1、ICS 67.050 B 47 GB 中华人民共和国国家标准GB/T 23405 2009 蜂产品中环己烧氨基磺酸铀的测定液相色谱-质谱/质谱法2009-03-28发布Determination of sodium cyclamate in bee products-LC-MS/MS method 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2009-07-01实施发布t f3 IJ 1=1 本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。GB/T 23405- 2009 本标准
2、主要起草人:林宏、赵增运、张娟、陈惠兰、沈崇佳、杨安南、李公海、蒋原、陶宏锦。I a GB/ T 23405-2009 1 范围蜂产品中环己:院氨基磺酸纳的测定液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了蜂产品中环己烧氨基磺酸铀的液相色谱，质谱/质谱的测定方法。本标准适用于蜂蜜和蜂王浆中环己烧氨基磺酸铀的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验
3、室用水规格和试验方法(GB/T6682- 2008 .ISO 3696:1987 , MOD) 3 方法提要蜂蜜样品用盐酸溶解，蜂王浆样品用乙腊提取浓缩后用盐酸溶解，用弱阴离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4. 1 乙腊。4.2 甲薛，HPLC级。4. 3 氨水:含量25%-28%。4.4 盐酸:含量36%-38%。4.5 5%氨水，甲醇溶液(5+屿，体积比):量取25mL氨水(4.3)加入475mL甲醇(4.2)中，摇匀。4.6 O. 1 mol/L盐酸溶液:用量筒量取8.3mL盐酸(4.4
4、)于1L容量瓶中，用水稀释至1L。4. 7 环己烧氨基磺酸销(sodium cyclamate. CAS号139-05-9)标准物质:纯度大于或等于98%。4.8 环己炕氨基磺酸制标准储备溶液:1. 0 mg/mL.准确称取适量的环己;皖氨基磺酸铀标准品(4. 7)，用甲晖(4.2)配成1.0 mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4oC冰箱中，1年有效。4. 9 环己烧氨基磺酸铀标准工作溶液:用甲醇-水(3+7.体积比)将环己烧氨基磺酸铀标准储备溶液(4.8)稀释配成浓度为200ng/mL, 100 ng/ mL, 50 ng/mL.20 ng/mL , IO ng/mL, 5 ng/mL的标
5、准工作溶液，用于绘制标准工作曲线。4. 10 弱阴离子交换柱:60mg, 3 mL小柱，或同等者。5 仪器和设备5. 1 液相色谱由质谱/质谱仪(串联四极杆)，配有电喷雾离子源。5.2 分析天平:感量分别为0.01g和0.1mgo 5.3 氮吹仪。5.4 涡旋?昆匀器。5. 5 高速离心机。1 G/ T 23405-2009 5.6 有机相、水相过滤膜，0.45mo5. 7 移液器:5 mL,200 ，uL。5.8 离心管:50mL.具塞。5.9 固相萃取装置。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备将蜂蜜样品或自然解冻至室温的蜂王浆.p，n .分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中
6、，密封，并做上标记。在制样的操作过程中，应防6.2 试样的保存7 测定步骤7.1 提取和净化7. 1. 1 提取jf(4.1)于涡旋混匀器柱，用3mL 7(和3用氮气吹干，用1.0质谱仪测定。b) 流动相:0.02mol/ 脱程序参见附录A;c) 柱温:室温;d) 进样量:25L。7.2.2 串联质谱条件a) 离子源:电喷雾离子化电离源(ES1)，负离子监测;b) 扫描方式:选择离子监测(SRM); c) 雾化气、鞠气为高纯氯气，碰撞气为高纯氧气;d) 喷雾电压、碰撞电压等电压值均优化至最佳灵敏度;e) 选择离子对，母离子178，碎片离子178/80.2、178/95，定量离子178/80.2
7、07.2.3 液相色语-质谱/质谱测定7.2.3.1 定性测定m左右的流速过脱液，于45.C下液相色谱-质谱/进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图2 G/ T 23405-2009 中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶被谱图相比，最大允许相对偏差不超过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差土30:S;10 士50相对离子丰度/%允许的相对偏差/%50 土2020-50 .L 25 10-20 7.2. 3.2 定量分析标准工作溶液(4.9)在液相色谱-串联质常设主条件
8、下分别进样，以标准面积为纵坐标，工作溶液被式中:x-一一试A-山样c一一，标v-一样、A.一一标 及质谱/质谱图参见图B.1、7.3 空白试验除不称取样品外，8 结果计算据数验。试问的UU固HM范刀率夜收O回为及，限度/低浓是加测添加水平为0.010mg/同时，回收率范围为73.1%85.5% ; 添加水平为0.025mg/kg时，回收率范围为72.0%-92.4%;添加水平为0.050mg/kg时，国收率范围为80.0%-88.1%; 添加水平为0.100mg/kg时，国收率范围为79.7%87. 2%。3 GB/T 23405-2009 梯度时间/min。4.0 6.0 6.1 8.0 4
9、 附录A资料性附录)梯度洗脱程序表表1梯度洗脱程序表流动相A90 10 10 90 90 一一流动相比例/%流动相B10 90 90 10 10 GB/ T 23405- 2009 附录(资料性附录标准晶色谱图及二级质谱碎片图B lL1. 99E3 TJC 保留时间4.52100 !O 80 10 60 -Z卖一导50 10 30 20 保留时间:4. 52 NL:1.98E3 m I 19. 73-80. 73 10 。70 100 90 80 60 50 M州霄乍HF再40 20 30 10 5 7 环己烧氨基磺酸锦标准溶液选择反应监测(SRM)色谙图6 4 3 2 图B.l。GB/ T 23405-2009 6 100 相对卒度95 90 85 80 75 70 65 60 55 ; 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 。80.2 95.0 80.226 80.228 80.230 80. 232 80. 234 95.020 95. 022 95. 024 95.026 95.028 mlz mh 圄B.2环己皖氨基晴酸纳二级质语碎片图
