1、 DEUTSCHE NORM Januar 2008DIN 58942-6 ICS 07.100.10 Medizinische Mikrobiologie Kulturmedien Teil 6: Feste chromogene Kulturmedien; Text Deutsch und Englisch Medical microbiology Culture media Part 6: Solid chromogenic culture media; Text in German and English Microbiologie mdicale Milieux de culture
2、 Partie 6: Solide milieux de culture chromogniques; Texte en allemand et anglais Gesamtumfang 29 SeitenNormenausschuss Medizin (NAMed) im DIN DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. .Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berli
3、n gestattet. Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlin Preisgruppe 14 www.din.de www.beuth.de !$IGu“1383682DIN 58942-6:2008-01 2 Inhalt Seite Vorwort . 4 Einleitung 6 1 Anwendungsbereich 8 2 Normative Verweisungen. 8 3 Begriffe 8 4 Allgemeine Anforderungen an chromogene Kulturme
4、dien . 10 5 Besondere Anforderungen an chromogene Selektivkulturmedien fr Salmonella spp. 10 6 Besondere Anforderungen an chromogene Selektivkulturmedien fr Listeria monocytogenes 10 7 Besondere Anforderungen an chromogene Selektivkulturmedien fr Enterobacteriaceae. 10 8 Besondere Anforderungen an c
5、hromogene Selektivkulturmedien fr E. coli O157:H7 12 9 Besondere Anforderungen an chromogene Kulturmedien in der mikrobiologischen Diagnostik von Harnwegsinfektionen 12 10 Besondere Anforderungen an chromogene Selektivkulturmedien in der mikrobiologischen Diagnostik von Methicillin-resistenten Staph
6、ylococcus aureus (MRSA) . 12 11 Besondere Anforderungen an chromogene Selektivkulturmedien in der mikrobiologischen Diagnostik von Vancomycin-resistenten Enterococcus spp. (VRE) 12 12 Besondere Anforderungen an chromogene Selektivkulturmedien in der mikrobiologischen Diagnostik von Candida spp. . 12
7、 13 Prfverfahren 12 13.1 Allgemeines. 12 13.2 Prfmikroorganismen (Kontrollstmme) . 14 13.2.1 Auswahl der Kontrollstmme 14 13.2.2 Herstellung der Gebrauchskultur 14 13.2.3 Inkubationsbedingungen . 16 13.3 Prfung auf Sensitivitt . 16 13.4 Prfung auf Selektivitt 16 13.5 Ablesbarkeit, Koloniedichte 18 1
8、3.6 Quantitatives Ausplattierungsverfahren 18 13.6.1 Durchfhrung 18 13.6.2 Berechnung. 18 13.6.3 Bewertung der Ergebnisse 18 Anhang A (informativ) Empfohlene Kontrollstmme zur Prfung ausgewhlter chromogener Kulturmedien auf sensitive und selektive Eigenschaften 20 Literaturhinweise . 28 DIN 58942-6:
9、2008-01 3 Contents Page Foreword .5 Introduction.7 1 Scope9 2 Normative references9 3 Terms9 4 General requirements for chromogenic culture media .11 5 Special requirements for chromogenic selective culture media used for the detection of Salmonella spp11 6 Special requirements for chromogenic selec
10、tive culture media for the detection of Listeria monocytogenes .11 7 Special requirements for chromogenic selective culture media used for the detection of Enterobacteriaceae.11 8 Special requirements for chromogenic selective culture media used for the detection of E. coli O157:H713 9 Special requi
11、rements for chromogenic selective culture media used for the microbiological diagnosis of urinary tract infections .13 10 Special requirements for chromogenic selective culture media used for the microbiological diagnostics of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) .13 11 Special require
12、ments for chromogenic selective culture media used for the microbiological diagnostics of vancomycin-resistent Enterococcus spp. (VRE)13 12 Special requirements for chromogenic selective culture media used for the microbiological diagnostics of Candida spp13 13 Test procedures.13 13.1 General .13 13
