1、August 2013Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 14DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e. V., Berlin, gestattet.ICS 07.100.30Zur Erstellung e
2、iner DIN SPEC knnen verschiedene Verfahrensweisen herangezogen werden: Das vorliegende Dokument wurde nach den Verfahrensregeln einer Vornorm erstellt.!$xa“1856259www.din.deDDIN CEN ISO/TS 6579-2Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Horizontales Verfahren zum Nachweis, zur Zhlung und zur
3、Serotypisierung von Salmonellen Teil 2: Zhlung unter Anwendung eines miniaturisierten Verfahrens derwahrscheinlichsten Keimzahl (ISO/TS 6579-2:2012);Deutsche Fassung CEN ISO/TS 6579-2:2012Microbiology of food and animal feed Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping of Salmonel
4、la Part 2: Enumeration by a miniaturized most probable number technique(ISO/TS 6579-2:2012);German version CEN ISO/TS 6579-2:2012Microbiologie des aliments Mthode horizontale pour la recherche, le dnombrement et le srotypage dessalmonella Partie 2: Dnombrement par une technique miniaturise du nombre
5、 le plus probable(ISO/TS 6579-2:2012);Version allemande CEN ISO/TS 6579-2:2012Alleinverkauf der Spezifikationen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlin www.beuth.deGesamtumfang 27 SeitenDIN SPEC 10052DIN CEN ISO/TS 6579-2 (DIN SPEC 10052):2013-08 2 Nationales Vorwort Eine DIN SPEC nach dem Vornorm-Ver
6、fahren ist das Ergebnis einer Normungsarbeit, das wegen bestimmter Vorbehalte zum Inhalt oder wegen des gegenber einer Norm abweichenden Aufstellungsverfahrens vom DIN noch nicht als Norm herausgegeben wird. Zur vorliegenden DIN SPEC wurde kein Entwurf verffentlicht. Erfahrungen mit dieser DIN SPEC
7、sind erbeten vorzugsweise als Datei per E-Mail an naldin.de in Form einer Tabelle. Die Vorlage dieser Tabelle kann im Internet unter http:/www.din.de/stellungnahme abgerufen werden; oder in Papierform an den Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DIN Deutsches Institu
8、t fr Normung e. V., Burggrafenstrae 6, 10787 Berlin. Dieses Dokument enthlt unverndert die Internationale Technische Spezifikation ISO/TS 6579-2:2012, die vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Food products“ (Sekretariat: AFNOR/ABNT, Frankreich/Brasilien) in Zusammenarbeit mit dem CEN/TC 275 Lebensmitte
9、lanalytik Horizontale Verfahren“ (Sekretariat: DIN, Deutschland) erarbeitet wurde und auch als Europische Technische Spezifikation CEN ISO/TS 6579-2:2012 vorliegt. Die Mitarbeit des DIN in den zustndigen Gremien SC 9 Food products Microbiology“ des ISO/TC 34 und in der Arbeitsgruppe WG 6 Mikrobiolog
10、ie der Lebensmittelkette“ des CEN/TC 275 wird ber den Arbeits-ausschuss NA 057-01-06 AA Mikrobiologische Lebensmitteluntersuchung einschlielich Schnellverfahren“ des Normenausschusses Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) wahrgenommen. Es wird darauf hingewiesen, dass die aktuelle Norm
11、 DIN EN ISO 6579:2007 zum Nachweis von Salmonella spp. derzeit berarbeitet wird. Nach der Beendigung der berarbeitung wird diese Norm durch die DIN EN ISO 6579-1 ersetzt werden. Weiterhin ist beabsichtigt, nach Beendigung der Normungsarbeiten den Technischen Bericht DIN CEN ISO/TR 6579-3 zur Serotyp
