1、ICS 13.300;13.020.40 A 80 噩噩中华人民共和国国家标准GB/T 21808-2008 化学晶鱼类延长毒性14天试验Chemicals-Fish, prolonged toxicity: 14-day study test 2008-05-12发布2008-09-01实施数精防伪中华人民共和国国家质量监督检验检瘦总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T 21808-2008 前本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.204(1984年)(鱼类延长毒性14天试验)(英文版。本标准做了以下编辑性修订z推荐鱼种增加了稀有鲍卸(Gobiocy pris r
2、arus)和剑尾鱼(Xihophorus helleri)。本标准附录A和附录B为资料性附录。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。本标准负责起草单位z环境保护部化学品登记中心。本标准参加起草单位z上海市环境科学研究院、环境保护部南京环境科学研究所、沈阳化工研究院安全评价中心。本标准主要起草人z周红、高桂华、沈英娃、胡双庆、梁丹涛、韩志华、吴颖慧。I GB/T 21808-2008 化学晶鱼类延长毒性14天试验1 范围本标准规定了化学品鱼类延长毒性14天试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。本标准只适用于化学品对淡水鱼类延长毒
3、性14天的试验。对于实验条件下溶解度有限的化学品，也许不一定能确定本标准希望测定的值。若更长的观察期是有用而适宜的，并且有必要提供包含其他更多信息的测试报告，则本标准也许可以替代鱼的急性毒性测试。2 术语和定义2. 1 2.2 2.3 2.4 2.5 下列术语和定义适用于本标准。半静态试验semi-static test 以定期更换试验介质方式如12h或24h)进行的试验。流水式试验f1ow-through test 以受试物溶液恒流通过试验容器使试验介质持续更新的方式进行的试验。致死效应阑值threshold level of lethal effl配t受试物产生致死效应的最低浓度。可观察效
4、应阁值threshold level of observed effects 试验溶液中受试物表现出除致死效应外其他效应的最低受试物浓度。无可观察效应浓度no observed effect concentration; NOEC 与对照相比，对试验生物未产生显著效应的最高受试物浓度。3 受试物信息a) 水中溶解度pb) 蒸气压zc) 结构式zd) 纯度;e) 水溶液中的定量分析方法;f) 在水中和光中的稳定性;g) 正辛醇-水分配系数;h) 快速生物降解试验结果。1 GB/T 21808-2008 4 方法概述4. 1 原理测试期间，定期测定鱼类致死效应、其他可观察效应浓度和无可观察效应浓度
5、CNOEC)，试验进行14d。必要时再延长1周2周。4.2 参比物本标准无推荐参比物。若测试了某一参比物，应在测试报告中加以说明。5 仪器设备实验室常规仪器设备，特别是以下仪器设备是必需的zu 测定水质温度、pH、溶解氧和硬度的仪器;b) 温度控制仪Ec) 化学惰性材料制成的容积适宜的实验容器。6 试验准备6. 1 系统选择试验期间，应尽可能维持条件恒定。通常采用流水式试验系统，若适合，也可采用半静态试验系统。6.2 翌试生物6.2.1 受试生物的选择可选用一个或多个鱼种，取决于测试实验室。但建议选择鱼类急性毒性试验中所推荐的鱼种，见附录Ao选择鱼种应基于几个重要的标准，如，全年的易获得性、易
