1、ICS 67180。10B 47 a雪中华人民共和国国家标准GBT 211682007蜂蜜中泰乐菌素残留量的测定2007-10-31发布液相色谱一串联质谱法Determination of tylosin residues in honeyLC-MSMS method200804-01实施丰瞀徽紫瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会厘仲前 言GBT 21 1682007本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国河南出入境检验检疫局。本标准主要起草人：吴斌、魏蔚、沈伟健、徐锦忠、陈惠兰
2、、沈崇钰、赵增运、黄娟、蒋原、殉宏锦。1范围蜂蜜中泰乐菌素残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 21 1682007本标准规定了蜂蜜中泰乐菌素A残留量液相色谱一串联质谱测定方法提要、测定步骤和结果计算。本标准适用于蜂蜜中泰乐菌素A残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注IJ期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-1992，neq
3、ISO 3696：1987)3方法提要试样用碱性溶液溶解后，泰乐菌素药物残留用固相萃取柱萃取，洗脱液浓缩后用甲醇溶液定容，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料41水：应符合GBT 6682规定的一级水。42甲醇：HPLC级。43碳酸钠：分析纯。44碳酸氢钠：分析纯。45 甲醇+水(2+8)：量取20 mL甲醇(42)与80 mL水混合。46固相萃取柱：HLB或相当者，60 mg，3 mL。47泰乐菌素A标准：纯度95。48泰乐菌素A标准储备溶液：10 mgmL。准确称取适量的泰乐菌素标准物质(47)，用甲醇配成10 mgmL的标准储备液。储备液贮存在4冰箱中，可使用两个月。49泰
4、乐菌素A标准工作溶液：用空白样品提取液分别配成泰乐菌素浓度为20 ngmL、50 ngmL、100 ngmL、500 ngmL、1000 ngmL、2000 ngmL标准工作溶液。标准工作溶液在4保存，可使用一周。410 Na2C03-NaHCO。缓冲液(01toolL)：称取53 g碳酸钠和42 g碳酸氢钠用适量水溶解后，稀释至1 000mL。5仪器51液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。52分析天平：感量01 mg和001 g各一台。53氮吹仪。54旋涡混匀器。55贮液器：50 mL。1GBT 21168200756真空泵：真空度应达到80 kPa。57移液器：10 mL。58离心管：
5、50 mL，具塞。59刻度离心管：10 mL。510滤膜过滤器：045 p-m，有机相。6试样的制备与保存61试样制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出05 kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。62试样保存将试样于常温状态下保存。注：在取样和制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤71提取称取5 g试样，精确到001 g。置于50mL具塞离心管中，加入10mL 01molLNa2cQNaHC03缓冲溶液，于液体混匀器上快速混合1 min，使试
6、样完全溶解。将混合液倒人下接Oasis HLB柱(46)的贮液器中，使用前分别用3 mL甲醇和5 mL水预处理，保持柱体湿润。溶液以不高于2 mLmin的流速通过Oasis HLB固相萃取柱，待溶液完全流出后，用5 mL水洗离心管和贮液管并过柱，然后再用5 mL甲醇+水(45)洗柱，弃去全部淋出液。在65 kPa的负压下，减压抽于10 rain，最后用5 mL甲醇(42)洗脱，收集洗脱液于10 mL刻度离心管(59)中，于50用氮气吹干仪吹干，用甲醇(42)+水(41)(30+70)定容至10 mL，过045 btm的滤膜到进样瓶中，供液相色谱一质谱仪测定。72测定721液相色谱条件a)色谱柱
7、：C18，5 btm，150 mm21 ram(内径)或相当者；b)流动相：水(A)+甲醇(B)；c)流速：025 mLmin；d)梯度：0 min50 rain 2090B，50 min70 min 90B，71 min90 rain Z0B；e)柱温：30；f) 进样量：25 pL。722串联质谱条件a)离子源：电喷雾离子源(ESI)，正离子监测；b) 扫描方式：选择离子检测(SRM)；c)雾化气、鞘气为高纯氮气，碰撞气为高纯氦气；d) 电喷雾电压、碰撞电压等自动优化至最佳值；e)定性离子对、定量离子对和碰撞气能量见表1。表1 定性离子对、定量离子对和碰撞气能量定性离子对(mz) 定量离子
8、对(mz) 碰撞气能量eV3891651749165174 91657725 16GBT 21168200773液相色谱一串联质谱测定泰乐菌素A标准工作溶液(49)在液相色谱一质谱设定条件下分别进样，以样品峰面积为纵坐标，工作溶液浓度(ngmL)为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中泰乐菌素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，泰乐菌素A参考保留时间为653 rain。泰乐菌素标准物质色谱、质谱图分别参见图A1、图A2。74空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算结果用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值X一。旦 m
9、式中：x试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(tgkg)；c从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)V样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。9检测低限和回收率91检测低限本方法对蜂蜜中泰乐菌素A残留量的检测低限为10-gkg。92回收率蜂蜜中泰乐菌素A添加浓度及平均回收率的试验数据；在10tgkg时，回收率范围为7841078；在50 tugkg时，回收率范围为701895；在100 ggkg时，回收率范围为7721011；在400 bLgkg时，回收率范围为734948。GBT 2116820074附录A(资料性附录)标准物质总离子流圈及质谱图图A1泰乐菌素A标准物质总离子流图18；2巧砷蛎如踮拍加坫oo173 84图A2泰乐菌素A标准物质质谱图GBT 21168200755：；8佰阳的晒蛎蚰弘鲫衢如=2加oo