12、isierung von Salmonellen zu verffentlichen. Fr die in diesem Dokument zitierten internationalen Dokumente wird im Folgenden auf die entsprechenden deutschen Dokumente hingewiesen: ISO 6887 (alle Teile) siehe DIN EN ISO 6887 (alle Teile) ISO 7218 siehe DIN EN ISO 7218 ISO/TS 11133-1 siehe DIN ISO/TS
13、11133-1 ISO/TS 11133-2 siehe DIN ISO/TS 11133-2 (DIN SPEC 10126) DIN CEN ISO/TS 6579-2 (DIN SPEC 10052):2013-08 3 Nationaler Anhang NA (informativ) Literaturhinweise DIN EN ISO 6887 (alle Teile), Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Vorbereitung von Unter-suchungsproben und Herstellung
14、von Erstverdnnungen und von Dezimalverdnnungen fr mikrobiologische Untersuchungen DIN EN ISO 7218, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Allgemeine Anforderungen und Leit-linien fr mikrobiologische Untersuchungen DIN ISO/TS 11133-1, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Anlei
15、tungen fr die Vorbereitung und Herstellung von Nhrmedien Teil 1: Allgemeine Anleitungen fr die Qualittssicherung bei der Zuberei-tung von Nhrmedien im Laboratorium DIN ISO/TS 11133-2 (DIN SPEC 10126), Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Anleitung fr die Vorbereitung und Herstellung von
16、 Nhrmedien Teil 2: Praktische Anleitung zur Leistungsprfung von Nhrmedien DIN CEN ISO/TS 6579-2 (DIN SPEC 10052):2013-08 4 Leerseite TECHNISCHE SPEZIFIKATION TECHNICAL SPECIFICATION SPCIFICATION TECHNIQUE CEN ISO/TS 6579-2 November 2012 ICS 07.100.30 Deutsche Fassung Mikrobiologie von Lebensmitteln
17、und Futtermitteln - Horizontales Verfahren zum Nachweis, zur Zhlung und zur Serotypisierung von Salmonellen - Teil 2: Zhlung unter Anwendung eines miniaturisierten Verfahrens der wahrscheinlichsten Keimzahl (ISO/TS 6579-2:2012) Microbiology of food and animal feed - Horizontal method for the detecti
18、on, enumeration and serotyping of Salmonella - Part 2: Enumeration by a miniaturized most probable number technique (ISO/TS 6579-2:2012) Microbiologie des aliments - Mthode horizontale pour la recherche, le dnombrement et le srotypage des salmonella - Partie 2: Dnombrement par une technique miniatur
19、ise du nombre le plus probableDiese Technische spezifikation (CEN/TS) wurde vom CEN am 16. Juli 2012 als eine knftige Norm zur vorlufigen Anwendung angenommen. Die Gltigkeitsdauer dieser CEN/TS ist zunchst auf drei Jahre begrenzt. Nach zwei Jahren werden die Mitglieder des CEN gebeten, ihre Stellung
20、nahmen abzugeben, insbesondere ber die Frage, ob die CEN/TS in eine Europische Norm umgewandelt werden kann. Die CEN Mitglieder sind verpflichtet, das Vorhandensein dieser CEN/TS in der gleichen Weise wie bei einer EN anzukndigen und die CEN/TS verfgbar zu machen. Es ist zulssig, entgegenstehende na
21、tionale Normen bis zur Entscheidung ber eine mgliche Umwandlung der CEN/TS in eine EN (parallel zur CEN/TS) beizubehalten. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Bulgarien, Dnemark, Deutschland, der ehemaligen jugoslawischen Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankrei
22、ch, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, der Trkei, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern. EUR
23、OPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMIT EUROPEN DE NORMALISATIONManagement-Zentrum: Avenue Marnix 17, B-1000 Brssel 2012 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten.Ref.
