1、November 2007DEUTSCHE NORM Normenausschuss Medizin (NAMed) im DINPreisgruppe 14DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.ICS 07.100.10!,z3D“9871633www.din.deDDIN 58943-9Med
2、izinische Mikrobiologie Tuberkulosediagnostik Teil 9: Phnotypische Differenzierung von Tuberkulosebakterien; TextMedical microbiology Diagnostics of tuberculosis Part 9: Phenotypic differentiation of tubercle bacilli; text in German and EnglishMicrobiologie mdicale Diagnose de la tuberculose Partie
3、9: Diffrentiation phnotypique des bactries tuberculeuses;texte en allemand etanglaisAlleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 BerlinErsatz frDIN 58943-9:1993-10www.beuth.deGesamtumfang 18 Seitenin Deutsch und EnglischDIN 58943-9:2007-11 2 Inhalt Seite Page Vorwort 3 Einleitung. 4 1 Anw
4、endungsbereich . 5 2 Normative Verweisungen 5 3 Begriffe . 6 4 Anforderungen an die biologische Sicherheit 6 5 Differenzierung von Tuberkulosebakterien . 7 6 Beurteilung der Untersuchungsergebnisse . 8 7 Durchfhrung der Testmethoden. 8 7.1 Allgemeines 8 7.2 Charakteristisches Wachstum von Tuberkulos
5、ebakterien . 8 7.3 Niacinnachweis 9 7.3.1 Allgemeines 9 7.3.2 Niacinnachweis mit der Kaliumcyanid-Methode . 9 7.3.3 Niacinnachweis mit der Teststreifenmethode .10 7.4 Nachweis der Nitratreduktase 11 7.4.1 Allgemeines11 7.4.2 Nitratreduktasenachweis durch Azofarbstoff-Bildung .11 7.4.3 Nitratreduktas
6、enachweis mit der Teststreifenmethode .13 7.5 Untersuchung des Sauerstoffbedarfs im Lebek-Medium13 7.5.1 Kurzbeschreibung .13 7.5.2 Testmedium13 7.5.3 Beimpfung und Bebrtung .15 7.5.4 Ablesung.15 7.6 Prfung der BSH/TCH-Empfindlichkeit.15 7.7 Prfung der Pyrazinamid-Empfindlichkeit16 7.8 Prfung der Cy
7、closerin-Empfindlichkeit 16 8 Qualittssicherung 16 8.1 Laborinterne Qualittsprfung.16 8.2 Externe Qualittskontrolle 17 Literaturhinweise 18 Foreword3 Introduction .4 1 Scope.5 2 Normative references 5 3 Terms and definitions6 4 Requirements for biological safety.6 5 Differentiation of tubercle bacil
8、li 7 6 Interpretation of test results .8 7 Procedure of test methods8 7.1 General8 7.2 Characteristic growth of tubercle bacilli .8 7.3 Niacin test .9 7.3.1 General9 7.3.2 Niacin detection with the potassium cyanide method.9 7.3.3 Niacin detection using test strip 10 7.4 Nitrate reduction test.11 7.
