1、ICS 65.020 B 04 中华人民共和国农业行业标准NY/T 1382一2007棉籽中棉酣旋光体的测定高效液相色谱法Determination of Gossypol Enantiomers in Cotton Seed by HPLC 2007一06-14发布2007 -09-01实施中华人民共和国农业部发布NY /T 1382-2007 前本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位:农业部棉花品质监督检验测试中心、中国农业科学院棉花研究所。本标准主要起草人:杨伟华、许红霞、王延琴、周大云、冯新爱、夏俊英。I 1 范圄棉籽中棉酣旋光体的测定高效液相色谱法本标准规定了棉花种子
2、中棉酣旋光体的高效掖相色谱测定方法。本方法适用于棉花种子及其相关产品中棉酣旋光体的测定。2 规范性引用文件NY /T 1382-2007 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可以使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 6682 分析实验用水规格和试验方法(neqIS() 3696) 3 原理使样品中的左旋(一)棉盼和右旋(+ )棉酣与L-苯基丙膀醇充分反应后，分别生成(一)棉酣-L-苯基丙脑醇与(+)棉酣七苯基
3、丙股醇。以甲酶斤磷酸水溶液为流动相，两种棉酣衍生物在碳十八柱上有不同的保留时间，从而达到分离目的。在254m处检测，根据色谱峰的保留时间定性，以峰面积外标法定量。4 试剂4. 1 水，符合GB/T6682二级用水的规定。4.2 甲醇，分析纯。4.3磷酸，分析纯。4.4 三氯甲:挠，分析纯。4.5 石油酷(拂程30C60C)，分析纯。4.6 L-苯基两氨醇，分析纯。4.7 (-)棉酷、(十)棉盼和消旋(士)棉酣标准品，纯度在99.9%以上。5 仪器设备5. 1 高效掖相色谱仪，配备紫外检测器，自动数据处理仪。5.2 小型粉碎机。5.3 超声波清洗器。5.4分析天平，精度士0.1mgo 5.5微量
4、注射器，10L。5.6 容量瓶，25mL,100 mL等。6 试样制备6.1 标准样晶用分析天平称取10mg棉酣标样和约20mgL-苯基丙氨醇，用三氯甲烧梅解后定容于100rr容量NY IT 1382-2007 瓶中，振蔼后室温下避光放置2h以上。用时根据需要稀释至合适的浓度。进样前用0.5m捕;膜过滤06.2 棉籽样品6.2.1 样品净化和提取将棉籽剥亮，棉仁粉碎，过目筛。称取棉仁粉0.1g-2 g(根据棉酣含量多少决定)，置具塞三角瓶中，加入却mL石油酶，振荡后放置2h。弃去上清液，加入20mL三氯甲烧，用超声波处理30min，放置过夜。6.2.2 棉酣的衍生化反应称取0.025g L-苯
5、基丙股醇，用三氯甲烧榕解并定容至25mL容量瓶中。将提取攘过滤到25mL容量瓶中，如人适量L-苯基丙股醇的三氯甲烧溶被(棉酣与L-苯基丙胶醇的摩尔比在1+ 5左右)，用三氯甲:院定容至刻度，混合均匀，室温下避光放置2h以上。进样前用0.5m滤膜过滤。7 色i普条件分离柱:ondapakCts(30 cmx3.9 mm)。柱温:室、温，约25t:。流动相:甲醇十水+磷酸=85 + 15 + O. 1，使用前用0.45m滤膜过滤并脱气。流速:1mL/mino 检测波长:254nmo 灵敏度:0.1AUFSo8 样晶测定8.1 标准样品进样待系统走出平稳的基线，用微量注射器抽取2L-10L标准溶液进
6、样，约4min时第一个峰即(一)棉酷士苯基丙腊醇的锢分峰值出现，约6min时第二个峰即(+ )棉酣-L-苯基丙股醇的情分峰值出现。标准样品8min可走完一个样品。色谱图如图1所示。8.2 棉籽样品进样在平稳基线条件下，用微量注射器抽取2L-10L测试样品进样。因试验样品中成分复杂，待两个棉酣旋光体的峰出现后，仍需冲洗3min-5 min时间。每个样品约需10min-12 min，直到系统走出平稳的基线，方能下一次进样。2 。峰1为(-)棉盼-L-苯基丙胶酶峰2为(+)棉勘乱四苯基丙胶醇2 2 4 6 8 min 固1两种棉酣旋光体的田LC图i普NY/T 1382-2007 9 结果计算9.1
7、根据(1)式和(2)式分别计算试样中(一)棉酣和(+)棉酷的含量。m卜lGX V X卜)G=AISX77ZV1HH-HH-HH-HH-HH-，(1) m(+)G X V X(+)G=Azs m V1HH-HH-HH-. . . (2) 式中:X(一)G一一试样中左旋棉酣的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); X( +)G一一试样中右旋棉酣的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); h 一一试样榕液进样中左旋棉酣的峰面积;Az 一一试样榕液进样中有旋棉酷的峰面积;A1S 一一-惊准悔液进样中左脆棉酣的峰面积;Azs 一一惊准榕液进样中右旋棉酣的峰面积;m()G一一左旋棉酣标准品的进样质量，单位为
8、纳克(口g); m什)G一一右旋棉酣标准品的进样质量，单位为纳克(口g);m 一一试样的质量，单位为克(g); V 一一试样梅液总体积，单位为毫升(mL); V1 一一试样的进样体积，单位为微升(L); 9.2 测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留一位小数。10 精曹度两个平行测定的相对偏差不大于10%。3 hCON-N何?H民Z中华人民共和国农业行业标准棉籽中棉酣旋光体的测定高敢液相色谱法NY /T 1382-2007 奇斗中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 网址:) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销+夺* * +夺争+印张0.5字数5千字2007年B月北京第1次印刷印数:1-500册定价:8.00元开本880mmx1230mm 1116 2007年8月第1版书号:16109 1255 版权专有僵权必究举报电话:(010) 65005894
