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    GB T 21173-2007 动物源性食品中磺胺类药物残留测定方法 放射受体分析法.pdf

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    GB T 21173-2007 动物源性食品中磺胺类药物残留测定方法 放射受体分析法.pdf

    1、ICS 67050X 04 固雪中华人民共和国国家标准G3T 21 1732007动物源性食品中磺胺类药物残留测定方法 放射受体分析法Determination of sulfa drugs residues in animal derived foodRadio-receptor assay method2007-10-29发布 2008-04-0 1实施丰瞀嬲紫瓣警辫瞥星发布中国国家标准化管理委员会促1”刖 罱本标准的附录A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国福建出入境检验检疫局。本标准主要起草人:黄晓蓉、林杰、郑晶、杨方、陈彬、陈健、

    2、翁国柱。本标准系首次发布。GBT 2 117320071范围动物源性食品中磺胺类药物残留测定方法放射受体分析法GBT 21 173-2007本标准规定了肉类和水产品中磺胺类药物残留测定的制样和放射受体分析方法。本标准适用于肉类和水产品中磺胺类药物残留的筛选测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-19

    3、92,neq ISO 3696:1987)3试样制备和保存31试样制备从原始样品中取出部分有代表性样品,应尽可能将脂肪剔除。将可食部分放入高速组织捣碎机均质,充分混匀,用四分法缩分不少于500 g试样。装入清洁容器内,并标明标记。制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化,用于测定的样品细菌数不能超过106个g。32试样保存试样于一18以下保存,新鲜或冷冻的组织样品可在26贮存72 h。4测定方法41原理测定的基础是竞争性受体免疫反应,3H3标记的磺胺二甲嘧啶和样品中残留的磺胺类药物与微生物细胞上的特异性受体竞争性结合。用液体闪烁计数仪测定样品中3 HI含量的计数值(cpm),计数

    4、值与样品中的磺胺类药物残留量成反比。42试剂和材料除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GBT 6682规定的一级水。421 Charm组织中的磺胺类药物测定试剂盒”。4211阴性对照浓缩干粉:贮存于26。使用时用10 mL水溶解,配制成阴性组织液。阴性组织液可在26中保存48 h。如长时间不用,可于一15以下冷冻保存2个月,使用时将其解冻,解冻后的溶液可在26保存24 h。4212 MSU多种抗生素标准品:贮存于26。使用时用10 mL水溶解,配制成MSU多种抗生素标准溶液(其中磺胺二甲嘧啶浓度为1 000 vgL)。MSU多种抗生素标准溶液保存方法同4211。1)clam组织中的磺胺类药物

    5、测定试剂盒和Chum液体闪烁计数仪是由Charm Science公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。1GBT 21 17320074213 MSU萃取缓冲液浓缩干粉:使用时用1 000 mL水溶解,配制成MSU萃取缓冲液,可在26C保存2个月。4214 M2缓冲液浓缩干粉:使用时用50 mL水溶解,配制成M2缓冲液,可在2C6保存2个月。4215受体试剂片剂:白色药片,于一15C以下冷冻保存。42163H标记的磺胺二甲嘧啶药物片剂:粉红色药片,于一15以下冷冻保存。422 1 molL盐酸:

    6、832 mL浓盐酸加水定容至1 000 mL。423闪烁液。424 pH试条。425离心管:50 mL。426硅硼酸盐玻璃试管及试管塞。427药片压杆。43仪器和设备431 Charm lI液体闪烁计数仪”。432离心机:4 000 rmin。433高速组织捣碎机。434涡旋混合器。435加热器:90。436 移液器:1 mL5 mL,i00 pL1 000 pL。5分析步骤51对照液的配制511 阴性对照液的配制:取2 mL阴性组织液(4211),加入6 mL MSU萃取缓冲溶液(421_3)中混匀,制成阴性对照液,该对照液可在室温下保存6 h。512阳性对照液的配制:取03 mL MSU多

