1、Ics 67040X 04 囝酉中华人民共和国国家标准GBT 9695232008IS0 3496：1 994代替GBT 9695231990肉与肉制品 羟脯氨酸含量测定Meat and meat products-Determination of hydroxyproline content20080828发布(IS0 3496：1994，IDT)2009030 1实施宰瞀鹃鬻瓣警麟瞥星发布中国国家标准化管理委员会议19刖 罱GBT 969523-2008LSO 3496：1994GBT 9695由以下部分组成：GBT 96951肉与肉制品游离脂肪含量测定；GBT 96952肉与肉制品脂肪酸
2、测定；GBT 96953肉与肉制品铁含量测定；GBT 96954肉与肉制品总磷含量测定；GBT 96955肉与肉制品pH测定；GBT 96956肉制品 胭脂红着色剂测定；GBT 96957肉与肉制品总脂肪含量测定；GBT 96958肉与肉制品 氯化物含量测定；GBT 96959肉与肉制品聚磷酸盐测定；GBT 969510肉与肉制品六六六、滴滴涕残留量测定；GBT 969511肉与肉制品氮含量测定；GBT 969513肉与肉制品钙含量测定；GBT 969514肉制品淀粉含量测定；一GBT 969515肉与肉制品 水分含量测定；GBT 969517肉与肉制品 葡萄糖酸一8一内酯含量的测定；GBT
3、969518肉与肉制品 灰分测定；GBT 969519肉与肉制品取样方法GBT 969520肉与肉制品锌的测定；GBT 969521肉与肉制品镁含量测定；GBT 969522肉与肉制品 铜含量测定；GBT 969523肉与肉制品羟脯氨酸含量测定；GBT 969524肉与肉制品胆固醇含量测定；GBT 969525肉与肉制品 维生素PP含量测定；GBT 969526肉与肉制品维生素A含量测定；GBT 969527肉与肉制品维生素B。含量测定；GBT 969528肉与肉制品 维生素Bz含量测定；GBT 969529肉制品维生素C含量测定；GBT 969530肉与肉制品 维生素E含量测定；GBT 96
4、9531肉制品总糖含量测定。本部分为GBT 9695的第z3部分。本部分等同采用国际标准ISO 3496：1994肉与肉制品羟脯氨酸含量测定(英文版)。为便于使用，本部分作了下列编辑性修改：删除IS0 3496的前言；用“本部分”代替“本国际标准”；用小数点“”代替ISO 3496中作为小数点的“，”；为第4章“试剂”中标准储备液和标准工作液增加了编号；用GBT 969519代替ISO 31001；GBT 969523-2008IS0 3496：1994为计算公式增加了编号。本部分代替GBT 9695231990肉与肉制品L(一)一羟脯氨酸含量测定。本部分与GBT 969523一1990相比主
5、要修改如下：按照GBT 112000标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则和GBT 2000142001标准编写规则第4部分：化学分析方法进行了结构调整和文字修改；用硫酸溶液代替氯化亚锡盐酸溶液水解样品；修改了氯胺T溶液和显色剂的配制；改动了试样前处理和测定操作；用第10章“精密度”及其内容代替第9章“允许差”及其内容；增加了“试验报告”一章。本部分由全国肉禽蛋制品标准化技术委员会提出并归口。本部分起草单位：中国商业联合会商业标准中心、国家加工食品质量监督检验中心(广州)、广州市产品质量监督检验所。本部分主要起草人：郭新东、邓穗兴、罗海英、冼燕萍、杜志峰、吴玉銮、靳晓蕾。本部分所代替标
6、准的历次版本发布情况为：GBT 969523 1990。1范围GBT 969523-2008IS0 3496：1994肉与肉制品羟脯氨酸含量测定GBT 9695的本部分规定了肉与肉制品中羟脯氨酸的测定方法。本部分适用于肉与肉制品中含量低于05(质量分数)的羟脯氨酸的测定。2术语和定义下列术语和定义适用于GBT 9695的本部分。21肉与肉制品羟脯氨酸含量hydroxyproline content of meat and meat products在本部分规定的条件下测定的羟脯氨酸的含量。羟脯氨酸含量用质量分数表示。3原理用硫酸于105水解试样，过滤、稀释水解产物。羟脯氨酸经氯胺T氧化后，与对
