1、GB/T 5413.3-1997 前空间本标准等同采用国际乳品联合会标准IDF9C: 1987乳粉、乳清粉、酷乳粉和乳浆粉一一脂肪含量的测定一一罗兹-哥特里囊量分析法(基准法川。该方法准确度高，是测定乳、乳粉、婴幼儿配方食品中脂肪含量的基准方法。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85。本标准由中国轻工总会提出.本标准由全国乳品标准化中心归口.本标准负责起草单位g国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位g卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人2王芸、黄敏、张天舒。228 中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食
2、品和乳粉肪的测定Mllk powder and formula foods for infant and young chlldren 一Determlnationof fat 1 范围本标准规定了脂肪测定的基准方法.本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中脂肪的测定。2 方法提要GB/T 5413.3-1997 代替GB5413-85 用乙艇和石油酷抽提样品的乙酶氨溶液，通过蒸馆或蒸发去除溶剂，测定溶于酿中的拍提物的质量。3试1111所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。按5.3规定的步骤进行空白试验，检验试剂的纯度.按5.4的操作准备一空的脂肪收集瓶用来
3、校正环境的影响。试剂残余物含量不得大于O.5mg(见8.1)。如果全部试剂空白残余物大于O.5mg，则分别蒸馆lOOmL乙酷和石油田懂，测定溶剂残余物的含量。用空的控制瓶测得的量和每种溶剂的残余物的含量都不应超过O.5mgo更换不合格的试剂，或对试剂进行提纯。3. 1 淀粉酶.3.2 氨溶液z质量分数约25%，pzo约910g/Lo注z如果买不到此浓度的氨溶液，可使用已知的、更大浓度的氨溶液(见5.5.2)。3. 3 乙醇或由甲醉变性的乙醇z体积分数至少为94%(见8.5)。3.4 刚果红溶液，lg刚果红溶于水中，稀释至lOOmL。注e可选择性地使用.刚果红榕液可使榕剂和水相界面清晰(见5.5
4、.的，也可使用其他能使水相提色而不影响测定结果的溶液.3.5 乙黯z不含过氧化物见8.3)，不含抗氧化剂，或抗氧化剂含量不大于2mg/吨，并满足空白试验的要求(见第3章、8.1和8.4)。3.6 石油黯z沸程3060C。3. 7 混合溶剂a等体积混合乙隧(3.5)和石油隧(3.6) ，使用前制备。4 仪器由于测定中使用了挥发性可燃溶剂，所有电器的使用均应按照这些溶剂使用的有关规定进行。常用实验室仪器及g国东技术监督局1997-05-28批准1998-09-01实施229 G/T 5413. 3-1997 4. 1 分析天平。4. 2 离心机z可安放抽脂瓶或管(4.6)，转速为500600r/m
5、in.可在抽脂瓶外端产生8090g的重力场。t在2可选择性使用4.3 蒸馆器或蒸发器z可在不超过100C情况下，蒸馆除掉脂肪收集瓶中的溶剂和乙醇，或蒸发除掉烧杯或平皿中的溶剂和乙醇(见5.5.10.5.5.14)。4.4 烘箱:电热的.通风口完全打开，工作区域温度可控制在102C土2C。配有适当的温度计。4. 5 水浴z温度可控制在65C土5C。4.6 毛氏抽脂瓶g抽脂瓶(或管，见注应带有适当的优质软木塞或其他不影响溶剂使用的瓶塞(如硅胶或聚四氟乙烯)。软木塞应先浸于乙融中(3.们，后放入60或60C以上的水中保持至少15min，然后在水中冷却.使用时木寡己饱和。不用时要一直浸泡在水中，浸泡用
