1、GB/T 18204.8-2000 前主口为贯彻执行公共场所卫生管理条例和GB96639673-1996、GB16153-1996(公共场所卫生标准)，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。本标准中的方法是与GB96639673-1996， GB 16153一1996相配套的监测检验方法。本标准为首次发布。本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准起草单位:北京市卫生防疫站、江苏省卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所。本标准主要起草人:高晖、封幼玲、周淑玉、符晓梅、韩秀援。27 中华人民共和国国家标准公共场所拖鞋微生物检验方法霉菌和酵母菌测定Methods of microbiolo
2、gical examinaton for slippers in public places -Determination of molds and yeasts count 1 范围本标准规定了公共场所公用拖鞋霉菌和酵母菌的检验方法。本标准造用于公共场所公用拖鞋霉菌和酵母菌的测定。2 定义本标准采用下列定义。霉菌和酵母菌测定determination of molds and yeasts count GB/T 18204. 8-2000 指在一定条件培养后.50cm2面积检样中所含有的霉菌和酵母菌落数。霉菌和酵母菌主要作为判定被检样品被霉菌和酵母菌污染程度的标志，以便对被检样进行卫生学评价
3、时提供依据。3 仪器和材料3. 1 恒温箱:25-28C。3. 2 显微镜。3. 3 高压蒸汽灭菌器。3. 4 酒精灯。3. 5 接种针。3.6 平皿:直径9cm。3. 7 试管架。3.8 试管。3.9 玻璃珠。3.10 元菌棉拭子。4 培养基和试剂4. 1 生理盐水氯化铀8.5 g 蒸情水1 000 mL 榕解后，分装到加玻璃珠的试管内.10mL和9mL.121 C20 min高压灭菌。4.2 霉菌培养基成分:蛋白陈5g 酵母浸出粉2 g 国家质量技术监督局2000-09-30批准2001- 01-01实施GB/T 18204. 8 - 2000 葡萄糖20 g 磷酸氢二饵1 g 硫酸镜(M
4、gS04 7H20) 0.5 g 琼脂20 g 氯霉素0.1 g 蒸馆水1 000 mL 制法:除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温榕解，调pH为6.8，煮沸，加葡萄糖榕解后，过滤调pH，使灭菌后pH为6.4土O.2 ,1l5C20 min高压灭菌。4.3 虎红(孟加拉红)培养基成分:蛋白陈5g 葡萄糖10 g 磷酸二氢押硫酸模(MgS047H20) 琼脂1 : 3 000虎红水榕被氯霉素1 g 0.5 g 20 g 100 mL 0.1 g 蒸馆水1 000 mL 制法:将上述各成分(除虎红外)加入蒸榴水中溶解后，再加入虎红溶液，分装后，高压灭菌121C 20 min 。4.4 马铃薯葡萄糖
5、琼脂培养基(PDA)成分:马铃薯(去皮切块)300 g 葡萄糖20 g 琼脂20 g 蒸馆水1 000 mL 制法:将马铃薯去皮切块，加1000 mL蒸馆水，煮沸1020min。用纱布过滤，补加蒸锢水至1 000 mL。加入葡萄糖和琼脂，加热榕化，分装，121C高压灭菌20min。5 操作步骤5.1 将无菌棉拭子蘸取无菌生理盐水，在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处5cmX5 cm面积上，有顺序地均匀涂抹3次(一双拖鞋为一份样品)后，用灭菌剪刀将棉拭子手执部分剪断，将棉拭子放入10mL装有玻璃珠的无菌盐水管中。5.2 将盛有棉拭子的盐水管在手心用力振葫100次，再用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50
6、次，使霉菌抱子充分散开。此液为1: 10稀释液。5.3 用灭菌吸管吸取1: 10检液2mL，分别注入到2个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注入9mL加有玻璃珠的灭菌盐水管中，换1支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1: 100稀释液。5.4 按上述操作顺序作10倍递增稀释液，每稀释一次，换一支1mL灭菌吸管，根据样品的污染情况，选择3个合适的稀释度。5. 5 将溶化并冷却至45C左右的培养基注入灭菌的平皿中，待琼脂凝固后，倒置于2528C温箱中，3天后开始观察，共培养观察一周。5. 6 计算方法:通常选择菌落数在30100之间的平皿进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每毫升检样中所含真菌数。若有两个稀释度的菌落数皆在规定范围之间或三个稀释度皆不在此范围时，应参照细菌总数的报告方式报告。5. 7 结果报告:见式(1)。29 式中:m一一真菌菌落数.cfu/50cm2; n一一每皿的平均真菌菌落数;h一一稀释倍数。GB/T 18204.8-2000 m = n k 注s一只拖鞋的涂抹面积是25cm2(5 cmX5 cm)，一双拖鞋的涂抹面积则为50cm2 (25 cm2 X 2)。30 .( 1 )
