1、ICS 67050X 04 a雪中华人民共和国国家标准GBT 23209-2008奶粉中叶黄素的测定液相色谱一紫外检测法Determination of lutein in milk powder-HPLC。UV method2008-12-31发布 200905-0 1实施宰瞀粥紫瓣警糌瞥翼发布中国国家标准化管理委员会促1”刖 昌GBT 23209-2008本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归IZl。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陈波、谢丽琪、林燕奎、靳保辉、吴
2、凤琪、庞国芳。奶粉中叶黄素的测定液相色谱一紫外检测法GBT 23209-20081范围本标准规定了奶粉中叶黄素(1utein)的高效液相色谱测定方法。本标准适用于奶粉中叶黄素的测定。本标准的方法检出限为005 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(GBT 637912004
3、，IS0 57251：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 63792 z004，ISO 57252：1994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理奶粉中叶黄素用丙酮提取，浓缩后用高效液相色谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料水为符合GBT 6682规定的一级水。41甲醇：色谱纯。42甲基叔丁基醚：色谱纯。43二氯甲烷：色谱纯。44丙酮：优级纯。45 2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)：纯度99。46含01BHT的
4、丙酮溶液：称取0500 g BHT(45)于500 mL容量瓶中，用丙酮(44)溶解并定容至刻度。47叶黄素：纯度962。48标准储备溶液(1 000 mgL)：称量100 mg标准物质，用二氯甲烷(43)溶解并定容至10 mL容量瓶，在一80冰箱中避光保存。49标准中间溶液：吸取标准储备溶液于i00 mL容量瓶，用甲醇定容至刻度，充分混匀，配制成20 mgL标准中间溶液。将标准中间溶液分装于液相小瓶中，在一80冰箱中避光保存。410标准工作溶液：根据灵敏度和使用需要，用丙酮溶液(46)稀释成标准工作溶液，此标准工作溶液需于分析前临时配制。411滤膜：02 t*m。GBT 2320920085
5、仪器51高效液相色谱仪，配紫外检测器。52分析天平：感量01 mg。53液体混合器。54氮气浓缩仪。55低温离心机：转速不低于5 000 rmin，可制冷到一4。6样品保存将奶粉样品于常温下密封保存。7测定步骤71提取准确称取奶粉05 g，精确至0001 g，置于50 mL聚丙烯离心管中。在避光条件下，加入10 mL丙酮溶液(46)，振荡提取约3 rain。以5 000 rmin低温离心5 min，移取上清液至一干净的15 mL离心管，于30氮吹浓缩至少于1 mL。用丙酮溶液(46)定容至1 mL，在液体混合器上充分振荡混匀，样液过02 pm滤膜，用液相色谱仪测定，外标法定量。72测定条件72
6、1液相色谱参考条件a)色谱柱：YMC“Carotenoid，5”m，250 mm46 mm(内径)或相当者；b)柱温：25；c)流速：10 mLmin；d)检测波长：445 nm；e)进样量：50“L；f)梯度洗脱条件见表1。表1 液相色谱梯度洗脱条件时间rain 甲醇 甲基叔丁基醚0 85 15lO 78 2211 10 9015 10 90722液相色谱测定用叶黄素标准工作溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中叶黄素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，叶黄素的参考保留时间为609 rain。叶
7、黄素的奶粉基质加标液相色谱图参见图A1。本标准平均回收率的试验数据参见附录B。73平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。74空白试验除不加标外，均按上述分析步骤进行。28结果计算外标法定量，按式(1)计算试样中叶黄素含量：Xc署揣GBT 23209-2008式中：x样品中待测组分的含量，单位为毫克每千克(mgkg)；c从标准工作曲线得到的试样溶液中待测组分的浓度，单位为毫克每升(ragL)V试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确
8、定的，其重复性和再现性的值以95的可信度来计算。92重复性在重复性试验条件下，试样中叶黄素含量在10 mgkg500 mgkg，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，重复性限按式(2)计算：lg r一0719 5 lgm 1171 2 (2)式中：m两次测定值的平均值，单位为毫克每千克(mgkg)。如果两次测定值的差值超过重复性限r，则应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性试验条件下，试样中叶黄素含量在10 mgkg500 mgkg，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，再现性限按式(3)计算：R一0121 5 m+0003 1 (3)式中：m两次测定值的平均值，单位为毫克每千克(mgkg)。3GBT 23209-2008响应值4附录A(资料性附录)叶黄素的奶粉基质加标液相色谱圈叶黄素的奶粉基质加标液相色谱图见图A1。图A1 叶黄素的奶粉基质加标液相色谱图9 train附录B(资料性附录)回收率本标准中叶黄素添加浓度及平均回收率的试验数据在添加量为50 pgkg时，平均回收率为962；在添加量为100 pgkg时，平均回收率为971；在添加量为200 pgkg时，平均回收率为965；在添加量为400 pgkg时，平均回收率为939；在添加量为50 mgkg时，平均回收率为984。GBT 23209-2008
