1、囔ICS 65.020.01 B 16 道B中华人民共和国国家标准GB/T 28977-2012 菊花滑刃线虫检疫鉴定方法Detection and identification of Aphelenchoides ritzemabosi (Schwartz) Steiner & Buhrer 2012皿12回31发布2013-06-01实施也略揭髦.J. .，.飞. -入.:(，_， .:; _); ./仇勘且由是m、1;1涂层黯伪/中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布中华人民共和国国家标准菊花滑刃钱虫栓瘟鉴定方法GB/T 28977-2012 中国标准出版社出
2、版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(10004日网址总编室，(010)64275323发行中心，(010)51780235读者服务部，(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销铃开本880X12301/16 印张1字数24千字2013年4月第一版2013年4月第一次印刷锋书号，155066. 1-46397定价18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB/T 28977-2012 ，袅鑫国- 目。画本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检
3、疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位z宁波检验检疫科学技术研究院、广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心。本标准主要起草人E顾建锋、王江岭、张慧丽、赵立荣、陈先锋、闻伟刚。I lf!I GB/T 28977-2012 菊花滑刃线虫检疫鉴定方法1 范围本标准规定了菊花滑刃线虫的检疫鉴定方法。本标准适用于植物和繁殖材料、介质、土壤中菊花滑刃线虫的检疫和鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单适用于本文件。GB/T 24829 毛剌线虫属(传毒种类)
4、检疫鉴定方法3 菊花滑刃钱虫基本信息学名Aphelenchoides ritzemabosi CSchwar钮，1911)Steiner&. Buhrer, 1932。英文名chrysanthemum foliar nematode、chrysanthemumleaf nematode、budand leaf nematode of chrysanthemum、foliarnematode of chrysanthemum或chrysanthemumeelwormo 中文名又称菊花叶线虫、菊花芽线虫、菊花叶芽线虫、腋芽滑刃线虫、菊花叶枯线虫或里泽马博斯滑刃线虫。属滑刃目Aphelenchida
5、，滑刃科Aphelenchoididae，滑刃属Ahelenchoides0 菊花滑刃线虫是植物专性寄生线虫，主要外寄生或内寄生于多种寄主植物的芽、叶或花，也可存活于种子及土壤中，主要通过植物繁殖材料和鲜切花等进行远距离传播。相关种类有草莓滑刃线虫A.斤agariaeCRitzema Bos) Christie、水稻干尖线虫A.besseyi Christie 和毁芽滑刃线虫A.blastophthorus Franklin等。菊花滑刃线虫的其他信息参见附录Ao4 方法原理根据菊花滑刃线虫的危害状，在检疫现场肉眼观察，选取变色、畸形的花、叶、芽以及根际介质或土壤，用直接浸泡法或漏斗法等进行线虫