9、4.1 General11 7.4.2 Detection of nitrate reductase by the generation of acid dye.11 7.4.3 Nitratre reductase detection using test strips 13 7.5 Oxygen preference with Lebek medium13 7.5.1 Principle 13 7.5.2 Test medium .13 7.5.3 Inoculation and incubation .15 7.5.4 Reading of results15 7.6 PMH/TCH s
10、usceptibility testing15 7.7 Pyrazinamide susceptibility testing16 7.8 Cycloserine susceptibility testing16 8 Quality control16 8.1 Intra-laboratory quality control.16 8.2 External quality control .17 Bibliography 18 DIN 58943-9:2007-11 3 Vorwort Foreword Diese Norm wurde vom ArbeitsausschussNA 063-0
11、5-03 AA Tuberkulosediagnostik“ desNormenausschusses Medizin (NAMed) imDIN Deutsches Institut fr Normung e.V. inZusammenarbeit mit dem Arbeitskreis Mykobakterien(AKM) erarbeitet. Der AKM ist ein Expertengremiumaus dem deutschsprachigen Raum, das u. a. Studien zur mykobakteriologischen Diagnostik koor
12、diniert. This standard has been prepared by the technical committee NA 063-05-03 AA “Diagnosis of Tuberculosis” of the Normenausschuss Medizin(NAMed) (Department for Medical Standards) at DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. (German Institute for Standardization) in cooperation with the expert co
13、mmittee on mycobacteria (AKM-Arbeitskreis Mykobakterien). The AKM is an expert committee based in the German speaking areas of Europe which coordinates, among other things, studies about the laboratory diagnosis of mycobacteria diseases. DIN 58943 Medizinische Mikrobiologie Tuber-kulosediagnostik be
14、steht aus (Beibltter werden nichtaufgefhrt): DIN 58943, Medical Microbiology Diagnosis of tuberculosis of (supplements are not listed): Teil 3: Kulturelle Methoden zum Nachweis vonMykobakterien Part 3: Detection of mycobacteria by culture mehtods Teil 7: Modifiziertes Lwenstein-Jensen-Kultur-medium
15、zur Anzchtung von Mykobakterien Part 7: Modified Lwenstein-Jensen medium fort he growth of mycobacteria Teil 8: Empfindlichkeitsprfung von Tuberkulose-bakterien gegen Chemotherapeutika Part 8: Methods for the determination of susceptibility of tubercle bacilli to chemo-therapeutic agents Teil 9: Phn
16、otypische Differenzierung von Tuber-kulosebakterien Part 9: Phenotypic differentiation of tubercle bacilli Teil 32: Mikroskopische Methoden zum Nach-weis von Mykobakterien Part 32: Detection of mycobacteria by micro-scopic methods Teil 40: Bewertungskriterien fr kulturelleSchnellverfahren zum Nachwe
17、is von Myko-bakterien Part 40: Evaluation criteria for fast culture procedures for the detection of mycobacteria nderungen Amendments Gegenber DIN 58943-9:1993-10 wurden folgendenderungen vorgenommen: The following amendments were made in comparison to DIN 58943-9:1993-10: a) Redaktionelle berarbeit
18、ung; a) Editorial revision; b) Anpassung der Festlegungen an dieberarbeiteten Methoden fr die Kultur(DIN 58943-3), die Mikroskopie (DIN 58943-32) und die Empfindlichkeitsprfung (DIN 58943-8); b) Updating of the specifications in accordance with the revised methods for culture (DIN 58943-3), microsco
19、pie (DIN 58943-32) and the suscep-tibility testing (DIN 58943-8); c) Aufnahme der Beschreibung des Streifentestszum Nachweis der Nitratreduktase; c) The description of the strip test as a proof of nitrate reductase has been included; d) Neuaufnahme der Prfung auf Pyrazinamid- und Cycloserin-Empfindl
20、ichkeit. d) Re-adoption of pyrazinamide and cycloserine susceptibility testing. Frhere Ausgaben Previous editions DIN 58943-9: 1986-08; 1993-10 DIN 58943-9: 1986-08; 1993-10 DIN 58943-33: 1980-11 DIN 58943-33: 1980-11 DIN 58943-9:2007-11 4 Einleitung Introduction Nachdem heute molekularbiologische T
21、ests zurDifferenzierung zwischen Tuberkulosebakterieneinerseits und nicht-tuberkulsen Mykobakterienandererseits zur Verfgung stehen, erwies es sichals erforderlich, die Norm so zu erweitern, dass mitden in dieser Norm beschriebenen Methodenverschiedene Arten von Tuberkulosebakterienidentifiziert wer
22、den knnen. Since molecular tests are now available for differentiating between tubercle bacilli and nontuberculous mycobacteria, it has become necessary to expand this standard in such a way that it will include methods which can be applied to identify different types of tubercle bacilli. Entspreche
