1、GB 1308791 1 主题内容与适用范围 本标准规定了配合饲料和菜籽饼粕中异硫氰酸酯的测定方法。 本标准适用于配合饲料（包括混合饲料）和菜籽取油后的饼粕中异硫氰酸酯的测定。 第一篇 气相色谱法 2 原理 配合饲料中存在的硫葡萄糖苷，在芥子酶作用下生成相应的异硫氰酸酯，用二氯甲烷提取后再用气相色谱进行测定。 3 试剂和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。 3.1 二氯甲烷或氯仿（GB 682）。 3.2 丙酮（GB 686）。 3.3 pH7缓冲液：市售或按下法配制。量取35.3mL0.1molL柠檬酸（C6H8O7H2O）溶液，置入200mL定容瓶中，用
2、0.2molL磷酸氢二钠（Na2HPO4 12H2O，GB 1263）稀释至刻度，配制后检查pH值。 3.4 无水硫酸钠。 3.5 酶制剂：将白芥（ Sinapis alba L.）种子（72h内发芽率必须大于85，保存期不超过两年）粉碎后，称取100g，用300mL丙酮（3.2）分10次脱脂，滤纸过滤，真空干燥脱脂白芥子粉，然后用400mL水分两次提取脱脂粉中的芥子酶，离心，取上层混悬液体，合并，于合并混悬液中加入400mL丙酮（3.2）沉淀芥子酶，弃去上清液，用丙酮（3.2） 洗沉淀5次，离心，真空干燥下层沉淀物，研磨成粉状，装入密闭容器中，低温保存备用，此制剂应不含异硫氰酸酯。 3.6
3、丁基异硫氰酸酯内标溶液：配制0.100mgmL丁基异硫氰酸酯CH3（CH2）3NCS二氯甲烷或氯仿（3.1）溶液，贮于4，如试样中异硫氰酸酯含量较低，可将上述溶液稀释，使内标丁基异硫氰酸酯峰面积和试样中异硫氰酸酯峰面积相接近。 4 仪器、设备 4.1 气相色谱仪：具有氢焰检测器。 4.2 氮气钢瓶：其中氮气纯度为99.99。 4.3 微量注射器：5 L。 4.4 分析天平：感量0.000 1g。 4.5 实验室用样品粉碎机。 页码，1/7GB 13087912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130870A.htm4.6 振荡器（往复，200次min）
4、。 4.7 具塞锥形瓶，25mL。 4.8 离心机。 4.9 离心试管：10mL。 5 试样制备 采集具有代表性的配合饲料样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过1mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。 6 测定步骤 6.1 试样的酶解 称取约2.2g试样于具塞锥形瓶（4.7）中，精确到0.001g，加入5mLpH7缓冲液（3. 3），30mg酶制剂（3.5），10mL丁基异硫氰酸酯内标溶液（3.6），用振荡器（4.6）振荡2h，将具塞锥形瓶（4.7）中内容物转入离心试管（4.9）中，离心机（4.8）离心，用滴管吸取少量离心试管（4.9）下层有机相溶液，通过铺有少
5、量无水硫酸钠（3.4）层和脱脂棉的漏斗过滤，得澄清滤液备用。 6.2 色谱条件 6.2.1 色谱柱：玻璃，内径3mm，长2m。 6.2.2 固定液：20FFAP（或其他效果相同的固定液）。 6.2.3 载体：Chromosorb W，HP，80100目（或其他效果相同的载体）。 6.2.4 柱温：100。 6.2.5 进样口及检测器温度：150。 6.2.6 载气（氮气）流速：65mLmin。 6.3 测定 用微量注射器（4.3）吸取12 L上述澄清滤液，注入色谱仪，测量各异硫氰酸酯峰面积。 7 测定结果 7.1 计算公式 X me115.19 Se m（4399.15 Sa）（4/4113.