24、 Nr. CEN ISO/TS 6579-2:2012 D(ISO/TS 6579-2:2012) CEN ISO/TS 6579-2:2012 (D) 2 Inhalt Seite Vorwort 3 Einleitung .4 1 Anwendungsbereich .5 2 Normative Verweisungen 5 3 Begriffe .6 4 Kurzbeschreibung .6 4.1 Allgemeines 6 4.2 Voranreicherung in einem nicht selektiven, flssigen Nhrmedium .6 4.3 Anreich
25、erung auf einem selektiven, halbfesten Medium 6 4.4 Selektive Ausplattierung und Identifizierung .6 4.5 Besttigung 7 4.6 Berechnung der wahrscheinlichsten Keimzahl 7 5 Nhrmedien und Seren .7 5.1 Allgemeines 7 5.2 Nhrmedien 7 6 Gerte und Glasgerte 7 7 Probenahme .8 8 Vorbereitung der Untersuchungspro
26、be 8 9 Durchfhrung .8 9.1 Einwaage, Erstverdnnung 8 9.2 Verdnnung und Voranreicherung in nicht selektivem, flssigem Nhrmedium .8 9.3 Selektive Anreicherung auf einem halbfesten Nhrmedium .9 9.4 Selektive Ausplattierung .9 9.5 Biochemische und serologische Besttigung . 10 10 Auswertung . 12 11 Unters
27、uchungsbericht . 13 Anhang A (informativ) Zusammensetzung und Herstellung von Nhrmedien und Chemikalien 14 Anhang B (informativ) Flieschema der Untersuchung . 22 Literaturhinweise . 23 DIN CEN ISO/TS 6579-2 (DIN SPEC 10052):2013-08CEN ISO/TS 6579-2:2012 (D) 3 Vorwort Dieses Dokument (CEN ISO/TS 6579
28、-2:2012) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Food products“ in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN gehalten wird. Es wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass einige Texte dieses Dokuments Patent
29、rechte berhren knnen. CEN und/oder CENELEC sind nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezglichen Patentrechte zu identifizieren. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Technische Spezifikation anzukndigen: Belg
30、ien, Bulgarien, Dnemark, Deutschland, die ehemaligen jugoslawische Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, Schweiz, Slowakei, Slowen
31、ien, Spanien, Tschechische Republik, Trkei, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. Anerkennungsnotiz Der Text von ISO/TS 6579-2:2012 wurde vom CEN als CEN ISO/TS 6579-2:2012 ohne irgendeine Abnderung genehmigt. DIN CEN ISO/TS 6579-2 (DIN SPEC 10052):2013-08CEN ISO/TS 6579-2:2012 (D) 4 Einleitung
32、Das beschriebene Verfahren beruht auf dem in Literaturhinweis 1 berichteten Verfahren. Das hier beschriebene Zhlverfahren bezieht sich auf ein miniaturisiertes Verfahren der wahrscheinlichsten Keimzahl (MPN-Verfahren). Bei diesem miniaturisierten MPN-Verfahren mit MSRV (modifiziertes halbfestes Medi
33、um nach Rappaport-Vassiliadis) ist das Volumen der untersuchten Erstverdnnung geringer als das Volumen in dem in ISO 6579:2002+Cor.1:2004 und ISO 6579:2002/Amd 1:2007 5 festgelegten Nachweis-verfahren. Aus diesem Grund ist die Sensibilitt (Empfindlichkeit) des miniaturisierten MSRV-Verfahrens gering
34、er als die Sensibilitt in diesen Nachweisverfahren (Literaturhinweis 1). Die Nachweisgrenze des miniaturisierten MSRV-Verfahrens betrgt etwa 1 KBE/g, kann jedoch in Abhngigkeit von der Salmonellen-Serovar und von der Matrix davon abweichen. Bei den zuvor angefhrten Nachweisverfahren betrgt sie blich
35、erweise 1 KBE/25 g (0,04 KBE/g). Bei Proben mit einer (sehr) geringen Anzahl von Salmonella spp. ( 1 KBE/g) ist es mglich, dass das miniaturisierte MSRV-Verfahren nicht hinreichend empfindlich ist. Wenn fr Proben, die wahrscheinlich eine derart geringe Anzahl enthalten (und zum Beispiel mit diesem m
36、iniaturisierten MSRV-Verfahren negativ getestet), ein quantitatives Ergebnis verlangt wird, ist es ratsam, die Zhlung unter Anwendung eines herkmmlichen“ MPN-Verfahrens (nicht miniaturisiert) durchzufhren. Bei anderen Proben kann das miniaturisierte MSRV-Verfahren gegenber dem herkmmlichen MPN-Verfa
