1、ICS 65. 020. 30 B 44 G昌中华人民共和国国家标准GB/ T 14926.50,-.,14926. 55- 2001 实验动物微生物学检测方法(3)Laboratory animal- Microbiological examination methods 2001- 08 -29发布2002 - 05 -01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局GB/T 14926. 55- 2001 前本标准规定了免疫酶组织化学法所用试剂、器材和操作步骤等。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:贺争鸣。19 中华人民共和国
2、国家标准实验动物免疫酶组织化学法G/T 14926. 55-2001 Laboratory animal-Immunohistochemistry (IH) 1 范围本标准规定了免疫酶组织化学法(lH)所用试剂、器材和操作步骤等。本标准适用于实验动物病毒抗原的检测。2 原理用己知的特异性抗体与标本中待测抗原反应，如待测抗原是特异性抗体的相应抗原则形成抗原抗体复合物。此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性，可与相应的第二抗体酶结合物结合，遇酶底物产生颜色反应。在普通显微镜下，根据颜色的反应判定结果。3 主要试剂与器材3. 1 试剂3. 1. 1 抗病毒单克隆抗体或抗血清。3. 1.2 羊或兔抗小鼠、大
3、鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬、猴IgG抗体标记辣根过氧化物酶。3. 1.3 PBS(O. 01 mol / L ,pH7. 6) 氯化铀8. 5 g 磷酸工氢铀(NaHzP04 2HzO) 0.20 g 磷酸二氢饷(NaHzP04 12H20) 3. 12 g 蒸馆水加至1000 mL 3.1.4 底物溶液3，3-二股基联苯胶盐酸盐(DAB)40 mg PBS 100 mL 丙酣5 mL 3%过氧化氢0.1 mL 3. 2 器材3. 2. 1 石蜡切片机或冰冻切片机。3. 2.2 载玻片及盖玻片。3. 2. 3 普通显微镜。4 操作步骤4. 1 冰冻切片风干后用丙翻固定1015min，石蜡切片，常规
4、脱蜡至PBS(切片应用白胶或锚矶明胶做粘合剂.以防脱片)。4.2 去内源酶用0.3%过氧化氢甲醇溶液或1%盐酸酒精37C作用30min。中华人民共和国国家质量监督检验检疲总局2001-08 -29批准2002-05-01实施20 GB/ T 14926. 55- 2001 4. 3 膜蛋白酶消化需要时用膜蛋白酶消化处理，以便充分暴露抗原。4.4 漂洗PBS洗3次，每次5min。4.5 封闭5%小牛血清或1: 10稀释的正常马血清，37C湿盒中作用30min。4. 6 加适当稀释的己知单抗或抗血清，37C湿盒中作用1h或30min后4C过夜。4. 7 漂洗同4.4。4. 8 加适当稀释的第三抗体
5、酶结合物，37C湿盒作用1h。4.9 漂洗同4.4。4.10 底物显色新鲜配制的DAB溶液显色510min后漂洗。4. 11 衬染苏木素或甲基绿衬染细胞核或细胞质。4. 12 常规脱水、透明、封片、显微镜观察。5 结果判定对照片本底清晰，背景无非特异着染，被检物呈黄至棕褐色着染，即可判为阳性。ccnr-UMH川恼。飞(CMUUVCF飞Lgu华人民共和国家标准实验动物微生物学检测方法(3)GB/ T 14926. 5014926. 55一2001国出l9峰中国标准出版社出版北京复兴门外三里问北街16号邮政编码:100045 电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售* 开本880X1230 1/16印张1地字数39千字2002年2月第一版2002年2月第一次印刷印数1-200 0 * 7G 定价13.00网址书号:155066 1-18098 书6595-549 版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533科目GB/T 14926.50-2001 H