6、18 Sb（45127.21 Sp）1 000 me（ Se m）（1.15 Sa0.98 Sb0.88 Sp）1 000 式中： X试样中异硫氰酸酯的含量，mgkg；页码，2/7GB 13087912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130870A.htm7.2 结果表示 每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到1mgkg。 7.3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值； 在异硫氰酸酯含量小于或等于100mgkg时，不超过平均值的15。 在异硫氰酸酯含量大于100mgkg时，不超过平均值的
7、10。 第二篇 银量法 8 原理 菜籽饼粕中存在的硫葡萄糖苷，在芥子酶作用下可生成相应的异硫氰酸酯。用水气蒸出后再用硝酸银-氢氧化铵溶液吸收而生成相应的衍生硫脲。过量的硝酸银在酸性条件下以硫酸铁铵为指示剂用硫氰酸铵回滴，再计算出异硫氰酸酯的含量。 9 试剂和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。 9.1 乙醇（GB 679）：95（ V/V）。 9.2 去泡剂：正辛醇（C6H17OH）。9.3 6molL硝酸溶液：量取195mL浓硝酸（GB 626），加水稀释至500mL。 9.4 10氢氧化铵溶液：取氨水（30，GB 631）100mL，加200mL水混匀。
8、 9.5 硫酸铁铵溶液：称取100g硫酸铁铵NH4Fe（SO4）212H2O，GB 1279，溶于500mL水中。 9.6 0.1molL硝酸银标准溶液：准确称取在硫酸干燥器中干燥至恒重的基准硝酸银16.987g，用水溶解后加水定容至1000mL。置棕色瓶中避光保存。 9.7 0.1molL硫氰酸铵标准贮备液：称取7.6g硫氰酸铵（NH4CNS，GB 660），溶于1 000mL水中。按下法标定：准确量取10.00mL0.1mol/L硝酸银标准溶液（9.6），加1mL硫酸铁铵m 试样质量，g；me10mL丁基异硫氰酸酯内标溶液中丁基异硫氰酸酯的质量，mg； Se丁基异硫氰酸酯的峰面积；Sa丙烯
9、基异硫氰酸酯的峰面积；Sb丁烯基异硫氰酸酯的峰面积；Sp 戊烯基异硫氰酸酯的峰面积。页码，3/7GB 13087912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130870A.htm（9.5）指示剂和2.5mL6mol/L硝酸（9.3），摇动下用0.1mol/L硫氰酸铵标准贮备液滴定，终点前摇动溶液至完全清亮后，继续滴定至溶液所呈淡棕色保持 30s。 硫氰酸铵标准贮备液的摩尔浓度按式（2）计算： 9.8 0.01molL硫氰酸铵标准工作液：临用前将0.1molL 硫氰酸铵标准贮备液（9.7）用水稀释10倍，摇匀。 9.9 pH4缓冲液：称取42g柠檬酸（C6H
10、8O7H2O），溶于1L水中，用浓氢氧化钠溶液调节pH至4。 9.10 粗酶制剂：取白芥（ Sinapis alba L.）种子（72h内发芽率必须大于85，保存期不得超过两年）， 粉碎后用冷石油醚（沸程4060）或正己烷脱脂，使脂肪含量不大于2，然后再粉碎一次使全部通 过0.28mm筛，放4冰箱可使用6周。 10 仪器、设备 10.1 分析天平：感量0.000 1g。 10.2 恒温箱：温度范围3060，精度1； 10.3 异硫氰酸酯蒸馏装置：见下图，其中a为500mL三角烧瓶（具塞），b为250mL圆底烧瓶（在70mL处有一刻度）。 N N1 V1 V （2）式中： N硫氰酸铵标准贮备液摩
11、尔浓度，molL；N1硝酸银标准溶液摩尔浓度，molL；V1硝酸银标准溶液的用量，mL；V 消耗硫氰酸铵标准贮备液的体积，mL。页码，4/7GB 13087912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130870A.htm 异硫氰酸酯蒸馏装置图 10.4 冰水浴。 10.5 沸水浴。 10.6 三角烧瓶：100、500（具塞）mL。 10.7 容量瓶：100mL。 10.8 移液管：10、25mL。 10.9 吸量管：5、10mL。 10.10 半自动滴定管：5mL，最小分度为0.02mL。 10.11 滤纸。 页码，5/7GB 13087912006-3