13、.2 Test microorganisms (control strains)15 13.2.1 Selection of control strains 15 13.2.2 Preparation of working cultures 15 13.2.3 Incubation conditions .17 13.3 Sensitivity testing17 13.4 Selectivity testing17 13.5 Readability, density of colonies.19 13.6 Quantitative plating procedure 19 13.6.1 Pr
14、ocedure.19 13.6.2 Calculation .19 13.6.3 Evaluation of results .19 Annex A (informative) Recommended control strains for testing the sensitive and selective properties of selected chromogenic culture media.21 Bibliography28 DIN 58942-6:2008-01 4 Vorwort Dieses Dokument wurde vom NA 063-05-13 AA Kult
15、urmedien“ des Normenausschusses Medizin (NAMed) im DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. erarbeitet. DIN 58942, Medizinische Mikrobiologie Kulturmedien besteht aus folgenden Teilen (Beibltter sind nicht aufgefhrt): Teil 2: Gebrauchsfertige Blutkultursysteme Teil 3: Eintauchkultursysteme fr die mik
16、robiologische Urinuntersuchung Teil 4: Transportsysteme fr bakterienhaltiges Untersuchungsgut Teil 5: Anforderungen und Auswahl von Kulturmedien fr die Stuhldiagnostik Teil 6: Chromogene Kulturmedien DIN 58942-6:2008-01 5 Foreword This Standard has been prepared by Technical Committee NA 063-05-13 A
17、A Culture media“ of the Normenausschuss Medizin (Medical Standards Committee). DIN 58942, Medical Microbiology Culture media consists of the following parts (Supplements are not listed): Part 2: Ready-to-use blood culture systems Part 3: Dip slides for microbiological urine analysis Part 4: Transpor
18、t systems for specimens containing bacteria Part 5: Requirements and selection of culture media for the diagnostics of stool specimens Part 6: Chromogenic culture media DIN 58942-6:2008-01 6 Einleitung Chromogene Kulturmedien, die eine vorlufige Identifizierung von Bakterien- oder Pilzkolonien anhan
19、d definierter farblicher und morphologischer Charakteristika untersttzen, knnen die mikrobiologische Diagnostik beschleunigen und die visuelle Untersuchung fester Nhrbden auf das Vorkommen bestimmter pathogener Mikroorganismen auch fr weniger erfahrenes Laborpersonal erleichtern. Deshalb werden chro
20、mogene Kulturmedien neben den konventionellen Universal (z. B. Blutagar) und Selektivmedien (z. B. MacConkey-Agar) zunehmend in der klinisch-mikrobiologischen Routinediagnostik eingesetzt. Die biochemi-schen Reaktionsprodukte, auf denen die Funktionsfhigkeit solcher Kulturmedien basieren, entstehen
21、in der Regel als Folge spezifischer enzymatischer Aktivitten bestimmter Mikroorganismen, die ihrerseits von der genauen Einhaltung definierter Bedingungen (z. B. Temperatur, pH-Wert, Substratkonzentrationen) abhngen. Diese speziellen Gegebenheiten begrnden die Notwendigkeit definierter Leistungsanfo
22、rderungen, die an chromogene Kulturmedien zu stellen sind. DIN 58942-6:2008-01 7 Introduction Chromogenic culture media used for the preliminary identification of bacterial and fungal colonies by means of defined colour and morphological characteristics can accelerate microbiological diagnostic proc
23、edures and facilitate visual examination of solid media for particular pathogen microorganisms, even for less experienced laboratory personnel. Such culture media are therefore increasingly being used in routine microbiological diagnostics, in addition to the conventional universal media (e.g. blood
24、 agar) and selective media (e.g. MacConkey-Agar). The biochemical reaction products which are necessary for the efficiency of chromogenic culture media are normally the result of the enzymatic activity of certain microorganisms, which in turn depends greatly on the precise maintenance of specific co
