1、ICS 67050X 04 鳕园中华人民共和国国家标准GBT 22942-2008蜂蜜中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的测定液相色谱一串联质谱法Determination of cefazolin，cephapirin，cephalexin，cefaionium，cefquinome residues in honey-LC-MS-MS method200812-31发布 200905-0 1实施丰瞀徽鬻瓣譬糌赞星发布中国国家标准化管理委员会厘们月U 昌本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出
2、入境检验检疫局。本标准主要起草人：李学民、母健、曹彦忠、刘晓茂、姜宁、庞国芳。GBT 22942-20081范围蜂蜜中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 22942-2008本标准规定了蜂蜜中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于蜂蜜中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的测定。本标准的方法检出限：头孢唑啉为10 pgkg；头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟为20 pgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，
3、其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第l部分：总则与定义(GBT 637912004，ISO 57251：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 63792 2004，ISO 5725 2：1 994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 2008，ISO 3696
4、：1987，MOD)3原理试样中五种头孢菌素类药物残留，用磷酸二氢钠缓冲溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。41水：GBT 6682，一级。42甲醇：色谱纯。43乙腈：色谱纯。44磷酸二氢钠(NaH。PO。)。45氢氧化钠。46乙酸。47 5 molL氢氧化钠溶液：称取20 g氢氧化钠(45)，用水溶解，定容至100 mL。48 015 molL磷酸二氢钠缓冲溶液：称取180 g磷酸二氢钠(44)，用水溶解，定容至1 000 mL，然后用氢氧化钠溶液(47)调节至pH一85。49标准物质：头孢唑啉(cAs：25953199
5、)、头孢匹林(cAs：24356 60 3)、头孢氨苄(CAs：16549567)、头孢洛宁(CAS：55752卜3)、头孢喹肟(CAS：118443893)，纯度99。410 10 mgmL五种头孢菌素标准储备溶液：准确称取每种标准物质(49)，分别用水配制成浓度为1GBT 22942-200810 mgmL的标准储备溶液。储备液贮存在一18冰柜中。411 五种头孢菌素标准混合工作溶液：根据需要吸取适量的每种头孢菌素标准储备溶液(410)，用空白样品提取液制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。412固相萃取柱：Oasis HLB固相萃取柱或相当者，500 mg，6 mL。使用前依次用5 mL甲
6、醇(42)、5 mL水(41)和10 mL磷酸二氢钠缓冲溶液(48)预处理，保持柱体湿润。413滤膜：02,am。5仪器51液相色谱一串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。52分析天平：感量01 mg、001 g。53固相萃取真空装置。54贮液器：50 mL。55微量注射器：25 pL，100 pL。56刻度样品管：5 mL，精度为01 mL。57氮气浓缩仪。6试样制备与保存61试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出05 kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。62试样
7、的保存将试样于常温下保存。7测定步骤71试样溶液的制备称取5 g试样(精确到001 g)置于150 mL三角瓶中，加入25 mL磷酸二氢钠缓冲溶液(48)，溶解样品，混匀，用氢氧化钠溶液，调节至pH一85。把样品提取液移至下接Oasis HLB固相萃取柱(412)的贮液器中，以3 mLmin的流速通过固相萃取柱，先用5 mL磷酸二氢钠缓冲溶液洗涤三角瓶并过柱，再用2mL水洗柱，弃去全部流出液。用2mL乙腈洗脱，收集洗脱液于刻度样品管(56)中，在40氮气吹干，用2 mL水溶解残渣，摇匀后，过02zm滤膜(413)，供液相色谱一串联质谱仪测定。按照上述操作步骤制备空白样品提取液。72测定条件72
8、1液相色谱参考条件a)色谱柱：ZORBAX SB-C18，35 pm，150 miD-21 mm(内径)或相当者；b) 流动相梯度程序及流速见表I；c)柱温：30；d)进样量：20 pL。表1 流动相梯度程序及流速时间min 流速(,uLmin) 水(含01乙酸) 乙腈蹦o 00 200 95 0 5 0z 00 200 950 50表1(续)GBT 22942-2008时间min 流速(t-Lmin) 水(含01乙酸) 乙腈201 200 400 600800 200 40 0 600801 200 950 5 01500 200 950 5，0722质谱参考条件a)离子源：电喷雾离子源；b
9、)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测；d)电喷雾电压：5 500 V；e)雾化气压力：0055 MPa；f)气帘气压力：0079 MPa；g)辅助气流速：6 Lmin；h)离子源温度：400；i)定性离子对、定量离子对和碰撞气能量(cE)、去簇电压(DP)见表2。表2五种头孢菌素的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量、去簇电压定性离子对 定量离子对 碰撞气能量 去簇电压化合物中文名称 化合物英文名称(优) (卅2) v v456324 17头孢唑啉cefazolin 456324 504561 56 24424292 23头孢匹林 cephaplrlrl 424292 4542415
10、2 34348158 14头孢氨苄 cephalexin 348158 40348174 22459152 29头孢洛宁 cefalonium 459152 3S459123 18529134 2l头孢喹肟 529134 49529396 】973液相色谱一串联质谱测定731定性测定选择每种待测物质的1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在25之内；样品谱图中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准溶液的谱图中离子相对丰度相比，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏
11、差 以表示相对离子丰度K K50 20K50 10K20 K10 J允许的最大偏差 20 fl=25 30 士50 IGBT 22942-2008732定量测定用基质标准混合工作溶液(411)分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作瞌线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中五种头孢菌素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，五种头孢菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图A1。本方法的添加回收率数据参见附录B中的表B1。74平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。75空白试验除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。8结果计算试
12、样中五种头孢菌素残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算xc筹揣式中：x试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(pgkg)；c一从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)y试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792规定确定的，其重复性和再现性的值是以95的可信度来计算。92重复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，试样中五种头孢菌素添加浓度范围及重复性方程见表4。表4 五种头孢菌素
13、添加浓度范围及重复性限和再现性限方程单位为微克每千克化合物名称 添加浓度范围 重复性限r 再现性限R头孢唑啉 10-100 lg r=0946 5 lg0 725 5 lgR一0956 9lgm一0 617 6头孢匹林 2020 19 r=O946 6lg0 765 6 lgR一0968 0Igm 06771头孢氨苄 2020 lg r-0942 8lg0 762 8 lgR-0949 4lgm一0645 2头孢洛宁 2 020 r一0135 7 m+0132 6 lgR一0 906 6 lgm一0621 1头孢喹肟 2 020 Ig r一0942 1 lgm O761 0 lgR一0928
14、0 lgm 0688 5注：m为两次测定结果的算术平均值。如果两次测定值的差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，试样中五种头孢菌素添加浓度范围及重复性方程见表4。4附录A(资料性附录)五种头孢菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图五种头孢菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图A1。8 38测型曾划趔蜃旨掣搓蜃GBT 22942-2008rain头孢匹林mina皇划翅譬导蚓趟俘rain头孢洛宁min图A1 五种头孢菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图rainGBT 22942-2008附录B(资料性附录)回 收 率五种头孢菌素添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B1。表B1 五种头孢菌素添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称 添加浓度(pgkg) 平均回收率10o 85620 o 891头孢唑啉400 896100 O 91720 86740 924头孢匹林80 95 420 0 93，82 0 8424 0 95 3头孢氨苄8 0 98120 0 9432 0 87 24，0 917头孢洛宁80 102 5200 94 120 93740 965头孢喹肟80 915200 979