6、水每天更换一次。注也可使用带虹吸管或烧瓶的抽脂管(或烧瓶) (8操作步骤有所不同，见附录A中规定。接头的内部长支管下端可成勺状。4.7 支架z放置抽脂瓶(或管。4.8 洗瓶z适合装混合熔剂(3.7)。不能使用塑料洗瓶。4. 9脂肪收集瓶z例如z容量为125250mL可加热烧瓶(平底烧瓶250mL锥形瓶或金属皿。若使用金属皿，最好为不锈钢、平底、有溢流口的，直径为80100mm，高约50rnrn0 4. 10 沸石.无脂肪、无气孔的瓷片或碳化硅或玻璃珠(用金属皿的情况下)。4. 11 量筒:5rnL和25rnLo4. 12 吸量管z带费j度的，10mLo4.13 金属夹钳z用于夹烧瓶、烧杯或皿。
7、4. 14 毛氏抽脂瓶播m器:可夹放毛氏抽脂瓶.摆动频率为100士10次/mlne5 操作步骤5. 1 样品的制备反复转动样品容器，使样品充分混合(必要时，将实验样品全部移入大的密闭容器中之后，再进行此操作)。5.2 样品部分轻轻搅拌或转动样品容器，以便混合实验样品。)，立即取样，直接放在抽脂瓶(4.6)或其他容器中，精确至lmg，取样量如下sa)高腊乳粉、全脂乳粉、全脂加糖乳粉和配方乳粉z约1日。b)部分脱脂乳粉z约1.拢。c)脱脂乳粉2约.5g。d)乳清粉约1.拢。e)赂乳粉约1.拢。含乳婴儿谷物(配方)食品g约1.拢。5. 3 空白试验空白试验与样品检验同时进行，使用相同步骤和相同试剂，
8、但用10mL水(见8.2)代替己稀释的样品(5.5.)。5.4 脂肪收集瓶的准备于干燥的收集瓶(4.9)中加入几粒沸石(4.10)，放入烘箱(4.4)中干燥lho使收集瓶冷却(防尘)至天平室的温度(玻璃收集瓶至少需要lh，金属皿至少0.5h)。230 GB/T 5413.3一1997注l 在去除榕剂过程中，特别是使用玻璃收集瓶时，沸石可以使沸腾均匀.用金属皿时，也可选择地使用沸石.2 收集瓶不可放入干燥器中，避免冷却不充分或冷却时间过辰。用夹钳(4.13)(为避免温度的变化)将收集瓶放到天平上称量，精确至O.lmgo5.5 测定5.5.1 样品处理5.5.1.1 不含淀粉样品 加入10mL65
9、.C土5-C的水，将试样洗入抽脂瓶的小球中，充分混合，直到样品完全分散，放入流动水中冷却。5. 5. 1.2 含淀粉样品将样品放入毛氏抽脂瓶中，加入约O.Ig的淀粉酶和一小磁性搅拌棒，混合均匀后，加入8IOmL45.C的蒸馆水，注意液商不要太高.盖上瓶寨子搅拌状态下，置65-C水豁中2h，每隔10min摇混一次。检验淀粉是否水解完全:加入两滴约O.lmol/L的破榕液，无蓝色出现，水解完全，否则将抽脂瓶重新置于水浴中，直至无蓝色产生。冷却毛氏抽腊瓶。5. 5. 2 加入2mL氨溶液(3.2)或同体积的浓氨溶液(见3.2注)，在小球中与巴溶解的样品充分混合。加入氨水后，应马上进行下一步骤.5.5
10、.3 将抽脂瓶放入65.C士5C的水浴(4.5)中，加热1520min，时而振荡一次，取出，冷却至室温。含淀粉样品不需水浴，静止30s后即可进行下面的步骤。5. 5. 4 加入10mL乙醇(3.3) ，轻轻地使内容物在小球和柱体间来回流动，和缓但彻底地进行混合，避免液体太接近瓶颈。如果需要，可加入2滴刚果红溶液(3.4)。5. 5. 5 加入25mL乙酶(3.日，塞上被水饱和的软木塞(见4.6)，或用水浸湿的其他瓶塞，将抽脂瓶保持在水平位置，小球的延伸部分朝上夹到摇混器I二，按约100次/min振荡烧瓶lmin，不要过度(避免形成持久乳化液)。在此期间，使液体由大球冲入小球。必要时将抽脂瓶放在
