1、ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 910-2004 饲料中盐酸氯苯肌的测定高效液相色谱法Determination of robenidini hydrochloridum in feeds -high-performance Iiquid chromatography 2005-01-04发布2005 -02 -01实施中华人民共和国农业部发布NY /f 910-2004 前本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位:农业部饲料质量监督检验测试中心(济南)，农业部饲料质量监督检验测试中心(沈阳)。本标
2、准主要起草人:李俊玲、刘学江、徐强、周岚、田颖、张桂萍、朱良智。I 范围饲料中盐酸氯苯腻的测定高效液相色谱法本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中盐酸氯苯肌的方法。NYIr 910一2004本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中盐酸氯苯肌的测定，最低检测浓度为2.5 mglkgo 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/I 6682 分析实验室用水
3、规格和试验方法GB/I 14699 饲料采样方法3 原理试料中的盐酸氯苯肌用甲醇提取。提取液经浓缩蒸干，用酸性甲醇溶解后，在HPLC反相柱上分离，紫外检测器(UV检测器)352nrn处测定。4 试剂除非另有说明，本标准所用试剂为分析纯，水为蒸锢水，符合GB/I6682三级水的规定。色谱用超纯水符合GB/I6682一级水的规定。4.1 甲醇4.2 甲醇色谱纯，过0.45m有机滤膜。4.3 乙酸优级纯04.4 乙酸甲醇溶液取2mL乙酸(4.3)用甲醇(4.2)定容至1000mLo 4.5 HPLC流动相取900mL甲醇(4.2)与100mL超纯水混匀，加1mL三乙醇胶，混匀，用前超声脱气5min
4、10 自un。4.6 盐酸氯苯肌标准溶液4.6.1 盐酸氯苯肌标准贮备液称取盐酸氯苯肌对照品(含量不少于99.8%) 10 mg (准确至0.1mg)，用甲醇(4.2)溶解并定容至100 mL，其浓度为100阅/mL，贮存于OC8C冰箱中。溶液有效期l个月。4.6.2 盐酸氯苯肌标准工作液取标准贮备液(4.6.1)2mL于旋转蒸发器蒸干，用乙酸甲醇榕液(4.4)悔解并定容至10rnL。该溶NY Ir 910-2004 液放度为20flg/mL。现用现配。4.6.3 标准系列精确移取标准工作液(4.6.2)0.100mL、0.250mL、0.500mL、0.750mL、1.000mL、1.500
5、mL，用甲醇(4.2)稀释至10mLo该标准系列中盐酸氯苯肌的相应浓度分别为:0.20g/mL、0.50周/mL、1.00周/mL、1.50周/mL、2.00月/mL、3.00周/mL。现用现配。5 仪器5.1 分析天平感量0.1mg o 5.2 超纯水器5.3 超声波清洗器5.4 离心机4000 r/mino 5.5 旋转蒸发器5.6 旋涡混合器5.7 高效液相色谱仪具有C18柱和uv检测器。6 采样6.1 采样步骤按GB/f14699采取具有代表性的饲料样品1000g。6.2 试样的制备用四分法缩减饲料样品(6.1)，分取200g左右，粉碎全部过0.45mm孔径筛，充分泪匀，装人磨口瓶中备
6、用。7 分析步骤7.1 提取称取适量试料(配合饲料5g，浓缩饲料、添加剂预混合饲料1g2 g)精确至0.1mg，置于100mL三角瓶中，准确加人甲醇(4.1)50mL，振摇使试料全部润湿，放在超声波清洗器中超声提取20min，中间振摇3次4次。超声结束后，用于旋摇数秒，把溶被转移至离心管中，于离心机上4000r/min离心10口llno7.2 浓缩取上清液3mL5 mL，于40C旋转蒸发器中蒸干，残渣加2mL乙酸甲醇溶液(4.4)溶解，并旋涡混合数十秒，置超声波清洗器中超声处理2min3 mino用于旋摇数秒，过0.45m有机滤膜，滤液供上机用。对于含盐酸氯苯肌较高的浓缩饲料和添加剂预混合饲料
7、，可先取适量上清液，用甲醇(4.2)稀释，取稀释液浓缩蒸干，并用乙酸甲醇溶液(4.4)溶解，使试样溶液中盐酸氯苯腻最终浓度为0.2g/mL3g/mL。7.3 测定7.3.1 高效液相色谱条件2 色谱柱:C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5m或类似分析柱。柱温:室温。流动相:甲醇+水+三乙醇胶=900 + 100 + 10 流速:1 .0 rnL/min。检测器:UV检测器。检测波长:352nmo 进样量:20Lo7.3.2 定量测定NY Ir 910-2004 向色谱仪分别注人标准溶液和试样溶液，积分得到峰面积，用单点或多点标准法定量。8 结果计算饲料中盐酸氯苯肌的含量x，以毫克每
8、千克(mglkg)表示，按式(1)计算:x=亏XD . (1) 式中:X一一饲料中盐酸氯苯肌的含量，单位为毫克每千克(mglkg); ml一一试料色谱峰面积对应的盐酸氯苯腻的质量，单位为微克(g);m一一试料质量，单位为克(g);D一一稀释倍数。计算结果保留3位有效数字。9 精密度9.1 重复性在同一实验室、由同一操作人员完成的2个平行测定结果，相对偏差不大于5%，以2次平行测定结果的算术平均值为测定结果。9.2 再现性在不同的实验室、由不同的操作人员、用不同的仪器设备完成的测定结果.相对偏差不大于10%。3 寸CON-05FMhhz中华人民共和国农业行业标准饲料中盐酸氯苯皿的测定高效液相色谱法NY / T 910-2004 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 网址)中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销争毛争夺关头争舍争e字数5千字印张0.5开本880mmx 1230mm 1116 2005年4月北京第1次印刷印数:1-2000册定价:6.00元2005年4月第1版书号:16109. 515 版权专有僵权必究举报电话:(010) 65005894 NY厅910-2004
