1、 中华人民共和国国家标准 茶 游离氨基酸总量测定 GB/T 831487 T ea- D et erm in at ion of f r ee am in o acid s con t en t 本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。 茶叶水浸出物中具有-氨基的有机酸且呈游离状态存在者,均称茶叶游离氨基酸。 1 原理 氨基酸在 pH8.0 的条件下与茚三酮共热,形成紫色络合物,用分光光度法在特定的波 长下测定其含量。 2 仪器和用具 实验室常规仪器及下列各项: 2.1 分析天平: 感量 0.0001g。 2.2 分光光度仪。 3 试剂和溶液 3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液: 按 GB 831
2、387茶 茶多酚测定中 3.2的规定,配制 1/15M磷酸氢二钠(3.2.1)和 1/15M磷酸二氢钾(3.2.2)溶液。然后取 1/15M的磷酸氢二钠溶液 95mL 和 1/15M磷酸二氢 钾溶液 5mL,混匀。 3.2 2茚三酮溶液: 称取水合茚三酮(纯度不低于 99)2g,加 50mL水和 80mg氯化亚锡 (GB63878,分析纯),搅拌均匀。分次加少量水溶解,放在暗处,静置一昼夜,过滤后加水 定容至 100mL。 3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液: 称取 100mg茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于 99)溶于 100mL水 中,作为母液。 准确吸取 5mL母液,加水定容至 50mL作为工作液(
3、1mL含茶氨酸或谷氨酸 0.1 mg)。 4 操作方法 4.1 取样 按 GB 830287茶 取样规定取样。 4.2 试样的制备 按 GB 830387茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定的规定,制备试样。 4.3 测定步骤 4.3.1 试液的制备 按 GB 830587茶 水浸出物测定中 3.4.1的规定,制备试液。 4.3.2 测定 准确吸取试液(4.3.1)1mL,注入 25mL容量瓶中,加 0.5mLpH8.0 缓冲液(3.1)和 0.5mL 2茚三酮溶液(3.2),在沸水浴中加热 15min。待冷却后加水定容至 25mL。放置 10min后, 用 5mm比色杯,在 570nm 处,
4、以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。 4.3.3 氨基酸定量标准曲线的制作 分别吸取 0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL氨基酸工作液(3.3)于一组 25mL容量瓶中, 各加水 4mL、茚三酮溶液(3.2) 0.5mL 和缓冲液(3.1) 2mL,在沸水浴中加热 15min,冷却后 加水定容至 25mL,按 4.3.2的操作测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨 酸浓度绘制标准曲线。 注: 制作标准曲线时,所用蒸馏水,必须是二次蒸馏水。 5 结果计算 5.1 计算方法和公式 茶叶中游离氨基酸含量,以干态质量百分率表示,按下式计算: C L1 1000 L2 游
5、离氨基酸总量() 100 M m 式中: L1试液总量,mL; L2测定用试样量,mL; M 试样量,g; C 根据 4.3.2测定的吸光度从标准曲线上查得的茶氨酸的 mg 数; m试样干物质含量百分率,。 如果符合重复性(5.2)的要求,取两次测定的算术平均值作为结果。 5.2 重复性 同一样品进行两次测定,测定值之差,每 100g试样不得超过 0.1g。 6 结果报告 试验报告应包括下列内容: a. 使用的方法; b . 测定的结果(取小数点后一位); c. 本标准中末规定的或另加的操作; d . 试样的名称和产地; e. 试验日期,操作人员。 附加说明: 本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出。 本标准由中国农业科学院茶叶研究所、商品部杭州茶叶加工研究所、上海进出口商品 检验局负责起草。 本标准主要起草人阮宇成、钟萝、严家辉、刘维华、周卫龙、王济安。 中华人民共和国商业部 1987-11-19 批准 1988-07-01实施