11、流水中冷却，然后小心地打开寨子，用少量的混合溶剂(3.7)冲洗塞子和瓶颈冲洗时使用洗瓶(4.8门，使冲洗液流入抽脂瓶或已准备好的脂肪收集瓶中(见5.4)。5.5.6 加入25mL石油隧(3.6) ，塞上重新润湿的塞子(浸入水中)，接5.5. 5所述，轻轻振荡30.0 5.5.7 将加塞的抽脂瓶放入离心机(4.2)中，在500600r/min下离心15min。如果没有离心机，则将抽脂瓶放到支架上(4.7)，静止至少30min，直到j上层液澄清，并明显与水相分离。必要时，放在流水中冷却抽脂瓶。5.5.8 小心地打开软木寨或瓶寨，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁，使冲洗液流入抽脂瓶或脂肪收集瓶中。
12、如果两相界面低于小球与瓶身相接处，则沿瓶壁边缘慢慢地加入水，使液面高于小球和瓶身相接处见图1) ，以便于倾倒。5.5.9持抽脂瓶的小球部，小心地将上层液尽可能地倒入己准备好的含有沸石的脂肪收集瓶中(也可选用金属皿)，避免倒出水层(见图2)。231 醋层界面 水层图1倾倒酷层前GB/T 5413.3-1997 界面水层第二次相第三世抽提后第-1Ii:抽提后图2倾倒酷层后(5.5.8.5.5.12.5.5.13) (5.5.9.5.5.12.5.5.13) 5. 5. 10 用少量混合溶剂冲洗瓶颈外部，冲洗液收集在脂肪收集瓶中。要小心操作，以防溶剂溅到抽脂瓶的外面.最好按5.5. 14所述，采用蒸
13、馆或蒸发的方法，去除脂肪收集瓶中的游剂或部分榕剂。5. 5. 11 向抽脂瓶中加入5mL乙醇(3.3) .用乙醇冲洗瓶颈内壁，按5.5.4所述进行混合.5.5.12 重复5.5. 55. 5. 10操作，进行第二次抽提，但只用15mL乙隧(3.5)和15mL石油田蓝(3.6) 用混合溶剂(3.7)冲洗瓶颈内壁.5.5.13 重复5.5. 55. 5. 9操作，进行第三次抽提，但只用15mL乙酶(3.5)和15mL石油酷(3.6) 用混合溶剂(3.7)冲洗瓶颈内壁.注2如果产品中脂肪的质量分数低于5%，可省略第三次抽提.5.5.14 采用蒸锚的方法除去收集瓶中的溶剂(包括乙醇).对烧杯或皿可用蒸
14、发(4.3)来除掉溶剂。蒸馆前用少量混合榕剂(3.7)冲洗瓶颈内部.5. 5. 15 将脂肪收集瓶放入102(;土2C的烘箱(4.4)中加热1h.取出收集瓶，冷却至天平室的温度(不要放入干燥器中，但要防尘，玻璃容器冷却至少1h.金属容器冷却至少0.5h)。称量，精确至O.1mg 0称量前不要擦收集瓶。用夹钳将收集瓶放到天平上避免温度变化)0 5. 5. 16 重复5.5. 15操作，直到脂肪收集瓶两次连续称量不超过0.5mg.记录收集瓶和抽提物的最低质量.5.5.17 为验证抽提物是否全部溶解，向脂肪收集瓶中加入25mL石油田蓝徽热，振播，直到脂肪全部溶解.如果抽提物全部溶于石油酿中，则含抽提
15、物的收集瓶的最终质量(见5.5.16)和最初质量(见5.4)之差，即为脂肪含量。5.5.18 着抽提物未全部榕于石油隧中，或怀疑抽提物是否全部为脂肪，则用热的石油酷洗提.允许微量的不溶物质沉淀.小心地倒出石油黯，不要倒出任何不榕物，重复此操作3次以上，再用石油酷冲洗收集瓶口的内部.最后，用混合溶剂冲洗收集瓶口的外部，避免溶液溅到瓶的外壁.将脂肪收集瓶放入102C土2C的烘箱(4.4)中，加热血，按5.5. 15和5.5.16所述去除石油酶，冷却，称量取5.5.16中测得的质量和5.5.18测得的质量之差作为脂肪的质量。注2选择带有虹吸管或洗瓶附件的抽脂管时见4.6注).步骤如附录A(标准的附录