6、分离，用显微镜观察，根据形态特征对种类进行判定。雌虫尾尖突和雄虫交合剌形态是重要的种类鉴定依据。5 器材与试剂见GB/T24829 0 6 症状检查现场检疫时要注意观察植株花、叶、芽等是否有枯死、揭色角斑、矮小、畸形等受害症状(参见附录GB/T 28977-2012 A)，以及是否带介质、土壤等。重点选取表现上述症状的花、叶、芽等植物组织及根际介质或土壤，如无可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送实验室检测。7 实验室检验7. 1 钱虫分离实验室接到样品后应立即进行线虫分离。若不能及时分离，可将样品保存在4C10C冷藏箱中。种子、花、叶、芽、茎等可用直接浸泡法或漏斗法分
7、离线虫，介质或土壤适宜用漏斗法或浅盘分离法等分离线虫(参见GBjT24829)。7.2 体视显微镜镜栓菊花滑刃线虫体长约1000m，放太10倍以上可见。虫体细长，在水中不停作S形扭动，行动活跃。7.3 标本制作若镜检发现钱虫，需制作临时费片或永久玻片参见GBjT21829)。7.4 生物显微镜观察、摄影和测量应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影，主要鉴定特征包括雌虫尾尖突形态、后阴子宫囊、尾形、口针、侧钱、排泄孔和神经环位置、雄虫交合刺等。应在每张图片上加相应标尺，测量并计算a，b、b、c、c、V等值。如样品足够，应测量雌、雄虫各15条以上。8 形态学鉴窟8. 1 滑刃属结虫形恋鉴定特
8、征雌虫z体长0.5mm 1. 2 mm，热杀死后虫体直或略腹弯;头部高圃，常有明显撒缩，头架骨化弱;口针细弱，长约10m12m，不超过20m;中食道球发达，瓣门显著z雌虫阴门位于虫体中后部，一般位于体长的60%75%;单生殖腺、前伸，偶尔有回折z卵母细胞单行或多行排列s后阴子宫囊通常存在，并含有精子F尾圆锥形，有或元居尖突，尾尖突形态多变，雄虫z热杀死后尾端强烈腹弯，整个虫体呈勺形;交合剌玫瑰剌状、成对、不愈合F基顶和喋通常发达，有时缺s尾乳突通常3对，元交合伞g8.2 菊花滑刃线虫副计值测计值见表1.表1菊花滑刃线虫测计值特征菊花滑后阴子宫刃线虫L 体宽V或T囊*a b b c c mm m
9、 m 雄虫0.77-1. 2C 16.5-19.5 115-147 8.1-13.0 4.5-6.1 16.0-23.1 3.7-5.1 66.0-75.。2 GB/T 28977-2012 表1(续)特征菊花滑后阴子宫L 体宽刃线虫囊长a b b c c V或T口1mm m 雄虫0.63-0.93 16.0-19.2 3l. 0-53.3 10.0-14.。4.3-5.0 16.0-30.。2.8-3.1 35.0-64.。注，:L=体长;a=体长/最大体宽;b=体长/虫体前端至食道与肠连接处的距离忡=体长/虫体前端至食道腺末端的距离jC=体长/尾长;c=尾长/J!f.门处体宽;St=口针长
10、;v=虫体前端至阴门的距离XI00/体长;T=泄殖腔口至精巢末端的距离XI00/体长.注2:表内数据综合参考Allen，1952; Vovlas等，2005; Chizhov等，2006; Crozzoli等，2008.8.3 菊花滑刃钱虫形态鉴定特征雌虫E虫体细长，0.7 mm1. 2 mm;体环明显(宽为0.9m1.0m)，侧区为体宽的六分之一至五分之一，侧线4条z头部近半球形，继缩明显，头架骨化弱z口针细弱，针锥部急剧变尖，基部球小而明显s食道前体部较细，中食道球发达、卵形，瓣门显著，背、腹食道腺开口于中食道球z食道腺长叶状，背覆盖肠，长约4倍体宽z食道与肠交接处位于中食道球后约8m处，
11、神经环位于中食道球后约1.5倍体宽处，排泄孔位于神经环后约0.52倍体宽处F单卵巢前伸，卵母细胞多行排列z阴门横裂，阴门唇梢突起z后阴子宫囊发达，长度超过虹阴距的1/2，通常含有精子z尾长圆锥形，末端有24个尾尖突，使尾端侧面现呈刷状。雄虫=较常见，虫体尾部向腹面弯曲超过180飞单精巢前伸，交合剌玫瑰剌形，平滑弯曲，基顶和嗦不显著，背边长20.0m26.5m;尾乳突3对，第1对位于泄殖腔附近，第2对位于尾中部，第3对位于近尾端F尾端有24个尾尖突，形态多变(参见附录B、附录C、附录D)。8.4 与近似种的区别菊花滑刃线虫雄虫与属内其他近似种(主要是尾尖突呈星形的种类的比较参见附录E。除菊花滑刃
