1、ICS 07. 100 c 53 中华人民共和国国家标准繁殖试Reproductive study 2003-09-24发布中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会GB 15193.15-2003 代替GB15193. 15 1994 验2004-05-01实施发布95 GB 15193. 15-2003 96 前穹圭F司本标准全文强制。本标准代替GB15193. 15 1994繁殖试验儿本标准与GB15193. 15 1994相比主要修改如下一一在“范围”中增加了受试物的具体内容：食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加
2、剂（含营养强化剂）、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等；将“实验大鼠”改为“实验动物飞并增加了对实验动物的周龄、数量等的具体要求；在“剂量及分组”中增加了各组设置的一些原则要求；一在“操作步骤”中z增加受试物的配制、实验动物的处理、交配、每窝仔鼠的标准化及观察代数的内容；一一在“观察指标”中，增加临床观察、饮水消耗量、器官称重和病理检查指标；一一将原“3.3.2计算”内容的改为“数据处理勺并增加“出生活仔率、性别比”，将娃振率的计数修改为z娃振率（%）分娩有活体幼仔的动物数怀孕动物数100增加“报
3、告内容”。自本标准实施之日起，GB15193. 15二1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人韩驰、李悠慧。本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。GB 15193.15-2003 繁殖试验1 范围本标准规定了繁殖试验的基本技术要求。本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过理中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素对受试动物生殖机能的影响，检验对象包括食品添加剂（含营养强化剂）、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽
4、药残留、食品工业用微生物等。2 原理凡受试物能引起生殖机能障碍，干扰配子的形成或使生殖细胞受损，其结果除可影响受精卵或孕卵的着床而导致不孕外，尚可影响胚胎的发生及胎仔的发育，如胚胎死亡导致自然流产、胎仔发育迟缓以及胎仔畸形。如果对母体造成不良影响会出现娃振、分娩和乳汁分泌的异常，亦可出现胎仔出生后发育异常。3 实验动物选用5周9周龄大鼠，试验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的土20%。购买后至少应适应3天。每组应有足够的雌鼠和雄鼠配对，产生约20只受孕雌鼠。为此，一般在试验开始时两种性别每组各需要30只Fol；在继续的试验中用来交配的动物每种性别每组需要25只（至少每窝雌雄各取1只，最多每
5、窝雌雄各取2只）。选用的亲代雌鼠应为非经产鼠、非孕鼠。4 剂量及分组至少设3个剂量的受试物组和一个对照组。健康的动物随机分为处理组和对照组，试验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的土20%。某些受试物的高剂量组设计应考虑其对营养素平衡的影响，对于非营养成分受试物剂量不应超过饲料的5%。其剂量设计可选最大耐受剂量或有胚胎毒性的剂量作为高剂量，低剂量组对亲代动物应不产生全身毒性或繁殖毒性（可按最大未观察到有害作用剂量的1/30或可能摄入量的100倍）。同时设对照组，对照组的饲养和处理方式与受试物组相同，根据情况，对照组可以是未处理对照、假处理对照，如果给予受试物时使用某种介质，则应设介质对照。如
6、果受试物通过加入饲料的方式给予并引起食物摄入量和利用率的降低，需要考虑使用配对饲养的对照组。5 操作步骤5. 1 受试物配制一般用蒸馆水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、竣甲基纤维素等配成乳化液或悬浮液。受试物应于；在胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液（或悬浊液、乳浊液等）保存具有稳定性。同时应考虑使用的介质可能对受试物的吸收、分布、代谢或滞留的影响；对化学性质的影响及由此而引起的毒性特征的影响；对饲料或饮水消耗量或动物营养状况的影响。5.2 实验动物的处理5. 2. 1 受试物的给予z经口给予，可加入饲料、饮水中或灌胃。如果受试物是灌胃给予，应每周称体重97 GB 15193.
