1、ICS 67050B 50中华人民共和国国家标准农业部958号公告一132007水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的测定气相色谱法Determination of chloramphenicol-thiamphenicol andflorfenicol residues in fishery productsGas chromatography method20071218发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 吾农业部958号公告一132007本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起
2、草单位：农业部淡水鱼类种质监督检验测试中心。本标准主要起草人：艾晓辉、李荣、刘永涛、袁科平、杨红。农业部958号公告一132007水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的测定气相色谱法1范围本标准规定了水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的气相色谱测定方法。本标准适用于水产品可食部分中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注El期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用
3、于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理样品用乙酸乙酯提取，正己烷去脂，经c-s圃相萃取柱净化，硅烷化试剂衍生化后，用配有电子捕获检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。4试剂本标准所用试剂除标明外，其他均为分析纯或更高纯度。试验用水符合GBT 6682一级水标准。41乙腈：色谱纯。42甲醇：色谱纯。4 3正己烷；优级纯。44乙酸乙酯；色谱纯。4 5氯化钠：分析纯。46 4氯化钠溶液：称取40 g氯化钠，用水溶解，定容至1 000 mL。47氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素标准品：纯度99。48氯霉素标准储备渡：准确称取001 g(精确到0000 1 g)氯霉素，加少量乙腈溶解，用
4、乙腈定容至100mI棕色容量瓶中，保存于4。C冰箱中(保存期不超过3个月)。该氯霉素标准储备液浓度为100”gmL。49甲砜霉素标准储备液；精确称取001 g(精确到00001 g)甲砜霉素，加少量乙腈溶解，用乙腈定容至100mI，棕色容量瓶中，保存于4冰箱中(保存期不超过3个月)。该甲砜霉素标准储备液浓度为100gmL。410氟甲砜霉素标准储备液：精确称取001 g(精确到0000 1 g)氟甲砜霉素，加少量乙腈溶解，用乙腈定容至100mL棕色容量瓶中，保存于4。C冰箱中(保存期不超过3个月)。该氟甲砜霉素标准储备液浓度为100“gmL。411氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素标准工作液：分别取氯
5、霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素标准储备液，用乙腈稀释成浓度范围分别为0001“gmL n01lgmL、0005 pgmL t05 pgmI0 005 pgmI。05“gmL的混合标准工作液，即氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素浓度比例以1：5：5为宜。农业部958号公告一132007412衍生化试剂：N，O一双(-甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)：三甲基氯硅烷(TMCS)(99：1)。5仪器和设备51气相色谱仪，配63Ni电子捕获检测器。52高速组织捣碎机：转速不低于20 000 rmin。53旋转蒸发仪。54离心机。55旋涡混合器。5，6电子天平：感量0000 1 g。5 7氮吹仪。58 SPE固
6、相萃取装置。59固相萃取柱：3 mL，cls柱或相当者。510移液器：20 pL200 ktL，200肛L1 000 pL。511梨形瓶：125 mI，。512具塞离心管：50 mL。5 13反应瓶：规格3mL。6样品测定61样品预处理鱼，去鳞，沿脊背取肌肉和皮；虾，去头、去壳、去附肢，取可食肌肉部分；贝类，去壳，取可食部分；蟹、甲鱼等，取可食肌肉部分。样品切为不大于05 cm05 cmX05 cm的小块后混匀，高速组织捣碎机充分匀浆，密封，标明标记。一18。C以下冷冻保存备用。62提取称取匀浆样品5 g(精确到001 g)，置于50mL具塞玻璃离心管中，加入20mL乙酸乙酯，在旋涡混合器上旋