23、nd dem heutigen Stand der Diagnostikerfolgt die Differenzierung zwischen Tuberkulose-Bakterien und nicht-tuberkulsen Mykobakterienzuverlssig und schnell mittels molekularbiologischerMethoden. Zur Identifizierung einiger Spezies undVarianten innerhalb der Tuberkulosebakterienknnen die in dieser Norm
24、beschriebenen Methodeneingesetzt werden. According to the present state of the laboratory diagnosis, a differentiation between tubercle bacilli and nontuberculous mycobacteria is done rapidly and reliably using molecular methods. To identify some species and variants within the genus of Mycobacteriu
25、m tubcerculosis complex (MTBC), the methods described in this standard can be applied. DIN 58943-9:2007-11 5 1 Anwendungsbereich 1 Scope Diese Norm gilt fr die phnotypische Differenzierungvon Tuberkulosebakterien (des Mycobacteriumtuberculosis-Komplexes). This standard is valid for the phenotypic di
26、fferentiation of tubercle bacilli (of the MTBC). 2 Normative Verweisungen 2 Normative references Die folgenden zitierten Dokumente sind fr dieAnwendung dieses Dokuments erforderlich. Beidatierten Verweisungen gilt nur die in Bezuggenommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungengilt die letzte Ausgabe
27、 des in Bezug genommenenDokuments (einschlielich aller nderungen). The following referenced documents areindispensable for the application of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including any amen
28、dments) applies. DIN 58943-3, Medizinische Mikrobiologie Tuber-kulosediagnostik Teil 3: Kulturelle Methoden zumNachweis von Mykobakterien DIN 58943-3, Medical microbiology Diagnosis of tuberculosis Part 3: Detection of mycobacteria by culture methods DIN 58943-8, Medizinische Mikrobiologie Tuber-kul
29、osediagnostik Teil 8: Empfindlichkeitsprfungenvon Tuberkulosebakterien gegen ChemotherapeutikaDIN 58943-8, Medical microbiology Diagnosis of tuberculosis Part 8: Methods for the determination of susceptibility of tubercle bacilli to chemo-therapeutic agents DIN 58943-32, Medizinische Mikrobiologie T
30、uber-kulosediagnostik Teil 32: Mikroskopische Metho-den zum Nachweis von Mykobakterien DIN 58943-32, Medical microbiology Diagnosis of tuberculosis Part 32: Detection of mycobacteria by microscopic methods DIN 58959-17, Medizinische Mikrobiologie Qualittsmanagement in der medizinischenMikrobiologie
31、Teil 17: Anforderungen an denEinsatz von Kontrollstmmen bei der Untersuchungvon Mykobakterien DIN 58959-17, Medical microbiology Quality management in medical microbiology Part 17: Requirements for the use of control strains for the examination of mycobacteria DIN EN 12128, Biotechnik Laboratorien f
32、rForschung, Entwicklung und Analyse Sicherheitsstufen mikrobiologischer Laboratorien,Gefahrenbereiche, Rumlichkeiten und technischeSicherheitsanforderungen DIN EN 12128, Biotechnology Laboratories for research, development and analysis Containment levels of microbiology laboratories, areas of risk,
33、localities and physical safety requirements DIN EN 12740, Biotechnik Laboratorien frForschung, Entwicklung und Analyse Leitfaden fr die Behandlung, Inaktivierung und Prfung vonAbfllen DIN EN 12740, Biotechnology Laboratories for research, development and analysis Guidance for handling, inactivating
34、and testing of waste DIN 58943-9:2007-11 6 3 Begriffe 3 Terms and definitions Fr die Anwendung dieses Dokuments gelten dieBegriffe nach DIN 58943-3 und DIN EN 12128 unddie folgenden Begriffe. For the purposes of this document, the terms and definitions given in DIN 58943-3, DIN EN 12128 and the foll
35、owing apply. 3.1 3.1 Tuberkulosebakterien Tubercle bacilli dem Mycobacterium tuberculosis-Komplex zuge-ordnete, genetisch eng verwandte Mykobakterien Genetically closely related mycobacteria belonging to the Mycobacterium tuberculosis complex ANMERKUNG Der M. tuberculosis-Komplex enthltverschiedene
36、Spezies (z. B. M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. micoti), Subspezies und Stmme (z. B. M. bovis BCG). NOTE The Mycobacterium tuberculosis complex contains different species (e.g. M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. micoti), subspecies and strains (e.g. M. bovis BCG). 3.2 3.2 Nicht-t