7、二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物，在波长558 nm处进行比色测定。4试剂如无特别说明，所用试剂均为分析纯。水为蒸馏水或去离子水，或相同纯度的水。41硫酸溶液Ec(n2SO。)3 molL量取750 mL水于2 L的容量瓶中，在搅拌下缓慢加入320 mL浓硫酸(m一184 gmL)。冷却至室温后用水定容。42缓冲溶液(pH=68)包括下列组分：a) 260 g一水柠檬酸(c。H80，H：O)；b)140 g氢氧化钠；c)780 g无水乙酸钠Na(CH。CO。)。用500 mL水溶解上述试剂并转入1 L的容量瓶中，加入250 mL正丙醇，用水定容。该溶液于4暗处可稳定保存几周。43氯胺T溶液称取
8、141 g三水N-氯一对甲苯磺酰胺钠盐(氯胺T)，用100 mL缓冲溶液(42)溶解。临用前配制。44显色剂称取100 g对二甲氨基苯甲醛，用35 mL高氯酸溶液60(质量分数)溶解，缓慢加入65 mL异丙醇。临用前配制。若对二甲氨基苯甲醛需纯化(见84注)，可按如下操作：用70(体积分数)热乙醇配制对二甲氨基苯甲醛饱和溶液。依次在室温和冰箱中冷却，12 h后，用布氏漏斗过滤。用少量70(体积分数)乙醇洗涤布氏漏斗中的固体。将固体转移至三角瓶中，用70(体积分数)热乙醇重新溶解固体，加入冷水充分搅拌，至有大量乳白色晶体析出，于冰箱中过夜。用布氏漏斗过滤固体，用50(体积分数)乙醇洗涤后，在有五
9、氧化二磷干燥剂的条件下进行真空干燥。GBT 969523-2008IS0 3496：199445羟脯氨酸标准溶液451标准储备液称取50mg 4-羟基一”吡咯甲酸(羟脯氨酸)于100mL容量瓶中，用水溶解，加一滴硫酸溶液(41)，用水定容。该溶液于4下可稳定存放1个月。452标准工作液移取500 mL上述标准储备液至500 mL容量瓶中，用水定容。分别吸取该溶液looo mL、zo00 mL、3000 mL、4000 mL于100 mL容量瓶中，用水定容，所得标准工作液浓度依次为05 pgmL、10 pgmL、15 tgmL、20 pgmL。临用前配制。5仪器和设备实验室常规仪器及下列仪器。5
10、1 电动绞肉机：带水平刀片，能高速旋转。52圆底或平底烧瓶：容量约为200 mL，宽颈。53干燥箱：可控温于105士1。54圆形滤纸：直径为125 cm。55 pH计。56铝箔或不透明塑料薄膜。57水浴锅：可控温于60士05。58分光光度计：可用波长558 nm士2 nm；或使用光电比色计，其中干涉滤波器最大吸收波长为558 nm士2 nm。59比色皿：光程为10 mm。510分析天平：可准确称重至0001 g。511容量瓶：250mL。512表面皿：直径为5 cm6 cm。6取样实验室所收到的样品应具有代表性且在运输和储藏过程中没受损或发生变化。取样方法参见GBT 969519。取有代表性的
11、样品200 g。7试样制备71肉及生肉制品用刀将肉在冷冻时(o以下)切成小块(约05 cm3，边长约为8 ram)。将切好的试样装入密封样品盒中，或用耐热塑料袋真空包装，70以上保温30 rain后，冷却，按72继续操作。在待测试样保存、制备、称重过程中，试样需混合均匀，特别是脂肪和液体要保持均匀。注：加热软化结缔组织便于切割均匀，但可能导致胶质液体流出。为使测试样品均匀，应注意脂肪的均匀分布。72熟肉制品用绞肉机(51)将试样均质。将试样装入密封的容器里，防止变质和成分变化。试样应在均质化后24 h内尽快分析。2GBT 969523-2008I$0 3496：19948分析步骤81试样称取4