12、线虫外，滑刃属线虫中植物寄生线虫主要还有草莓滑刃线虫A.fragariae、水稻干尖线虫A.besseyi和毁芽滑刃线虫A.blasto phthorus 0 菊花滑刃线虫和水稻干尖线虫的区别是前者排泄孔位于神经环后O.52倍体宽处，后阴子宫囊长度超过脏阴距的二分之一，而后者排泄孔位于神经环对应处，后阴子宫囊小于缸阴距的三分之一。菊花滑刃线虫与草莓滑刃线虫、毁芽滑刃线虫的主要区别是雌虫尾尖突z草莓滑刃线虫雄虫末端钝尖，元尾尖突z毁芽滑刃线虫只有1个尾尖突。9 结果判断以雌虫和雄虫的形态学特征为主要鉴定依据。菊花滑刃线虫的主要鉴定特征是z侧线4条;雄虫后阴子宫囊长超过虹阴距的二分之一，常充满精子
13、F尾长圆锥形，尾尖突复杂，为24个向后伸的尾尖突，形成刷状结构。雄虫交合刺平滑腹弯，无基顶和暖。符合上述特征，可鉴定为菊花滑刃线虫，寄主与地理分布等信息可供参考。3 GB/T 28977-2012 10 记录和标本样晶保存若鉴定为菊花滑刃线虫，应将剩余的线虫杀死、固定后制成永久玻片保存z也可用4%甲醒固定后于指形管中长期保存。应保存的记录信息包括样品编号、为害症状(包括相关照片)、被感染材料的状态和来源、经鉴定的有害生物学名、测计数据、显微照片、标本鉴定人、鉴定时间、制作人、制作时间等信息。对含有线虫的剩余样品材料，经登记后妥善保存。保存期至少为6个月，期满后视情况作销毁处理。4 蕾GB/T
14、28977-2012 附录A(资料性附录)菊花滑刃线虫其他信息A.l 生物学特性菊花滑刃线虫是专性寄生线虫，可以在寄主植物叶片组织内寄生，也可以在叶芽、花芽和生长点营外寄生生活。主要以成虫在寄主植物的芽腋、生长点、叶片及其残体上越冬。次年春天，新叶初发期，当植物表面变得湿润时，线虫可借助水膜移动到寄主茎或叶部，从气孔或伤口人侵。当受害叶片掉落地面时，线虫在地面只能完成部分生活史。该种线虫营两性生殖，不能进行孤雌生殖。雌虫的后阴子宫囊可贮存精子，这些精子可向前移动，与发育成熟的卵受精结合，因此受精后的雕虫即使不被再次受精，亦可持续生育6个月。交配后的雌成虫在寄主植物叶片上产卵，每条雌成虫可产卵2
15、530粒。在17c 24 t条件下，完成1个世代需10 d14 d。菊花滑刃线虫繁殖力强，1年可以完成10代左右。只要温湿度适宜，诙结虫全年都可以繁殖，在受侵染的一张菊花叶片中线虫数量可高达15000条。植物种子也可携带钱虫，每14g受侵染的翠菊种子中可有300多条线虫。该病害发生的适宜温度是20oC28 C，高温有利于病害的发生。该线虫有较强的抗干旱能力，多数以休眠或脱水状态存插于植物组织和植物残体中，受感染的干燥菊花叶片4C存放3年后还能分离到活体钱虫，A.2 生态学特性A. 2.1 地理分布欧洲z英国、德国、匈牙利、克罗地亚、意大利、俄罗斯;北美洲:美国、墨西哥F南美洲z巴西、委内瑞拉F
16、大洋洲z斐济、新西兰、澳太利亚F非洲z南非、毛里求新;亚洲z中国、日本、印度、伊朗。我国曾报道云南等省偶有发现。A.2.2 寄主范围菊花滑刃线虫的寄主范围非常广，能寄生观赏植物、蔬菜、小果类植物和杂草等200多种植物，菊花(Dendranthema morifolium)是其典型寄主，其他重要的寄主有茄科(Solanaceae)、嚣粟科(Papaveraceae)、草莓(Fragariaspp.)等，以及西伯利亚牛舌草(Anchusamyosotidiflora)、银莲花(Anemonespp.)、芹菜(Apiumgraveolen)、紫苑属(Asterspp. )、秋海棠(Begoniasp