6、于饲养、方便进行测试、价格低廉、以及生物的和生态的因素等。选择的鱼应健康，无任何可见畸形。这些鱼可以由渔民或实验室饲养，疾病和寄生虫得到控制，这样健康状况得以保证，出身可知。若采用推荐鱼种之外的符合上述条件的其他鱼种，须说明理由，按相应的试验条件改编试验方法，写入试验报告。6.2.2 试验生物的驯养至少12d15 d。所有试验鱼使用前，须在与试验用水相同的水质中驯养至少7do应避免任何可能改变试验鱼行为的干扰因素。光照z每天12h16 h光照。温度z适合于试验鱼种。溶解氧z不低于80%空气饱和值。疾病处理z避免进行疾病处理，如有处理应报告。饲喂:1次/d。驯养48h后，记录死亡率，并按下列标准
7、处理z一一7d内死亡率大于10%，舍弃全组鱼E一一死亡率在5%10%之间，继续驯养7出一一死亡率小于5%，该组鱼可用于试验。6.3 试验用水6.3. 1 水质可用饮用水(必要时除氯)、高质量的天然水或配制的稀释水，见附录Bo水的总硬度为50mg/L 250 mg/LC以CaC03计)，pH值为6.08. 5。用于配制稀释水的试剂应为分析纯，去离子水或蒸馆水G/T 21808-2008 的电导率应小于或等于10S/cm。6.3.2 试验溶液将适量受试物潜于所需体积的稀释水中，制成适当浓度的受试物贮备液。低水溶性受试物的贮备液可用机械分散法制备，或必要时采用对鱼低毒的有机溶剂、乳化剂、分散剂等。这
8、类溶剂在试验溶液中的浓度应不超过100mg/Lo 通过稀释贮备液来配制所选浓度的试验液。试验溶液的pH值不需调节。若加入受试物后试验榕液的pH值有明显变化，建议重新配制，调整贮备液的pH值至与加受试物前试验液的pH值相同。用于调节pH值的物质不应使贮备液的浓度有明显改变，也不应与受试物发生化学反应或产生沉淀。最好使用HCl或NaOH来调节pH值。7 试验程序7. 1 试验浓度选择的试验浓度，应能确定受试物的致死效应、其他可观察效应的阔值和无可观察效应的浓度值。若阔值水平超过100mg/L，不需进行测试。如果使用助溶剂，应加设溶剂对照组，对照中溶剂浓度应为试验液中溶剂的最高浓度。7.2 暴露条件
9、a) 周期z试验周期一般为14d，也可延长1周2周。b) 承载量z半静态试验的最大承载量为1.0 g/L;流水试验系统的承载量可高一些。试验容器的容量应与推荐的承载量相适应。c) 试验生物数:每一浓度组和对照组至少使用10尾鱼。d) 光照z每天光照12h16 ho e) 温度z试验温度与试验鱼种相适应，保持恒定，温度变化范围为土2C。f) 榕解氧z试验期间，试验液溶解氧含量不低于60%空气饱和值。g) 饲喂z每日投饵一次或多次，投食量恒定，每次投食量不得超过试验鱼一次需食量。h) 清污z流水式试验系统，每周至少清洗试验水箱内壁两次;半静态试验，可在每次更换试验液时清理一次。7.3 观察测定观察
10、和记录鱼的死亡情况，当观测到鱼没有呼吸运动或触碰鱼尾无反应，可判断鱼已死亡，将死鱼从容器中取出，记录死亡数，每天检查一次。观察和记录其他非致死效应，包括与对照组鱼明显不同的表征、大小和行为，异常游泳行为，外来剌激的不同反应，鱼类外观上的改变，摄食下降或停止，体长和体重改变等。每周三次记录所有可观察效应。每周两次测定各容器的溶解氧含量、pH值和温度。浓度测定z流水试验，试验开始时测定试验液中受试物浓度;半静态试验，试验开始时、第一次更新试验液前和试验结束时分别测定试验液中受试物浓度。若能证明可以维持足够高的受试物浓度，也可采用化学分析之外的其他适合的程序。试验开始前，选择试验鱼中有代表性的个体，
11、测量体重和体长。试验结束时，测定所有存活鱼的体重和体长。8 质量保证与质量控制a) 试验结束时，对照组的死亡率不高于10%;3 GB/T 21808-2008 b) 试验期间，试验液的潜解氧含量不低于60%空气饱和值zc) 采用半静态试验系统时，若不会造成受试物的明显损失，则可对试验液充气;d) 应有证据证明试验期间受试物浓度维持在较高的水平(受试物浓度应不低于80%配制浓度)。若与配制浓度的偏差大于20%，测试结果应以实测浓度为准。9 数据与报告9. 1 结果解释如果发现未能维持受试物试验液的稳定性和向质性，应慎重解释所得结果，并注明该试验结果不能重现。9.2 试验报告4 试验报告应包括下述