7、涡振荡5 min，提取氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素，4 000 rmin离心10 min，将上清液转移到125 mL梨形瓶中。重复操作一次，合并乙酸乙酯提取液于125 mI。梨形瓶中，置40。C旋转蒸发仪上蒸发至干。6 3净化和浓缩向鸡心瓶中加入1 mL甲醇涡旋混合溶解残留物，再向梨形瓶中加入25 mL 4氯化钠溶液振荡1min后，将其转移到50mL具塞离心管中，然后向离心管中加入15mL正己烷，涡旋振荡1rain，充分混合提取脂肪，4 000 rmin离心10min，除去上层正己烷。向水相中加15mL正己烷，重复提取1次，弃去正己烷。给每个样品准备一根C1。柱，依次用5 mL甲醇和10 mL
8、水活化柱子，弃掉洗涤液，紧接着吸取待测样品水溶液过C；。柱，弃掉流出液。再用5 mL水洗涤C。柱，弃掉流出液。用3 mL乙腈将C-s柱中的氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素洗脱于3mL反应瓶中，置50。C氮吹仪上吹干。以上步骤必须连续做完，切莫让吸附剂变千，过柱的流速保持约每秒一滴。吹干后的提取物，应迅速进行下一步衍生化操作或置80烘箱中20min再冷却，确保提取物干燥。6 4衍生化641试样的衍生化向吹干的提取物中，加入100“LBSTFA TMCS衍生化试剂，立即盖塞，并旋涡振荡混合10 S，在65C恒温箱中反应30 rain。置50。C氮吹仪上将衍生化溶液刚好吹于为止。加入1 mL正己烷，涡旋
9、混农业部958号公告一132007合10 S。取1tzI，进样测定。6 4，2标准工作液的衍生化取适量氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素混合标准工作液于3 mL反应瓶中，置50。C氮吹仪上欧干。以下按641的步骤操作。65色谱条件6，51色谱柱：5苯基和95聚二甲基硅氧烷。652进样方式：不分流进样。6 5 3载气：氮气，纯度99999。654柱流速：25 mLrain，尾吹为：25 mLmin。6 55检测器温度310。C；进样15温度230。C。656柱温程序：起始80。C保持lmin，以20。Crain，升至150。C，保持2mini然后以20。Cmin，升至200。C，保持5rain再以50
10、。Cmin，升至280。C，保持10rain，直至样品的组分全部流出。6 57进样量：10 pL。66样品测定根据样品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量，选定标准工作溶液浓度范围。标准工作溶液和样品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素响应值均应在仪器检测线性范围内。取10 pL衍生化的样液和标液进样测定，在65规定的色谱条件下，氯霉素保留时间约为1887 min，氟甲砜霉素保留时间约为1978 min，甲砜霉素保留时间约为2108 rain，参见附录A，外标法定量。67空白试验同时测定试剂空白样品，方法按测定步骤进行。7结果计算与表述根据标准工作液和样液的峰面积，按式(1)分别计算样品中氯霉素、甲
11、砜霉素、氟甲砜霉素残留量： GCs等等“1)式中： C：样品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量，单位为微克每千克(ugkg)；Cs一标准衍生物溶液相当于氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素的含量，单位为微克每毫升(艚mI，)；A样液中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素的峰面积；V样品最终定容体积，单位为毫升(mL)；As标准工作溶液中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素峰面积；Tt一一样品的质量，单位为克(g)。注：计算结果应扣除空白值，结果保留两位小数。8线性范围氯霉素线性范围为oool vgmLo1 ugmI；甲砜霉素线性范围为0t 005 ugmLo5 ugmL；氟甲砜霉素线性范围为0005 ugmI，o5
12、 pgmI，。9灵敏度氯霉素的检出限为03 ugkg，甲砜霉素的检出限为10 ugkg，氟甲砜霉素的检出限为10vgkg。3农业部958号公告一13200710准确度氯霉素在添加浓度为03 pgkg50 pgkg，甲砜霉素和氟甲砜霉素在添加浓度为10 pgkg100gkg时，回收率皆为70110。11精密度本方法批内和批间变异系数皆15。农业部958号公告一132007附录A(资料性附录)氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素标准溶液、组织空白及加标气相色谱图见图A1图A5。8 19 20 2】 22Minutes圈A 1氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素标准溶液色谱图18 19 20 21 22Minutes Minutes图A 2尼罗罗非鱼组织样品空白气相色谱图 图A 3南美白对虾组织样品空白气相色谱图18 19 20 21 22 18 19 20 21 22Minutes Minutes图A 4尼罗罗非鱼组织加标样品气相色谱图 图A 5南美白对虾组织加标样品气相色谱图巧签0伸3苦目巧巧。巧竹笛0巧0自一90【odvoj儿r警I|一臣，llij圳一一S1)du1(6SI|N)d苫I0。jj儿rn。口1)臣liiijm一瓮I】du。1笱；。蚰竹03H2目