12、 g试样(精确至0001 g)于烧瓶(52)中，避免试样粘在烧瓶壁上。82水解821量取30 mL1 mL硫酸溶液(41)，加入烧瓶中，用表面皿(512)盖住，于105干燥箱内(53)恒温16 h。822用圆形滤纸趁热将水解产物过滤至250mL容量瓶(511)中。用lomL硫酸溶液(41)分三次洗涤烧瓶和滤纸，合并至上述容量瓶中。用水定容，摇匀。83测定831用移液管移取一定体积(y)的水解产物(822)至250mL容量瓶(511)中，定容后羟脯氨酸的浓度在05#gmL2 pgmL之间。注：移取体积取决于样品中结缔组织的含量。通常情况下，移取的水解产物体积(V)在5 mL-25 mL之间。83
13、2移取400mL上述溶液(831)于比色管中，加入2oo mL氯胺T试剂(43)，混合后于室温下放置20 min士1 min。833加入2oo mL显色剂(44)于比色管中，充分混合，用铝箔或塑料薄膜(56)将比色管封口。834将比色管迅速放人60水浴(57)中，加热20 rain。835取出比色管，用流动水冷却比色管至少3min，在室温下放置30min。836用水作参比，于558 nm土2 nm处用分光光度计或光电比色计(58)测定吸收值。837扣除空白溶液的吸收(84)，从85所得标准曲线查得水解产物中羟脯氨酸的含量。84空白测试用水代替稀释溶液，重复832至837的操作。注：若空白溶液的
14、吸收值超过o040，则需重新配制显色剂(44)，如有必要。需纯化对二甲氨基苯甲醛液(见4 4)。85标准曲线851用400mL羟脯氨酸标准工作液(45)依次代替稀释后的水解产物，进行832至837的操作。852以扣除了空白的标准工作液的吸光度为纵坐标，以相应的浓度为横坐标，绘制标准曲线。再次分析应重新绘制标准曲线。9计算试样中羟脯氨酸的含量按式(1)计算： x一黯(1)式中：x试样中羟脯氨酸的含量，；c由标准曲线得到的试样溶液中羟脯氨酸的浓度，单位为微克每毫升(pgmL)；m试样质量，单位为克(g)；v从250 mL容量瓶中吸取滤液的体积(见831)，单位为毫升(mL)；计算结果保留至小数点后
15、两位。10精密度方法的精密度是根据ISO 5725组织的联合实验室测试获得的。对于重复性限r和再现性限R，置信度均为95。101重复性同一分析者在同一实验室、采用相同的方法和相同的仪器、在短时间间隔内对同一样品独立测定两3GBT 969523-2008Ls0 3496：1994次。两次测试结果的绝对差值不超出由式(2)求得的重复性限rro013 1+0032 2X式中：r重复性限，；X两次测试结果的平均值，。如果两次测试结果的绝对差值超过重复性限值，舍弃这两个结果，重新测定两次。102再现性不同的分析者采用相同的方法、在不同的实验室用不同的仪器、对同一样品独立测定两次。两次测试结果的绝对差值不
16、超出由式(3)求得的再现性限R：R一0019 5+0052 9X (3)式中：R再现性限，；x两次测试结果的平均值，。11试验报告试验报告应说明：取样方法；所采用的方法；测试结果；如果检验了重复性，列出最终结果。试验报告也应说明本部分未规定或未列为可选的所有操作，以及可能影响测试结果的其他因素。试验报告还应包括所有与识别样品有关的必需信息。41E2E3参考文献GBT 969523-2008Is0 3496：1994GBT 969519肉与肉制品取样方法GBT 637912004测量方法与结果的准确度(正确度和精密度) 第1部分：总则与定义(IS0 57251：1994，Accuracy(tru
17、eness and precision)of measurement methods and resultsPart 1 1 General principles and definitions，IDT)GBT 637912004测量方法与结果的准确度(JE确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(ISO 57252：1994，Accuracy(trueness and precision)of measurement methods and results-Part 2：Basic method for the determination of repeatability and reproducibilitv of a standard measurement method，IDT)5
