1、G!T 18204. 4-2000 前为贯彻执行公共场所卫生管理条例和GB9663-9673-1996、GB16153-1996(公共场所卫生标准儿加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。本标准中的方法是与GB9663-9673-1996 ,GB 16153-1996相配套的监测检验方法.本标准第一法为仲裁法。本标准为首次发布。本标准由中华人民共和国卫生部提出.本标准起草单位:江苏省卫生防疫站、广东省卫生防疫站、天津市卫生防疫站、辽宁省卫生防疫站.本标准主要起草人:涂抹法:符饶梅、封幼玲、杭万双、蔡泼、张淑兰z戳印法:姜淑荣、张利伯、猪广鑫、付亚书。13 1 范围中华人民共和国国家标准公共场
2、所毛巾、床上卧具微生物检验方法细菌总数测定Methods of microbiological examination for towel and bedclothes in puhlic places -Determination of aerobic bacterial count 本标准规定了公共场所毛巾、床上卧具细菌总数的测定方法.本标准适用于公共场所内公用毛巾、床上卧具细菌总数的测定.2 引用标准GB/T 18204.4-2000 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文.本标准出版时，所示版本均为有效.所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版
3、本的可能性.GB/T 18204.2-2000 公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定3 定义本标准采用下列定义，细菌总数aerobic bacterial CQunt 指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后(培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等).25 cm表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数主要作为判定公用毛巾、床上f具被污染程度的标志.检测细菌总数，为公用毛巾、床上卧具清洗消毒效果的判定和评价提供依据.第一法涂抹法4 仪器见GB!T18204.2-2000中第4章.5 培养基和试剂见GB/T
4、18204.2-2000中第5章.6 枪验程序见GB/T18204.2-2000中第6章.国凉质量技术监督局2000-09-30批准2001 - 01 -01实施14 G/T 18204. 4 - 2000 7 操作步骤7. 1 采样方法? 1. 1 随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。7.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾对折后两面的中央各25cm(5 cmX 5 cm)面积范围;床单、被单在上下两部各25cm面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放人10mL生理盐水内.4h内送检。7.2 检验方法7.2.1 将放有棉拭子的试管充分振摇.此液
5、为1: 10稀释液.7.2.2 以无商操作，吸取2mL检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1mL加到9mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1: 100稀释液。每个稀释度做两块平皿。? 2. 3 将已融化冷至45C左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15mL.并立即旋摇平皿。冷凝后放36C土1C培养箱培养48h. 8 菌落计数方法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数;若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个
6、平皿菌落计数后乘以2.所得结果代表全皿菌落数。公用毛巾、床上Jl)O具细菌总数按公式(1)计算:式中zm一一细菌总数.cfu/25cm; 卜一稀释倍数;n一一平均菌落数。9 菌落数报告方式k n m= 2 见GB/T18204.2-2000中第9章.第二法戳印法10 原理. ( 1 ) 用特制的内径为3.57cm的培养皿，注人营养琼脂培养基，使其表面比皿边高2-3mmo采样时将培养基表面和被检物品表面吻合，轻轻按压3.4s，使其被检查物体表面能够均匀地与培养基表面接触。然后盖上皿盖，置恒温箱37C培养24h后，计数培养基表团(10cm)生长的细茵茵落数.11 培养基和试剂11. 1 营养琼脂培
7、养基11- 1.1 成分z蛋白豚牛肉膏氯化创琼脂10 g 3g 5g 1520 g 15 GB/T 18204.4 - 2000 蒸饱水1 000 mL 11.1.2 制法:将上述成分混合后，加热贯穿解，调pH为7.4-7.6.过滤、分装于玻璃容器中，经121C灭菌20min，储存于冷暗处备用.12 仪器12. 1 高压蒸汽灭茵稽.12.2 干热灭菌器.12.3 恒温箱.12.4 冰箱.12.5 特制戳印平皿(内径3.57cm). 12.6 制备培养基用的一般器材。13 检验步骤13. 1 将溶化并冷至50-55C的营养琼脂培养基，倾注于己灭菌的特制戳印平皿内(使皿内部培养基平面比皿边缘高2-3mm).每Jlll约10mL.待凝固后，盖上皿盖(皿盖与培养基隔一定空间).翻转平皿，在4C下保存备用.13. 2 将被检物品放平，再将皿盖打开，放在被检物品表面上，用手轻轻按压3.45，取下，盖上皿盏，置37C恒温箱内，培养24h后观察结果，计数细茵茵落数.14 结果计算用肉眼观察，点数培养基表面茵落数，其细菌总数为10cm气每皿)表面积的菌落数。本法简便易行、可靠，可直接采样做细菌培养.16