7、15-2003 2次，根据体重计算给予受试物的体积。5.2.2 亲代和子代接受的受试物剂量饺动物体重给予，mg/kg体重或g/kg体重、饲料和饮水梅同。F1代的雌鼠和雄鼠在断乳后每日给予。两种性别的大鼠（亲代和F1代）在交配前应每日给予受试物至少连续10周，并继续给予受试物至试验结束。5.2.3 给予受试物方案：试验期间所有动物应采用相同的方式给予受试物；连续给予受试物，每周7天。5.3 交配每次交配时，每只雌鼠应与从同一剂量组随机选择的单个雄鼠同笼（11交配），直到检测到阴栓，或者经过3个发情期或两周。查到阴栓后应尽快将雌、雄鼠分开，如果经过3个发情期或两周还未进行交配也应将雌雄鼠分开，不再
8、继续同笼。配对同笼的雌雄鼠应作标记。所有雌鼠在交配期应每天检查精子或阴栓，直到证明已交配为止。查到阴栓的当天为受孕。夭。预计己怀孕的雌鼠应分开放入繁殖笼中，孕鼠临产时应提供筑巢的垫料。5.4 每窝仔鼠数量的标准化将每窝仔鼠于出生后第4天调整至相同数量（一般每窝8只10只，不应少于8只），尽量做到每窝内雌、雄数量相等，也可以窝内雌、雄数量不等，但各窝之间两性别的鼠数应分别相同。原窝中多余的鼠应随机抽出，而不应按体重选择。5.5 观察代鼓观察代数随受检目的而异，可作一代、二代、三代或多代观察。如果在两代繁殖试验中观察到受试物对子代有明显的生殖、形态或毒性作用，页。需要进行第3代繁殖试验，确定受试物
9、的蓄积作用。5.6 一代、二代和三代繁殖试验法5. 6. 1 一代繁殖试验法一代繁殖试验法示意图见图10 雄（20只或10只一Fo一雌（20只）断乳后给受试物饲料三个月2周交配Fo雌8只9只）分娩马雌（日只9只）20天产前检查畸胎3周断乳，每窝仔鼠一分为二（处死母鼠）F1，给受试物F1，不给受试物60天90天观察仔鼠的各项指标后处死图1一代繁殖试验法示意图5.6.2 两代繁殖试验法5.6.2.1 两代繁殖试验法示意图见图2.98 GB 15193.15-2003 雄（20只或10只）Fo 雌（20只断乳后给含受试物饲料三个月，交配F1，断乳后给基础饲料三个月进行观察，可选部分动物进行之F1，断
10、乳后10天，Fo进行第二次交配后产1吁鼠b娩仔马n分察然观白国只FU检胎马前畸产查马（10只Fib断乳后给含受试物饲料三个月，交配雄鼠（20只或10只雌鼠（20只马a按F1，处理F2，断乳后10天，F1b进行第二次交配F1b(l0只）F2b产后检查畸胎F1b( 10只自然分娩F2b断乳后给含受试物饲料二个月检查之固2两代繁殖试验法示意图5.6.2.2 亲代Fo断乳后，喂含受试物饲料三个月，雌雄即可交配，所产仔鼠为F,.F1，断乳后饲以不含受试物的基础饲料，观察三个月。5.6.2.3 Fi.断乳后10天将F。再次交配，所产仔鼠为F,b，将20只孕鼠（F，）中，5只产前2天3天剖腹检查胎鼠有元畸形
11、；另5只自然分娩观察产后仔鼠情况；作10只孕鼠自然分娩，所产仔鼠F,b继续繁殖。5.6.2.4 F断乳后喂含受试物饲料三个月，进行交配，所产仔鼠F，.在断乳后喂不含受试物的饲料，观察三个月。5.6.2.5 仔鼠F，断乳后10天与F再次交配，产F2b前将F孕鼠分两群，每群10只，同5.6.2.3.5. 6. 3 三代繁殖试验法三代繁殖试验法示意图见图3.99 GB 15193.15-2003 雄鼠（20具或10只）一Fo雌鼠（20只）断乳后给青受试物饲料三个月，交配F1，断乳后给基础饲料三个月，并观察之F1，断乳后10天，Fo进行第二次交配F1b断乳后喂给含受试物饲料三个月后交配雄鼠| 雌鼠(2