25、nditions (e.g. temperature, pH-value, concentrations of substrate). For this reason there is a need for well-defined performance requirements to be met by chromogenic culture media. DIN 58942-6:2008-01 8 1 Anwendungsbereich Diese Norm gilt fr chromogene Kulturmedien. 2 Normative Verweisungen Die fol
26、genden zitierten Dokumente sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). DIN EN 1659, In-vitro-Diagnostik
27、/Diagnostika Kulturmedien fr die Mikrobiologie Begriffe DIN EN 12322, In-vitro-Diagnostika Kulturmedien fr die Mikrobiologie Leistungskriterien fr Kultur-medien 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gelten die Begriffe nach DIN EN 1659, DIN EN 12322 und die folgenden Begriffe. 3.1 chromogenes
28、 Kulturmedium Kulturmedium, das ein oder mehrere chromogene Substrate enthlt ANMERKUNG Sie untersttzen die Identifizierung von Bakterien oder Pilzen anhand definierter farblicher und morpho-logischer Charakteristika (kulturmediumtypisches Wachstum). Die biochemischen Reaktionen, auf denen die Funkti
29、ons-fhigkeit solcher Kulturmedien basieren, laufen in der Regel als Folge spezifischer enzymatischer Aktivitten bestimmter Bakterien oder Pilze ab, die ihrerseits von der genauen Einhaltung definierter Bedingungen (z. B. Temperatur, pH-Wert, Substratkonzentrationen) abhngen. 3.2 chromogenes Selektiv
30、kulturmedium chromogenes Kulturmedium, das zustzlich selektiv wirksame Bestandteile enthlt, die in klinischen Unter-suchungsmaterialen enthaltene Begleitflora graduell hemmen und damit den gezielten Erregernachweis untersttzen 3.3 chromogenes Substrat Substrat, das eine chromophore Gruppe und ein vo
31、n den Bakterien oder Pilzen verwertbares Substrat enthlt; nach Spaltung des chromogenen Substrats wird das Chromophor frei und ein farbiges Endprodukt sichtbar 3.4 kulturmediumtypisches Wachstum definierte morphologische und farbliche Ausprgung der Kolonien und gegebenenfalls Vernderungen des Kultur
32、mediums 3.5 Zielmikroorganismus Mikroorganismus, der bei Verwendung eines chromogenen Kulturmediums nachgewiesen werden muss 3.6 abzugrenzender Mikroorganismus Mikroorganismus, der bei Verwendung eines chromogenen Kulturmediums vom Zielmikroorganismus ein-deutig abgrenzbar sein muss DIN 58942-6:2008
33、-01 9 1 Scope This standard applies to chromogenic culture media. 2 Normative references The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced docum
34、ent (including any amendments) applies. DIN EN 1659, In vitro diagnostic systems Culture media for microbiology Terms and definitions DIN EN 12322, In vitro diagnostic medical devices Culture media for microbiology Performance criteria for culture media 3 Terms For the purposes of this standard, the
35、 terms and definitions given in DIN EN 1659 and DIN EN 12322 and the following apply. 3.1 chromogenic culture medium culture medium containing one or more chromogenic substrates NOTE Chromogenic culture media facilitate the identification of bacteria or fungi by means of defined colour and morpholog
36、ical characteristics (culture medium typical growth). The biochemical reaction products which are necessary for the efficiency of chromogenic culture media are normally the result of the enzymatic activity of certain microorganisms, which in turn depends greatly on the precise maintenance of specifi
37、c conditions (e.g. temperature, pH-value, concentrations of substrate). 3.2 chromogenic selective culture medium chromogenic culture medium which also contains selective compounds that gradually inhibit accompanying flora occurring in clinical test materials and thus support the precise detection of