12、-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130870A.htm10.12 回流冷凝器，可与瓶b相配。 11 试样制备 采集具有代表性的样品至少250g，四分法缩分至50g。若样品含脂率大于5时需要事先脱脂，测定脂肪含量；若含脂率小于5时，则进一步磨碎使其80能通过0.28mm（40目）筛，混匀，装入密闭容器中，置15保存备用。 12 测定步骤 12.1 称取试样2.2g于事先烘烤并精确称重至0.001g的烧杯中，1032烘烤至少8h，在干燥器中冷却至室温后精确称重至0.001g。 12.2 试样的酶解 将上述烘烤过的试样全部转移至500mL三角烧瓶a中，加入100mL
13、pH4缓冲液（9.9），同时加入0.5g粗酶制剂（9.10）。另取1个500mL三角烧瓶（10.6）加入100mLpH4缓冲液（9.9）和0.5g粗酶制剂（9.10），将三角烧瓶塞好塞子，置40恒温箱（10.2）中保温3h，中间不时轻摇几次。 12.3 蒸馏接收瓶准备 准确量取10.00mL硝酸银标准溶液（9.6）至250mL圆底烧瓶b中，并加入2.5mL氢氧化铵溶液（9.4）。将此瓶b与蒸馏装置（10.3）相连并置于冰水浴（10.4）中，冷凝器（10.12）末端必须没于硝酸银-氢氧化铵液中。 12.4 蒸馏 将盛试样的三角烧瓶a冷至室温，加入几粒玻璃珠和几滴去泡剂（9.2），然后与蒸馏装置（
14、10.3）相连，从上面漏斗中加入10mL95乙醇（9.1），另加3mL乙醇（9.1）于接收瓶上的安全管中。缓慢加热蒸馏，至馏出液达到接收瓶b70mL刻度处。 12.5 试样测定 取下接收瓶b，将安全管中的乙醇（9.1）倒入此瓶中，将它与回流冷凝器（10.12）连接，于沸水中加热瓶中内容物30min，然后取下冷却至室温。将内容物定量地转至100mL容量瓶（10.7）中，用水洗接收瓶b23次，用水稀释至刻度，摇匀后过滤于100mL三角烧瓶（10.6）中，用移液管（10.8）取25mL滤液于另一100mL三角烧瓶（10.6）中，加1mL6molL硝酸（9.3）和0.5mL硫酸铁铵指示剂（9.5），用
15、0.01molL硫氰酸铵标 准工作液（9.8）滴定过量的硝酸银，直到稳定的淡红色出现为终点。 12.6 空白测定 按同样测定步骤操作，但不加试样，得到空白测定值。 13 测定结果 13.1 计算公式 X4（ V1-V2） c56.59 / m c（ V1-V2）226.36/ m （3）式中： X试样中异硫氰酸酯的含量，以每克绝干样中丁基异硫氰酸酯的毫克数表示；页码，6/7GB 13087912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130870A.htm13.2 结果表示 每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 结果表示到0.01mgg。 13.3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值； 在异硫氰酸酯含量小于或等于0.50mgg时，不得超过平均值的20； 在异硫氰酸酯含量大于0.50mgg而小于1.00mgg时，不得超过平均值的15； 在异硫氰酸酯含量等于或大于1.00mgg时，不得超过平均值的10。 V1空白测定所耗硫氰酸铵标准工作液的体积，mL；V2试样测定所耗硫氰酸铵标准工作液的体积，mL；c 硫氰酸铵标准工作液的浓度，molL；m 试样的绝干质量，g。页码，7/7GB 13087912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130870A.htm