12、0只或10只(20只雄鼠(20只或10只）F2，断乳后，喂基础饲料兰个月，并观察之F2，断乳后10天，F1b进行第二次交配F2b断乳后喂含受试物饲料三个月后交配雌鼠(20只）F3，断乳后，暇基础饲料三个月并观察之F3a断乳后10天，F2b进行第二次交配F3b断乳后喂含受试物饲料三个月，并观察之图3三代繁殖试验法示意图5. 7 亲代、一代、二代、三代繁殖试验5. 7. 1 亲代、一代、二代、三代繁殖试验可参考5.6. 2. 2,5. 6. 2. 3进行。5. 7.2 根据情况可繁殖两窝以上。6 观察指标6. 1 一般情况观察：做全面的临床检查，记录一般健康状况、受试物的所有的毒性和功效作用所产生
13、的症状、相关的行为改变、分娩困难或延迟的迹象、所有的毒性指征及死亡率，通过每日检查（F，、F1代雌鼠）阴栓估计性周期长短和正常状态。6.2 称体重，亲代动物CP、F1代，和F，代，根据繁殖的代数确定）在给予受试物的第一天称重，以后每周称重，母鼠应在受孕的0、7、14和21天称重，在哺乳期应同时称仔鼠的窝重。6.3 在交配前及受孕期，至少每周称一次食物消耗量，如受试物掺在饮水中喂养，则至少每周量一次饮水消耗量。6.4 试验结束时，所有亲代CF，）和F1代CF，代、F，代，根据繁殖的代数确定）雄鼠均应对附辜的精子进行检查，对精子的活动性、形状及数量进行评价。精子的活动性可在镜下观察；精子形状可只检
14、查对照组和高剂量组的亲代和子代雄鼠，每个动物至少检查200个精子。6.5 子代（offspring）观察指标：在分娩后（哺乳0天）应尽快检查每窝仔鼠的数量、性别、死产数、活产数及肉眼可见的异常，在出生当天死亡的，应尽可能检查其缺陷和死亡原因。记录活产数量、性别，并在出生时（或尽快）对单个活产仔鼠称重，以后至少在哺乳期的第4、7、14和21天，阴道开放或龟头包皮分开，以及试验结束时称重。用来进行交配的F1代断乳鼠应记录其阴道开放或包皮分开的年龄，观察性100 GB 15193. 15-2003 别比例及性成熟情况。6.6 器官称重：试验结束时所有P、F1代亲本动物称重：子宫（包括输卵管和子宫颈）
15、、卵巢；辜丸、附辜（两侧总重量）；脑、肝、肾、脾和己知的靶组织。6. 7 病理检查试验结束时和试验期间死亡的所有亲代动物均应作大体解剖并在显微镜下检查，观察各种形态结构异常及病理改变，特别注意生殖器官。如果每窝仔鼠的数量足够，F：代、F，代和F，代每窝每种性别至少取3只进行同样检查。应检查的器官及组织有守子宫、卵巢、辜丸、附塞、靶器官（如果己知其靶器官），大体观察异常的组织。7 数据处理8 报告内容受孕率（%）怀孕动物数交配雌性动物数100.( 1 ) 娃振率（%）分娩有活体幼仔的动物数怀孕动物数100，（2 ) 出生活仔率（%）出生时活的仔鼠数出生时仔鼠总数100（3 ) 出生存活率（%）产后4天仔鼠存活数出生时活仔数100. . ( 4 ) 哺乳存活率（% ) 21天断乳时仔鼠存活数出生4天后仔鼠存活数100（5 ) 性别比仔鼠成熟时雄鼠数雌鼠数. ( 6 ) 8. 1 试验方案、受i式物剂量、所有数值的绝对值、每个个体的完整数据、各需的数据汇总表和分析表。8.2 一般健康状况、体重、进食量、死亡情况、受孕率、娃振率、出生活仔率、性别比、出生存活率、哺乳存活率（4天、21天存活）、产仔总数、宫重及平均仔重。8. 3 对所有主要参数进行讨论。分析结果时可以与历史对照比较，但应提供历史对照的试验资料，如日期、动物种系、受试物介质和给予受试物途径。101