17、p. )、雏菊(Bellisspp. )、蒲包花(Calceolariaspp.)、风铃草(Campanulamedium)、西瓜(Citrulluslanatus)、飞燕草(Delhiniumgrandiorum)、大丽花(Dahliapinnata)、石竹(Dianthuschinensis)、金丝挑(Hypericumspp. )、高宦(Lactuca spp. )、番茄(Lycopersiconspp. )、紫罗兰(Matthiolaincana)、紫花首稽(Medicagosativa)、烟草(Nicotianaspp. )、莱豆(Phaseolusvulgaris)、福禄考(Phl
18、oxspp. )、酸浆属(Physalisspp. )、藏类(Pteridophyta)、北美杜鹊(Rhododendroncanadense)、非洲萦罗兰(Saintpauliaionantha)、瓜叶菊(Senecio cruentus)、大岩桐(Sinningiaseciosa)、绣线菊(Spiraeaspp.)、马鞭草(Verbenaofficinalis)、百日草(Zinniaeiegans)等。A.2.3 为害症状菊花滑刃线虫主要为害植物地上部的花、叶、芽。在菊花被侵染早期，线虫外寄生在芽和生长点中，GB/T 28977-2012 使花和芽受害，导致其生长受阻、畸形、扭曲、变小或不
19、开花、枯死，并且被取食部位表面有褐色粗糙伤痕。线虫取食叶肉细胞，由于受寄主叶脉的限制，叶片在脉间形成特征性的黄揭色角斑或扇形斑，病斑最后变为深揭色、枯死。病叶自下而上枯死，枯死叶片下垂不脱落。烟叶被侵染时，叶片上形成格状花纹。有时线虫可潜伏侵染，植株可携带大量的线虫而没有任何症状(参见图A.l)。a) 菊花叶片受害症状b) 百日草叶片受害症状c) 萦花地丁叶片曼害状况d) 朦类叶片受害症状圄A.1菊花滑到线虫为害寄主植物叶片症状A.2.4 传播途径和扩散方式菊花滑刃线虫能借助水膜作自主运动每晚能爬行约15cm)，爬行到相邻的植株上z能通过风、雨、枝叶接触和农事操作灌班、剪枝等等近距离传播s还能
20、通过种子、苗木、母株、插条、切花、植物残体以及介质、土壤等远距离扩散。6 GB/T 28977-2012 附录B(资料性附录)菊花滑到钱虫结描圄C-J 20m A,B -回100m C 1,Hn hsytzhJF忧?在民puf-!;三1!( B , ij A J H D.E 一一雄虫尾部zF.G.H.I.J一一雄虫尾部。G F 说明=A 雄虫整体zB一一雄虫整体sC一一雄虫体前部s7 菊花滑刃钱虫结描圄(引自Vovl画等，2005)圄B.1GB/T 28977-2012 说明EA 一一雌虫整体sB 一-雄虫整体sC，n，E，F一一雄虫尾zG,I 一一雄虫尾部E注=标尺为10m.8 附录C(资料
21、性附录菊花滑到钱虫光学显微照片H 雌虫阴门zJ一一体前都箭头示神经环hk一一侧线.圄C.1菊花滑刃线虫光学显微照片 e 说明zA一一雄虫头部，B一一侧线zGB/T 28977-2012 附录D(资料性附录菊花滑刃结虫扫描电镜圄|C 一一雌虫阴门sD，E，F-一雄虫尾部.固D.1菊花滑到结虫扫描电镜圄9 SKM咄咄|阳。-M附录资料性附录菊花滑到结虫蜡虫与近似种鉴定特征E 如o 菊花滑刃钱虫雌虫与近似种鉴定特征囊(OEPP/EPPO BuHetin , 2004) 种类尾尖突形态后阴子宫褒长度尾形排泄孔和神经环位置b 体长口针长侧线数a c 口1口1m 阿利加尔滑刃线虫星形5.5倍阴门处体宽，超
22、长圆锥形排泄孔位于神经25-35 7.0-9.0 0.50-0.70 10 4 13-22 (A. aligahiensis) 过脏阴距的二分之一环略前安德烈滑刃线虫星形3倍阴门处体宽长圆锥形不详23-28 3.2-3.9 0.39-0.44 9.0-10.0 3 6.0-12 (A. andrassyi) 星尾滑刃线虫星形2倍阴门处体宽圆锥形排泄孔位于神经24-30 8-9 0.34-0.74 11-15 4 13-16 (A. asterocaudatus) 环之后星尖突滑刃线虫星形1倍阴门处体宽或圆锥形排泄孔位于神经32-39 5.5-9.5 0.39-0.54 9 4 10.9-14.