38、 pathogens 3.3 chromogenic substrate substrate containing a chromophore group and a substrate utilizable by bacteria or fungi; after splitting the chromogenic substrate, the chromophore is released and a coloured end product becomes visible 3.4 culture medium typical growth defined morphological and
39、 colour characteristics of colonies and, where applicable, changes in the culture medium 3.5 target microorganism microorganism to be detected using a chromogenic culture medium 3.6 other microorganism to be identified microorganism to be identified using a chromogenic culture medium which is clearl
40、y distinguishable from the target microorganism DIN 58942-6:2008-01 10 4 Allgemeine Anforderungen an chromogene Kulturmedien Chromogene Kulturmedien mssen geeignet sein, entsprechend den jeweils angegebenen Leistungskriterien, die Kultivierung und vorlufige Identifizierung medizinisch relevanter Bak
41、terien oder Pilze aus klinischen Untersuchungsmaterialen oder aus mikrobiologischen Anreicherungs- oder Selektivkulturen sicherzustellen. Die Koloniefarbe und Koloniemorphologie der Zielmikroorganismen und der unerwnschten bzw. abzu-grenzenden Mikroorganismen mssen eine sichere Unterscheidung ermgli
42、chen. Durch das chromogene Substrat zum Nachweis bestimmter Mikroorganismen drfen andere Pathogene, die im jeweiligen Unter-suchungsverfahren vorkommen knnen, nicht am Wachstum gehindert werden. 5 Besondere Anforderungen an chromogene Selektivkulturmedien fr Salmonella spp. Chromogene Selektivkultur
43、medien zum Nachweis von Salmonellen aus Stuhlproben oder mikrobiologischen Anreicherungskulturen mssen geeignet sein, nach Inkubation bei (36 1) C ber 20 h bis 24 h, das kultur-medientypische Wachstum der Subspezies I, II, IV und VI von Salmonella enterica sowie von S. bongori zu ermglichen. Bei Ver
44、dacht auf Salmonella Typhi, S. Gallinarum und S. Pullorum kann eine verlngerte Inkubation (bis 48 h) erforderlich sein. Die Kulturmedien mssen weiterhin eine hohe Wiederfindungsrate der gesuchten Salmonellen und eine sichere Abtrennung der stuhlspezifischen oder sonstigen Begleitflora ermglichen. Si
45、e mssen weiterhin geeignet sein, Salmonellen auch nach Anreicherung in selektiven Anreicherungsmedien, z. B. Rappaport-Vassiliadis-Bouillon, nachzuweisen. Die Agglutinierbarkeit (O-Antigene, omni/polyvalent) sowie die bio-chemische Differenzierung einer klar abgegrenzten Kolonie direkt vom chromogen
46、en Nhrboden muss mglich sein. Bei Verdacht auf Salmonellen der Subspecies IIIa und IIIb mssen dafr ausgewiesene Kultur-medien eingesetzt werden. 6 Besondere Anforderungen an chromogene Selektivkulturmedien fr Listeria monocytogenes Chromogene Selektivkulturmedien zum Nachweis von Listerien direkt au
47、s klinischen Materialien oder mikro-biologischen Anreicherungskulturen mssen geeignet sein, nach Inkubation bei (36 1) C ber 20 h bis 24 h, das kulturmedientypische Wachstum von L. monocytogenes und L. ivanovii sicherzustellen. Nach 48 h Inkubation bei (36 1) C muss zudem eine korrekte Zhlung der Ko
48、lonien mit typischer Morphologie mglich sein. Andere Listerien und Mikroorganismen der materialspezifischen Begleitflora mssen abgrenzbar sein. 7 Besondere Anforderungen an chromogene Selektivkulturmedien fr Enterobacteriaceae Chromogene Selektivkulturmedien zum Nachweis von Enterobacteriaceae aus k
49、linischen Materialien oder mikrobiologischen Anreicherungskulturen mssen, nach Inkubation bei (36 1) C ber 20 h bis 24 h, das kulturmedientypische Wachstum von klinisch relevanten Enterobacteriaceae, wie z. B. Escherichia coli, Enterobacter sp., Pantoea agglomerans, Klebsiella sp., Proteus sp., Morganella sp., Providencia sp., Citrobacter sp., Serratia sp. sowie Hafnia alvei, sicherstellen. Die Agglutination (O-Antigene, omni/polyvalent) sowi