16、)所述.6分析结果寝迷样品中脂肪含量E/100UZ叫一m，)豆(m，- m.) X 100 . ( 1 ) 232 GB/T 5413.3-1997 式中:mo样品的质量(5.2).g;m1一-5.5.16中测得的脂肪收集瓶和抽提物的质量.g , m，-一脂肪收集瓶的质量(5.4) .或在有不溶物存在下.5.5.18中测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量.g，m，一空白试验(5.3)中，脂肪收集瓶和5.5.16中测得的抽提物的质量.g , 叫一空白试验(5.3)中脂肪收集瓶(见5.4)的质量，或在有不溶物存在时.5.5.18中测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量.g.报告质量分数结果精确至0.01%。7
17、允许差7.1 重复性在短时间间隔内，由同一分析人员对同一样品所做的两次单独试验的结果之差，应不超过下列值3高脂乳粉、全脂乳粉、全脂加糖乳粉和配方乳粉0.2 g脂肪/100g样品部分脱脂乳粉、酷乳粉0.15g脂肪/100g样品一一脱脂乳粉0.1 g脂肪/100g样品一一乳清粉。.1g脂肪/100g祥品含乳婴儿谷物(配方)食品。.2g脂肪/100g样品7.2 重现性由不同实验室的两个分析人员对同一样品所做的两次独立试验结果之差，应不超过下列值:一离脂乳粉、全脂乳粉、全脂加糖乳粉和配方乳粉0.3 g脂肪/100日样品一二部分脱脂乳粉、酷乳粉0.25g脂肪/100g样品脱脂乳粉一一乳清粉一一含乳婴儿谷
18、物(配方)食品8 实验过程注意事项8. 1 空白试验检验试剂。.2g脂肪/100g样品。.2g脂肪/100g样品。.45g脂肪/100g样品在进行空白试验时，使用一个质量控制瓶，以消除环境及温度对检验结果的影响。在极其偶然的情况下，溶剂中可能会有易溶于脂肪的挥发性物质，此时应对所有试剂做空白试验。进行空白试验时在脂肪收集瓶中放入1g新鲜的元水奶油。必要时，于每100mL溶剂中加入19无水奶油后重新蒸锢，重新蒸馆后必须尽快使用。8.2 空白试验与样品测定同时进行对于存在非挥发性物质的试剂可用与样品测定同时进行的空白试验值进行校IE.抽脂瓶与天平室之间的温差可对抽提物的质量产生影响(5.5.16和
19、5.4或5.5. 18)。在理想的条件下(试剂空白值低，天平室温度相同，脂肪收集瓶充分冷却).该值通常小于O.5mg。在常规测定中，可忽略不汁。若此值稍高(土2.5mg).一般也可忽略不计，校正之后，结果仍是准确的。但当校正值大于2.5mg时，检验报告中应予以说明。如果空白试验值经常超过0.5mg.且近期没有对试剂进行检验，则应马上对试剂进行检验，更换或提纯任何不纯的试剂第3章和8.1)。8.3 乙隧中过氧化物的检验取一只具玻璃塞小量筒，用乙隧冲洗，然后加入10mL乙醋，再加入1mL新制备的100g/L的破化何溶剂，振荡，静止lmn，两相中均不得有黄色。也可使用其他适当的方法检验过氧化物。23
20、3 GB/T 5413. 3一1997在不加抗氧化剂的情况下，为长久保证乙隧中无过氧化物，使用前三天按下法处理s将铸?自削成长条，长度至少为乙酷瓶的一半，每升乙酷用80cm铐销。使用前，将铐片完全浸入每升中含有10g五水硫酸铜和2mL质量分数为98%的浓硫酸溶液中lmin，用水轻轻彻底地冲洗辞片，将湿的镀铜铸片放入乙酷瓶中即可。也可以使用其他方法，但不得影响检测结果。8.4 乙酿中含抗氧化剂的情况如果每lkg乙酷中约含lmg抗氧化剂，不影响使用。如乙酷中含有较高的抗氧化剂，例如:每千克中含有7mg抗氧化剂，此种酷仅用于常规测定，并且空白试验与样品测定要同时进行，以校正抗氧化剂残留物引起的系统误