12、内容zu 受试物z化学鉴定数据。b) 受试生物z学名、品系、大小、供应商、预处理等。c) 试验条件z采用试验操作z如半静态或流水式，曝气、承载量等F一一水质特征z水质处理情况，包括除氯、溶解氧浓度、pH、硬度、温度等;一一每一推荐观察时间试液中的榕解氧浓度、pH、温度和总硬度;一一制备贮备液和试验液的方法;试验液中受试物的浓度及保持情况;各试验浓度组中鱼的数量;一一鱼类急性毒性试验数据。d) 结果z一一用表列出每一观察时间各浓度组的可观察效应p一一绘制产生致死效应或其他效应的浓度随时间变化的曲线;致死效应阔值;可观察效应阔值z一一无可观察效应浓度CNOEC);一一如可能，每一推荐观察时间各浓度
13、组的累积死亡率;对照组的死亡率z一一一鱼的行为观察z一一-试验期间对试验结果可能产生影响的事件:一一与本标准的任何偏离。A.1 推荐受试鱼种(见表A.D推荐鱼种Brachydanio rerio 斑马鱼Pimephales promelas 黑头软口鲸Cy户inus，ar10 鲤鱼Oryzias laties 青鳝Poecilia reticulate 孔雀鱼Lepomis macrochirus 蓝鲸鱼Oncorhynchus mykiss 虹蹲鱼Gobiocypris rarus 稀有鲍侧XihophoTUS helleri 剑尾鱼附录A资料性附录推荐受试鱼种表A.1推荐曼试鱼种推荐试验温
14、度/C21-25 21-25 20-24 21-25 21-25 21-25 13-17 21-25 21-25 a若鱼的大小不在推荐范围内，应报告并说明理由.GB/T 21808-2008 推荐鱼长a/cm2.0士1.02.0士1.03.0士1.02.0土1.02.0土1.02.0士1.05.0土1.02.0士1.02.0士1.05 GB/T 21808-2008 附录B(资料性附录)合格的配制稀释水示例a) 氧化钙溶液z称取11.76 g二水合氯化钙CCaClz 2HzO)，用去离子水溶解，定容至1Lo b) 硫酸镜溶液z称取4.93g七水合硫酸镜CMgS04 7HzO)，用去离子水溶解，
15、定容至1L。c) 碳酸氢铀榕液z称取2.59g碳酸氢铀CNaHC03)，用去离子水溶解，定容至1L。d) 氯化饵溶液z称取0.23g氧化饵CKCD，用去离子水溶解，定容至1L。用于配制稀释水的试剂应为分析纯，去离子水或蒸馆水的电导率应小于或等于10S/cm。上述a)d)溶液各取25mL，混合，用去离子水定容至1Lo该溶液的钙和侯离子总量为2.5 mmol/L，钙离子z侯离子=4:1，铀离子z饵离子二10: 1。对上述溶液曝气，直至氧饱和。贮存2d左右。使用前不需再曝气。6 G/T 21808-2008 参考文献lJ D. M. M. Adema, in Degradability, Ecoto
16、xiciyy and Bioaccumulation, Chapter 5, Govern ment Publishing Office, The Hague,1980. 2J R. Bathe, Arch. Toxicol. Suppl. ,1979 ,2: 417-423. CON-OFNH阁。华人民共和国家标准鱼类延长毒性14天试验GB/T 21808-2008 国中化学晶* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张0.75字数13千字2008年7月第一次印刷开本880X12301/16 2008年7月第一版司除书号:155066 1-32206 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 21808甲2008
