 (ring form), (trophozoite), (schizont) . 2 1 , 2-16. 3 . 3.5 (%), . 2 000 parasites/ L 4 KS P

    4、 1012:2010 3 4.1 , , , . , , (strain) . 4.2 . . . . 4.3 . . . 4.4 1 , . 1 , . . 1 . 4.5 . . . 5 (Harmonization) 5.1 3 (lot) . 3 PCR(real-time PCR) (analytical sensitivity), KS P 1012:2010 4 (lineality), (reproducibility) ( C ). 3 4 . 5.2 , , , , . 3 . 5.3 4 5 2 3 (10 000 parasites/ L, 1 000 parasite

    5、s/ L, 100 parasites/ L) . PCR CT . 0.99 R 2 . 3 6 . 5.4 70 . 6 6 5.1, 5.2 5.3 . 3,7 . 5.5 . 2 5.2, 5.3, 5.4 . 6 . 8 . 7 , . a) : b) : L c) : d) : 1 KS P 1012:2010 5 e) : f) , , 9 . KS P 1012:2010 6 A () A.1 . . KS P 1012:2010 7 B () B.1 . , , . 3 . B.2 10 % (RPMI) (:GIBCO, cat. No.: 23400-021) 1) (:

    6、Falcon, :100 mm20 mm, cat. No.:353003) 2) . 2 . 5 % . 5 % 37 , CO 22 %, O 23 %, N 295 % 60 . 20 L (:Thermo, :Shandon Cytospin 4) 3) (Giemsa) (B.1 B.2 ) 1 000 3 50 . , 1 . B.3 . 1 1 . B.2 8 % 0.75 % (gelatin) (:Sigma, cat. No.:G2625) 4) 10 % 37 30 . ( ) 2 B.2 6 8 5 0.274 M -(D-Sorbitol) (:Sigma, cat.

    7、 No.:S3889) 5) 5 . 1 . 1 B.2 48 1) . KS . 2) 1) 3) 1) 4) 1) 5) 1) KS P 1012:2010 8 (magnetic separation system) (:Miltenyi Biotec, :LD MidiMACS starting kit, cat. No.:130-090-329) 6) ( B ). 1 (separation buffer) (2mM EDTA and 0.5 % BSA in PBS) 10 % (LD column) . (elution). . B.2 96 . B.4 , 1 1 000 p

    8、arasites/ L, 100 parasites/ L, 10 parasites/ L, 1 parasites/ L, 0.1 parasite/ L . 4 10 6 / L . % 0.025 %, 0.002 5 %, 0.000 25 %, 0.000 025 %, 0.000 002 5 %. 4 10 6 / L . B.5 B.3 B.4 . 4 10 6 / L 1 mL QIAamp DAN Blood Midi Kit(QIAGEN, Cat No. 51183) DNA . QIAGEN Protease 100 L 15 mL , 1 mL 15 mL . AL

    9、 1.2 mL 15 mL , 70 10 . 1 mL (96 % 100 %) , (column) . 1 850 g 3 , 2 mL AW1 4 500 g 1 . 2 mL AW2 , 4 500 g 15 . 15 mL , 200 L AE . 5 , 4 500 g 2 . DNA OD (Nano Drop. ND- 1 000). 15 ( 1 ). 1 ( :410 6 / L) 1 1 000 parasites/ L * No.- No.- No.- 100 parasites/ L No.- No.- No.- 10 parasites/ L No.- No.-

    10、No.- 1 parasites/ L No.- No.- No.- 0.1 parasite/ L No.- No.- No.- *No.: (1-100:, 101-200:, 201-300: ) 6) 1 KS P 1012:2010 9 C () , C.1 B.2 . (methylene blue) (eosin) (DNA) - . , , , , . , . (chromosome) (histoplasma) . C.2 . (thick smear) (thin smear) 100 % (methanol) 2 3 . pH 7.2 . . . 10 10, 20 20

    11、, 30 40 30 40 30 40 30 40 . . . . C.3 . (haem) . 2 (histidine-rich protein 2) (HRP2) (vacuole) (haemozoin) (glutathione) . (diamagnetic) (paramagnetic) . . 1 , . . KS P 1012:2010 10 C.4 . . . . . , (plasmagel) . , . 70 % 80 % 80 % 90 % . 1 . KS P 1012:2010 11 D () Taq-Man PCR (Plasmodium falciparum)

    12、 D.1 Taq-Man PCR (Rapid assay) . Taq-Man PCR SYBR Green (multiplex) PCR . Taq-Man PCR Taq-Man (probe) DNA Taq (polymerase) (exonuclase) , . 18s rRNA, ssrRNA (primer) PCR . . :5 -GCTTTTGAGAGGTTTTGTTACTTTGAG :5 -TTCCATGCTGTAGTATTCAAACACAAT :(FAM)-CTCAATCATGACTACCCGTCTGTTATGAACACTTAATTTT(TAMRA) PCR . 20 L 2 PCR 10 L 3.6 M 1 M / 5 L 5 L PCR PCR . 1:50 2, 95 10, 72 2 2(40 ):95 10, 62 40 . :205 (base pair; bp), :120 , :144 , :800 PCR FAM CT .


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