    7、种抗生素标准溶液(4212),加入6 mL阴性组织液(4211)中混匀,然后从中取2mL混合溶液加入到6mLMSU萃取缓冲溶液(4213)中混匀,制成阳性对照液,该对照液可在室温下保存6 h。52试样提取521 称取10 g(精确到01 g)均质好的试样于50 mL离心管,加入30 mL MSU萃取缓冲溶液(4213),涡旋振荡5 min。522将离心管置80(22孵育器内孵育45min,再将离心管置冰水内10min后,3 300 rmin离心10min。523吸出上清液,注意不要将漂浮的脂肪颗粒混人上清液内。恢复室温后,用pH试条检查pH是否为75。如不准确,用M2缓冲液(4214)或1 m

    8、olL盐酸调整至pH 75,即为样品测试液。53测定531 用药片压杆的平端将受体试剂片剂(4215)压人一洁净的玻璃试管内,加300 pL水到试管内用涡旋混合器振荡10 s,使药片振碎均匀。532用移液器加4 mL样品测试液,或阴性对照液(511)或阳性对照液(512)到试管内。533用药片压杆的平端压人3H标记的磺胺二甲嘧啶药物片剂(4216),用涡旋混合器振荡15 s,上下来回10次。置65C士1孵育器内,孵育3 rain。534取出试管,于3 300 rmin离心3 rain。离心停止后立即取出试管,倒掉上清液,用吸水材料吸干管口边缘处的污渍。535加300 pL水到试管内,振荡并混合

    9、均匀,再加入3 mL闪烁液(423)到试管内,将试管塞盖上GBT 211732007后,涡旋混匀。536将试管放入液体闪烁计数仪内,读3H项的计数值。注:建议1次同时进行6支试管以下的测定。54控制点的确定541控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值,可根据筛选水平自行设定。542筛选水平为20tgkg时,控制点设定步骤:称取10 g均质好的同类空白组织样品,加入02mLMSU多抗生素标准溶液,充分混匀制成标准样品,按52和53进行测定。测定6个非重复的加标样品的计数值,求出平均值乘上系数12,即为筛选水平20-gkg的控制点。543当筛选水平大于20ugkg的样品时,可将样品测试液适当稀

    10、释后测定。55结果判定551 当样品的计数值大于控制点时,判定为“阴性”。552当样品的计数值小于或等于控制点时,应重新测定样品,且同时需要测定阴性对照液和阳性对照液。阴性对照液和阳性对照液的计数值,需在正常范围波动(见第A3章)。当重新测定样品的计数值大于控制点时,判定为“阴性”;小于或等于控制点时,则判定为“初筛阳性”。6确证本方法为初筛方法,阳性结果应用其他方法进行确证。7检测限在肉类和水产品中,本方法检测限以磺胺二甲嘧啶计磺胺类药物(包括磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺问二甲氧嘧啶、磺胺喹嘿啉、磺胺甲噻二唑、磺胺吡啶、磺胺异略唑、磺胺甲基异嘿唑、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺

    11、胺甲氧哒嚷、磺胺氯哒嗪)总量为20 tLgkg。GBT 211732007附录A(规范性附录)仪器和试剂日常监测A1 Charm II液体闪烁计数仪零点校准取空的专用试管放入液体闪烁计数仪计数,计数值需小于50,否则需调零。如测得的计数值偏大,可能由于液体闪烁计数仪有大量静电存在所引起,可用湿抹布将试管外壁湿润后放人液体闪烁计数仪进行测定,重复几次后可以达到正常值。A23H通道校准取3HI标记的磺胺二甲嘧啶药物片剂加入玻璃试管,加300 pL水到试管内,振荡使沉淀物完全破碎。加3 mL闪烁液到试管内涡旋混匀至试管内没有不均一的云状物。将试管放人液体闪烁计数仪内,读3HI项和“c项的计数值。3H项的计数值应大于15 000,且“c项与3HI项的计数值的比值应小于0i。A3试剂监测A31对每一批新的试剂需测定零质控标准,测定3次阴性对照液计数值,其平均值即为零质控标准。当遇到样品怀疑“初筛阳性”时,通过测定阴性对照液和阳性对照液计数值与作为零质控标准的计数值比较,可确定试剂和液体闪烁计数仪是否正常。A32正常情况下,阴性对照液计数值在零质控标准计数值上下波动,幅度约20。A33正常情况下,阳性对照液计数值小于控制点。A34 如果测定结果与A32或A33不相符,应重新测定零质控标准和控制点,并重新测定样品。


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