37、hren von Vorteil sein, weil die Durchfhrung des miniaturisierten MPN-Verfahrens weniger Zeit in Anspruch nimmt und weniger Ressourcen bentigt (aufgrund geringer Mengen). DIN CEN ISO/TS 6579-2 (DIN SPEC 10052):2013-08CEN ISO/TS 6579-2:2012 (D) 5 WARNUNG Um die Gesundheit des Laborpersonals sicherzust
38、ellen, ist es wichtig, dass der Nachweis von Salmonellen nur in entsprechend ausgestatteten Laboratorien unter Aufsicht eines erfahrenen Mikrobiologen vorgenommen wird und dass das gesamte bebrtete Material mit grter Sorgfalt unschdlich beseitigt wird. Personen, die diese Internationale Technische S
39、pezifikation anwenden, sollten mit der blichen Laborpraxis vertraut sein. Diese Technische Spezifikation erhebt nicht den Anspruch, alle Sicher-heitsaspekte erschpfend zu behandeln, und wenn berhaupt, dann im Zusammenhang mit ihrer Anwendung. Es obliegt der Verantwortung des Anwenders, einen angemes
40、senen Sicherheits- und Gesundheitsschutz zu etablieren und somit den Vorgaben der nationalen gesetzlichen Bestimmungen zu entsprechen. 1 Anwendungsbereich Dieser Teil von ISO 6579 legt ein Verfahren zur Zhlung von Salmonella spp. in Produkten, die fr den menschlichen Verzehr oder als Futtermittel be
41、stimmt sind; Umgebungsproben im Bereich der Herstellung und Handhabung von Lebensmitteln; Tierkot; Umgebungsproben im Bereich der Primrproduktion; fest, und zwar durch Berechnung der wahrscheinlichsten Keimzahl (en: most probable number, MPN). Das Verfahren beruht auf einer Miniaturisierung der Schr
42、itte der Verdnnung, Voranreicherung und selektiven Anreicherung. Das selektive Anreicherungsmedium, modifiziertes halbfestes Medium nach Rappaport-Vassiliadis (MSRV), ist fr den Nachweis von beweglichen Salmonellen vorgesehen. Es ist nicht fr den Nachweis von unbeweglichen Salmonellen geeignet. Es i
43、st mglich, dass dieses Verfahren weniger fr Salmonella ser. Typhi und Samonella ser. Paratyphi geeignet ist. Das Verfahren ist nicht fr die Zhlung von Salmonella spp. in (sehr) gering kontaminierten Proben ( 1 KBE/g) geeignet. ANMERKUNG Bei den meisten der fr dieses Verfahren relevanten Matrices ist
44、 im Allgemeinen die Anzahl der unbeweglichen Salmonellen gering. In dieser Anmerkung sind Beispiele fr Proben aus der Primrproduktion genannt. Die unbeweglichen Salmonella-Biovaren von Salmonella Gallinarum (Salmonella Gallinarum biovar gallinarum und Salmonella Gallinarum biovar pullorum) scheinen
45、in Umgebungsproben nicht lange zu berleben und werden deshalb in Kot- oder Umgebungsproben (wie z. B. Staubproben) selten nachgewiesen (unabhngig vom Verfahren). Die Anzahl von anderen unbeweglichen Salmonella-Serovare in Kotproben scheint gewhnlich gering zu sein. Zum Beispiel waren in einer Studie
46、 4, in der etwa 1 000 Kotproben aus Legehennenbestnden und etwa 900 Kotproben aus Jungmastgeflgelbestnden analysiert wurden, weniger als 1 % der Gesamtanzahl der Proben in einer selektiven Bouillon positiv und auf MSRV-Medium gleichzeitig negativ (und vermutlich unbeweglich). hnliche Ergebnisse wurd
47、en in einer niederlndischen Studie mit etwa 3 200 Kotproben von Schweinen erhalten (unverffentlichte Daten). Andererseits wren im Fall der Studie in Literaturhinweis 4 fast 40 % der positiven Proben nicht nachgewiesen worden (d. h. falsch-negative Proben), wenn nur eine selektive Bouillon (in diesem
48、 Fall nach Rappaport-Vassiliadis) anstelle eines halbfesten Mediums verwendet worden wre. 2 Normative Verweisungen Die folgenden zitierten Dokumente sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen g
49、ilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). ISO 6887 (alle Teile), Microbiology of food and animal feeding stuffs Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs General requirements and guidance for micro-biological
