1、ICS 65.120 B 46 GB 中华人民共和国国家标准GB/T 14702-2002 代替GB/T 14702-1993 饲料中维生素B6的测定高效液相色谱法Determination of vitamin B6 in feeds-High-performance of Iiquid chromatography 2002 -10 -31发布2003 - 04 -01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局050928077629 GB/T 14702-2002 前本标准修订了GB/T14702一1993(饲料中维生素民的测定方法)，较修订前具有高效、快捷、准确的特点。本标准参考化
2、学分析协会第六十七期发表的复合预棍料中抗坏血酸、烟酷腊、毗哆醇、硫胶素及核黄素的液相色谱分析方法而制定。本标准与GB/T14702-1993的主要技术差异:标准规定了高效液相色谱法测定饲料中的维生素队，确定了试样的提取条件、色谱条件、重复性要求;确定了适用范围为维生素民含量大于30mg/kg的复合预混合饲料及维生素预混合饲料。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标啡主要起草人:李兰、陈必芳、索德成、杨文军。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:GB/T14702一1993。1 范围饲料中维生素队的测定高效液相色谱法本标准规定了用高
3、效液相色谱仪测定饲料中维生素民含量的方法。GB/T 14702-2002 本标准适用于维生素民含量大于30mg/峙的复合预混合饲料、维生素预?昆合饲料的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699. 1 饲料采样方法3 原理试样中维生素B6经酸性提取液超声提取后，注入高效液相色谱仪反相色谱系统中进
4、行分离，用紫外检测器(或二极管矩阵检测器)检测，外标法计算维生素民的含量。4 试剂和溶渡除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馆水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682.1中一级用水规定。4. 1 乙二肢四乙酸二铀(EDTA)。4.2 庚烧磺酸铀(PICB7)，优级纯。4.3 冰乙酸，优级纯。4.4 三乙肢，色谱纯。4.5 甲醇，色谱纯。4.6 盐酸溶液，c(HCl)=O.lmol/L。4. 7 提取液:在已装入约700mL/L去离子水的1000 mL容量瓶中，加入50mg EDTA(4.1)待全部溶解后，加入25mL冰乙酸(4.3)、5mL三乙胶(4.的，用去离子水定容至刻度摇匀。取8
5、60mL上述溶液与140mL甲醇氓合，即得。4.8 流动相:在已装入约700mL去离子水的1000 mL容量瓶中，称入50mg(精确至0.001g)EDTA (4.1)、1.1 g(精确至0.001g)庚皖磺酸铀(4.2)，待全部溶解后加入25mL冰乙酸(4.3)、5mL三乙股(4.4) ，用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙股调节该溶液pH至3.40:1:0.02，过0.45m滤膜。取该溶液860mL与140mL甲醇(4.5)混合，超声脱气，待用。4.9维生素民标准溶液:a) 维生素B6标准贮备液:准确称取维生素B60.050 0 g于100mL棕色容量瓶中，加盐酸榕液(4.6)约三分之
6、二体积，超声15min，待全部溶解后，用盐酸榕液(4.6)定容至刻度。此榕液浓度为500g/mL，冰箱4C避光保存，可使用3个月。GB/ T 14702-2002 b) 维生素B6标准工作液A.准确吸取2.00mL维生素民标准贮备液4.9a)于50mL棕色容量瓶中，用流动相(4.8)定容至刻度。该标准工作液浓度为20周/mL。c) 维生素B6标准工作液B.准确吸取5.00mL维生素民标准工作液A4.9b)于50mL棕色容量瓶中，用流动相(4.8)定容至刻度。该标准工作液浓度为2.0吨/mL。5 仪器、设备5.1 实验室常用玻璃器皿。5.2 pH计(带温控，精确至0.01)。5. 3 超声波提取
7、器。5.4 5. 5 6 试样的制备按GB/T14699. 1 j 7 分析步骤0. 001 g，于100m 20 min(中间旋摇则需离心)。取部7.2 测定7.2.1 高效液相色谱柱:长150保留时间:4min5 min。7.2.2 定量测定00 g，磨碎，全部通过g/mL待上机。按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数二有有所测样品维生素民的含量向色谱仪注入工作液A 4. 9 b)或B4.9c)及试样溶液(7.1)，得到色谱峰面积的响应值，用标准溶液峰面积平均值定量计算。标准工作液应在分析始末分别进样，在样品多时，分析中间应插入标准工作液校正出峰时间。8 结果计算8. 1 试样中维生素队的
8、含量按式(1)计算:P, X V X C, X V盯)， -一-P, X m X V , ( 1 ) 2 式中:E一一一试样中维生素B6的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); m一试样质量，单位为克(g); Vi一一试样榕液进样体积，单位为微升(L);Pi一一试样榕液峰面积值;Ci一一标准榕液浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V 标准溶液进样体积，单位为微升(L);瓦;一一标准溶液峰面积平均值。8.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数字3位。9 重复性同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差:维生素B6含量/(mg/kg)二三5.00X1025. OOX 102 相对偏
9、差/(%)士5.。士10.0GB/T 14702 2002 NOONNOh寸阳阁。国华人民共和国家标准饲料中维生素矶的测定高效遭相色谱法GB/T 14702-2002 中晤中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售每印张1/2字数8千字2003年3月第一次印刷开本880X12301/16 2003年3月第一版印数1-20007G 当岳定价8.00网址书号:155066. 1-19186 版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 14702-2002