21、差。若用于基准法测定，使用前应重新蒸馆。8.5 乙醇非甲醇变性乙醇只要不影响测定结果也可以使用。234 、GB/T 5413.3-1997 附录A(标准的附录)使用带虹吸管或洗瓶的抽脂管的操作步骤若使用带虹吸管或洗瓶的抽脂管(见4.6注).步骤如下所述。A1 步骤A 1.1 样品的制备z见5.L A 1.2 样品部分处理过程如5.2所述，但要使用抽脂管(4.6)。样品应尽快全部移入拍脂管底部。A 1.3 空白试验.见5.3和8.2。A 1.4 脂肪收集瓶的准备z见5.40A 1.5 测定A 1. 5. 1 样品处理A 1. 5. 1. 1 向样品中加入10mL65C土5C的水，将样品全部洗入抽
22、脂管的底部，彻底混合。接A1.5. 2 步骤。A1.5.1.2见5.5.1.2。A 1. 5. 2 加入2mL氨溶液(3.2)或同体积的氨溶液(3.2注).与管底部已稀释的样品彻底混合。加入氨水后，应立即进行下步操作。A 1. 5. 3 将抽脂管放入65C士5C的水浴(4.5)中，加热1520min.偶尔振荡样品管，然后冷却至室温。A 1. 5. 4 加入10mL乙醇(3.3).在管底部轻轻彻底地混合，必要时加入2滴刚果红溶液(3.4)。A 1. 5. 5 加入25mL乙酶(3.5) .加软木塞(已被水饱和).或用水浸湿的其他瓶塞，上下反转lmin，不要过度(避免形成持久性乳化液)。必要时，将
23、管子放入流动的水中冷却，然后小心地打开软木塞，用少量的混合溶剂(3.7)(使用洗瓶)(4.8)冲洗塞子和管颈，使冲洗液流入管中。A 1. 5. 6 加入25mL石油酷(3.6) .加塞(塞予重新用水润湿).按A1.5. 4所述轻轻振荡308。A 1. 5. 7 将加寨的管子放入离心机中，在500600r/min下(3.2)离心15min。如果没有离心机，则将管子放到支架(4.7)上，至少静止30min，直到上层液澄清，并明显地与水相分离，必要时，将管子放入流水中冷却.A 1. 5. 8 小心地打开软木塞，用少量混合榕f!J洗塞子和管颈，使冲洗液流入管中。A 1. 5. 9 将虹吸管或洗瓶接头插
24、入管中，向下压长支管，直到距两相界面的上方4mm处，内部长支管应与管轴平行.小心地将上层液移入含有沸石(4.10)的收集瓶中，也可用金属皿。避免移入任何水相。用少量混合溶剂冲洗长支管的出口，收集冲洗液于收集瓶中。A1.5.10 松开管颈处的接头，用少量的混合溶剂冲洗接头和内部长支管的较低部分，重新插好接头，将冲洗液移入收集瓶中。用少量的混合溶剂冲洗出口，冲洗液收集于瓶中，必要时，按5.5. 14所述，通过蒸馆或蒸发去除部分溶剂。A1.5.11 再松开管颈处的接头，微微抬高接头，加入5mL乙醇，用乙醇冲洗长支管，如A1.5. 4所述混 口。A1.5.12 重复A1.5. 5 A 1. 5. 10步骤进行第二次抽提，但仅用15mL(3.5)乙醇和15mL石油隧，抽235 GB/T 5413. 3-1997 提之后，在移开管接头时，用乙酷冲洗内部长文管。A1.5.13 重复Al.5. 5-Al. 5.10步骤，不加乙醇，进行第三次拍提，仅用15mL(3.5)乙醇和15mL石油酶，注z如果产品中脂肪的质量分数低于5%，可省略第三次抽提A1.5.14 以下按5.5.14-5.5.18所述进行。单位;mm外径制土o.4 外径制土o.4 的材。自内径+26土1睿量105mL土5mL壁厚1.5土0.5内径+26土1b)带洗瓶的抽脂管抽脂管图例图A1a)带虹吸智的抽脂管236