37、uberkulse Mykobakterien Nontuberculous mycobacteria Mykobakterien, die nicht dem Mycobacteriumtuberculosis-Komplex angehren und nicht M. lepraesind Mycobacteria, which do not belong to the Mycobacterium tuberculosis complex and are not Mycobacterium leprae 3.3 3.3 Reinkultur (zur Identifizierung von
38、 Tuberkulosebakterien) Pure culture (for identification of tubercle bacilli) Bakterienkultur, die mit hchstmglicher Wahrschein-lichkeit nur aus Tuberkulosebakterien einer Art bzw.eines Stammes besteht Culture of bacteria which with the highest possible probability consists exclusively of tubercle ba
39、cilli of one species respectively one strain 4 Anforderungen an die biologische Sicherheit 4 Requirements for biological safety Gem Biostoff-Verordnung 1 und TRBA 100 2handelt es sich bei den nachfolgend beschriebenenUntersuchungen um gezielte Ttigkeiten mitbiologischen Arbeitsstoffen der Risikogrup
40、pe 3. Siesind deshalb in Laboratorien durchzufhren, diemindestens den Anforderungen der Schutzstufe 3 nach Anhang II der Biostoff-Verordnung, TRBA 100 und der Sicherheitsstufe 3 (S 3) nach DIN EN 12128 entsprechen. According to the Regulation on Biological Agents 1 and TRBA 100 2, the investigations
41、 described in the following chapters consist of work handling biological agents of risk group 3. Therefore, the tests shall be carried out in laboratories which fulfil the requirements of protection level 3 as listed in the Appendix of the Regulation on Biological Agents II, and safety level 3 (S 3)
42、 according to DIN EN 12128, as a minimum. Die Beachtung dieser Norm entbindet nicht von derBefolgung gesetzlicher Vorschriften. Observance of this standard does not free from adherence to legal stipulations. DIN 58943-9:2007-11 7 5 Differenzierung von Tuberkulosebakterien 5 Differentiation of tuberc
43、le bacilli Als Voraussetzung zur Differenzierung innerhalb derTuberkulosebakterien sind folgende Identifizierungs-schritte durchzufhren: The following steps for identification shall be carried out as a prerequisite to differentiating within tubercle bacilli: a) Es muss festgestellt werden, dass es s
44、ich umsurefeste Stbchen handelt. Dazu muss vonjeder Kultur ein mikroskopisches Prparathergestellt und nach DIN 58943-32 gefrbt werden. a) It shall be verified that these are acid-fast rod-shaped bacilli. To do this, a smear microscopy shall be performed from each culture as specified in DIN 58943-32
45、. b) Es muss ein fr Tuberkulosebakterienspezifischer Genabschnitt z. B. durch Hybridisie-rungsverfahren oder Nukleinsuresequenzierung (siehe DIN 58969-62) nachgewiesen werden. b) A genetic sequence which is typical for tubercle bacilli shall be detected, e.g. by hybridisation or nucleic acid sequenc
46、ing (see DIN 58969-62). Innerhalb des Mycobacterium tuberculosis-Kom-plexes knnen mit den in Abschnitt 7 genannten Methoden mit ausreichender Sicherheit Mycobac-terium tuberculosis, M. bovis und M. bovis BCG differenziert werden. In Tabelle 1 sind die typischenReaktionsausflle angegeben. Within the
47、Mycobacterium tuberculosis complex, any of the methods listed in Section 7 can be used to differentiate Mycobacterium tuberculosis, M. bovisund M. bovis BCG with sufficient reliability. Table 1 shows the typical reactions. Tabelle 1 Unterscheidende Merkmale von Mycobacterium tuberculosis, M. bovis u
48、nd M. bovis BCG Table 1 Characteristics of Mycobacterium tuberculosis, M. bovis und M. bovis BCG Empfindlichkeitsprfung gegen Susceptibility testing for Spezies und Varianten Kolonie-morpho-logie Niacin-nachweis Nitrat-reduktase-Test Sauerstoff-bedarf im Lebek-Medium BSH/TCH Pyrazinamid Cycloserin S
49、pecies and variants Colony morpho-logy Niacin detection Nitrate reductase test Lebek medium oxygen test PMH/TCH Pyrazinamide Cycloserine M. tuberculosis eugon positiv positiv aerophilaresistent sensibelbsensibelbM. tuberculosis eugonic positive positive aerophilicaresistant susceptiblebsusceptiblebM. bovis bovis dysgon negativ negativ mikroaerophil sensibelcresistentdsensibel M. bovis bovis dysgonic negative negativ