23、5 (A. asteromucronatus) 更短环后缘水稻干尖线虫2.5-3.5倍回门处体排泄孔位于神经星形宽，小于Jtt阴距的三分圆锥形26.6-58 9.0-13.1 0.57-0.88 10-12.5 4 13.8-21 (A. besseyi ) 之一环前缘毁芽滑刃线虫单尾尖突约为虹阴距的二分圆锥形排泄孔位于神经32-47 9.3-11 0.68-0.9 15-19.5 4 16-21 (A. blastophthorus) 之一环对应处短针滑刃线虫星形虹阴距的三分之一至圆锥形排泄孔位于神经29.1-35.。8.1-10.5 0.39-0.63 6.0-8.0 2 11. 1-15
24、. 7 (A. brevi.stylus) 三分之二环之前草莓芽线虫无尾尖突超过脏阴距的二分长圆锥形排泄孔位于神经45-60 8-15 0.45-0.80 10-11 2 12-20 (A. fragariae) 之一环略后 囊E.l, 。因时，M习|MO-M表E.1 (续)种类尾尖突形态后阴子宫褒长度尾形排泄孔和神经环位置b 体*口针长侧线数a c 自1自1m !古氏滑刃线虫星形3倍阴门处体宽弯圆锥形排泄孔位于神经29-39 8-10 0.46-0.61 11.5-12.5 4 14-18 (A. goodeyi) 环之后海卢尔滑刃线虫星形1.5倍阴门处体宽圆锥形排泄孔位于神经26.6 10
25、.2 0.57 13 不清晰14.7 (A. hylurgi) 环略后l琼斯滑刃线虫星形近2倍阴门处体宽，圆锥形排泄孔位于神经20-28 9.3-11.0 0.72-0.99 11. 0-14.。4 16-22 (A. jonesi) 约为E阴距的二分之一环对应处地衣滑刃线虫星形脏阴距的二分之一长阎锥形排泄孔位于神经32-43 7.0-10.5 0.53-0.69 9.5-10 4 15-17 (A. lichenicola) 以上环对应处或后缘农维勒滑刃线虫星形3倍阴门处体宽圆锥形不详31 不详O. 597 12.8 3 17 (A. nonveilleri) 末端有2-排泄孔位于神经菊花滑
26、刃线虫4个指状微虹阴距的二分之一长因锥形环后0.5-2倍体40-45 10-13 0.77-1. 20 12 4 (A. ritzemabosi) 突，侧面观以上宽处呈刷状锡迪基滑刃线虫排泄孔位于神经星形0.5-1倍阴门处体宽亚困柱形环后缘，有时稍26.7-38.9 7.1-9.7 0.37-0.70 11-12.5 4 (A. siddiqii) 靠前森林滑刃线虫星形不详弯圆锥形不详37-38 8.0-9.7 0.48-0.56 15-16 9.5-10 4 (A. silvester) 单位滑刃线虫星形虹阴距的五分之一至圆锥形排泄孔位于神经30-36.0 7.9-10.2 0.48-0.7
27、6 10.0-11.0 2 13.0-17.5 (A. unisexus) 三分之一环后缘，或略后华莱士滑刃线虫星形2倍阴门处体宽弯圆锥形排泄孔位于神经22-23 7.8-8.5 0.69-0.73 13.5-14 15-17 4 (A. wallacei) 环之前NFON|hhmNH筒。GB/T 28977-2012 献刘维志.植物病原线虫学MJ.北京z中国农业出版社，2000:322-326. 刘维志.植物线虫志MJ.北京z中国农业出版社，2004:603-605. 谢辉.植物线虫分类学(第二版)M.北京z高等教育出版社.2005:303-304. 谢辉.菊花滑刃线虫及其检测和防疫方法1.
28、植物检疫，2007，21(3):190-192.D. D. Waele. Foliar nematodes: Aphelenchoides species M J. CAB International, 2002: 文考参lJ 2J 3J 4J 5J 141-151. 6J D. J. Hunt. Aphelenchida, Longidoridae and Trichodoridae.their systematics and bionomics. WallingfordMJ. UK: CAB International, 1993: 63-67. 7J F. Shahina. A Diag
29、nostic compendium of the genus Aphelenchoides Fischer, 1894 (Nema tode:Aphelenchida) with some new records of the group from Pakistan1J. Pakistan Journal of Nema tology,1996 ,14(1): 1-32. 8J OEPP /EPPO. PM7/39 Diagnostics protocols for regulated pests: Aphelenchoides Besseyi. Bulletin OEPP /EPPO Bul
30、letin, 2004 ,34: 303-308. 9J M. R. Siddiqi. Aphelenchoides ritzemabosi ,C. 1. H. Descriptions of Plantparasitic Nematodes MJ. UK:Commonwealth Agricultural Bureaux, Farnharm Royal , 1974 ,Set 3 , No. 32. 10J N. Vovlas,A. Minuto &. A. Garibaldi,et al. Identification and histopathology of the foliar ne
31、matode Aphelenchoides ritzemabosi (Nematoda:Aphelenchoidae) on basil in Italy1. Nematology, 2005 ,7(2):301-308. l1J N. V. Chizhov, A. O. Chumakova &. A. S. Subbotin, et al. Morphological and molecular characterization of foliar nematodes of the genus Aphelenchoides: A.斤agariaeand A. ritzemabosi (Nematoda:Aphelenchoididae) from the Main Botanical Garden of the Russian Academy of Sciences , Moscow1J. Russian Journal of Nematology, 2006 , 14(2): 179-184. 侵权必究AU 号一价书一定* 版权专有18.00 Jt 打印H期:2013年5月17日F002A
