1、:才己中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN /T 1113-2002 进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白、叶绿素含量的测定方法Method for determination of phycocyanin and chlorophyiis in spirulina powder for import and export 2002 - 05 -20发布2002 -11 -01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国海南出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人:张薇君、郝纯彦、李高兰、云昌浩。本标准系首次发布的检验检疫行业标
2、准。SN /T 1113-2002 1 范围进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白、叶绿素含量的测定方法SN /T 1113-2002 本标准规定了进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白及叶绿素含量检验的抽样、制样和分光光度测定方法。本标准适用于进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白及叶绿素含量的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 16919 食用螺旋藻粉3 抽样和制样按GB/T1691
3、9规定的方法执行。4 测定方法4.1 藻蓝蛋白含量测定4. 1. 1 方法原理样品用磷酸盐缓冲液洛解，置冰箱中冷冻、融解，使色素蛋白析出，分离后的提取液用分光光度法测定。4.1.2 试剂磷酸盐缓冲溶液:将0.1mol!L磷酸二氢饵榕液与0.1mol!L磷酸氢二饵溶液(45+55.V/V)混合，溶液pH值为7.0。4. 1- 3 仪器设备4. 1- 3. 1 分光光度计。4. 1. 3. 2 超声波振荡器。4.1. 3. 3 离心机:3000r/min。4.1. 3. 4 低温冰箱:一200C。4.1. 3. 5 离心管:50mL。4. 1- 4 样晶测定称取试样O.25 g o. 5 g (精
4、确至0.0001 g).用缓冲液(4.1.2)溶解，超声振荡5min.定容于250 mL容量瓶中，摇匀。将溶液全部转入250mL广口塑料瓶，置于一200C冰箱内冷冻12h(或放置过夜).取出解冻，摇匀。取部分溶液于离心管中，在3000r/min转速下离心15mino取上层清液.1cm比色皿，在分光光度计上分别测定620nm、652nm、562nm处的吸光度，用缓冲液(4.1. 2)做空白。4.1.5 结果计算根据下式(1)、式(2)、式(3)、式(4)计算出试样中藻蓝蛋白的质量分数含量。1 SN/T 1113-2002 式中:X j = 0.187A62o一0.089A652(1 ) X2 =
5、 O. 196A652 - O. 041A62o ( 2 ) X3 = O. 104A562一0.251Xj一0.088X2(3 ) (X j + X 2 + X 3) x V X 100 4= ( 4 ) m X 1 000 Xj一一测试液中藻蓝素的含量，单位为毫克每毫升(mg/mL); X2一一测试液中异藻蓝素的含量，单位为毫克每毫升(mg/mL); X3一一测试液中藻红素的含量，单位为毫克每毫升(mg/mL); A一一相应波长处(620nm , 652 nm , 562 nm)测得吸光值。X4一一试样中藻蓝蛋白的质量分数，单位为克每100克(g/100g); V 样品定容体积，单位为毫升
6、(mL)。m一一试样质量，单位为克(g)。测定结果取平行试验结果的算术平均值，保留小数点后第二位。平行试验允许误差(相对)不大于4%。注2整个操作过程须注意避光，分光光度测定应在15min内完成。4.2 叶绿素含量测定4.2.1 方法原理以丙酣提取试样中的叶绿素，用乙酷分层，硫酸铀溶液洗涤净化，于642nm及660nm波长下比色法定量。4.2.2 试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馆水。4.2.2.1 碳酸钙。4.2.2.2 石英砂:试剂级。4.2.2.3 丙酣。4.2.2.4 元水硫酸铀:(650C灼烧4h)。4.2.2.5 乙酿。4.2.2.6 丙酣-水溶液:(85+15，V/V
7、)。4.2.2.7 硫酸铀水溶液:(2% ，m/V)。4.2.3 仪器设备。4.2. 3. 1 分光光度计。4.2. 3. 2 玻璃研钵:100mL。4.2. 3. 3 G3玻璃砂芯漏斗。4.2. 3. 4 分液漏斗:250mL。4.2. 3. 5 棕色容量瓶:50mL。4.2.3.6 移液管:10mL、20mL。4.2.4 分析步骤4.2.4.1 提取称取试样约0.2g (精确到0.0001剖，置于100mL玻璃研钵中，加碳酸钙约0.2g及石英砂约0.5 g，小心研磨5min，加入2mL丙酣-水洛液(4.2.2.6)继续研磨至干粉状;将研磨物全部转入G3玻璃漏斗，缓缓抽滤，继续用丙酣-7.1
8、.洛液(4.2.2.6)少量反复洗涤研钵并转移至漏斗内，至近无色，抽干;将漏斗内残渣重新倒回研钵中，加少量丙嗣继续研磨1min，再转入漏斗中，抽滤，至滤液接近元色(约需30mL35 mL丙酣-水溶液)。SN/T 1113-2002 4.2.4.2 分离净化将滤液全部转入内盛50mL 2%硫酸铀洛液的250mL分液漏斗中，用20mL乙酷分次洗涤抽滤瓶，并入分液漏斗中，振摇1min，使分层;水层放入另一分液漏斗中，加10mL乙酷萃取，弃去水层;有机层并入第一个分液漏斗中，用水洗涤两次，每次20mL，弃去水层。将乙酷层通过一装有5g无水硫酸铀的小漏斗滤入50mL棕色容量瓶中，用少量乙酷洗涤分液漏斗，
9、并洗去无水硫酸铀层中的色素，定容、摇匀，待用。4.2.4.3 测定取上述溶液10mL20 mL到50mL棕色容量瓶中，用乙醒定容，摇匀，立即于分光光度计上测定642 nm及660nm处的吸光值，1cm比色皿，用乙酷作空白。4.2.5 结果计算按下式(5)、式(6)计算试样中的总叶绿素质量分数含量:式中:Xs = 7. 12A66o + 16. 8A642 X , =X, X V X F =X 100 o m X 1 000 Xs一一样液中总叶绿素的含量，单位为毫克每升(mg/L); A一一相应波长处(660nm , 642 nm)测得吸光值;X6-一试样中总叶绿素的质量分数，单位为毫克每100
10、克(mg/100g); v 提取液的总体积，单位为毫升(mL);F一一试样稀释倍数;m一一试样质量，单位为克(g)。测定结果取平行试验结果的算术平均值，保留小数点后第一位。平行试验允许误差(相对)不大于3%。. ( 5 ) . ( 6 ) NOON-仍F同Z中华人民共和国出入境检验检疫行业标准-进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白、叶绿素含量的测定方法, SN/T 1113-2002 * 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷每开本880X12301/16 印张1/2字数9千字2002年9月第一版2002年9月第一次印刷印数1-2000 7G 4峰定价6.00 网址书号:155066. 2-14708 版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533SN/T 111
