1、ICS 67.040 C 53 B 中华人民共和国国家标准GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸醋类农药残留量的快速检测2003-08-11发布Rapid determination for organophosphate and carbamate pesticide residues in vegetables 2004-01-01实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员百GB/T 5009.199-2003 前言有机磷和氨基甲酸酶类农药在蔬菜中的残留问题和引发中毒的情况较为突出。本标准提供的两种检验方法，能快速检测有机磷和氨基甲酸醋类农药在蔬菜中的残留，以
2、便及时发现问题，采取措施，控制高残留农药蔬菜的上市，保障人们食菜安全。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位g卫生部食品卫生监督检验所、北京市产品质量监督检验所、广东省疾病预防控制中心。本标准主要起草人z玉林、王品、张莹、邓峰、杨大进。570 GB/T 5009.199-2003 1 范围蔬菜中有机磷和氨基甲酸醋类农药残留量的快速检测本标准规定了由酶抑制法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酣类农药残留量的快速检验方法。本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸醋类农药残留量的快速筛选测定。速测卡法(纸片法)2 原理胆碱醋酶可催化能酣乙酸醋(红色)水解为乙酸与被酣(蓝色).有机磷或氨基甲酸酶类农
3、药对胆碱酶酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酶类农药的存在。3试lfiJ3.1 固化有胆碱酶酶和能盼乙酸醋试剂的纸片(速测卡)。3.2 pH7.5缓冲溶液分别取15.0g磷酸氢二铺Na，HPO. 12H，OJ与1.59 g元水磷酸二氢饵KH，PO.J.用500mL蒸馆水溶解。4 仪器4.1 常量天平。4.2 有条件时配备37C土2C恒温装置。5 分析步骤5.1 整体测定法5. 1. 1 选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取5g放人带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上。5. 1. 2
4、 取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37(;恒温装置中放置10min.预反应后的药片表面必须保持湿润。5.1.3 将速测卡对折，用于捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。5. 1. 4 每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。5.2 表面测定法(粗筛法)5.2.1 擦去蔬菜表面泥土，滴2滴3滴缓冲溶液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。5.2.2 取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。5.2.3 放置10min以上进行预反应，有条件时在37C恒温装置中放置10min.预反应后的药片表面必须保持湿润。5.2.4 将
5、速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应.5.2.5 每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。571 GB/T 5009. 199-2003 6 结果判定结果以酶被有机磷或氨基甲酸酷类农药抑制为阳性)、未抑制为阴性)表示。与空白对照卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同，为阴性结果。对阳性结果的样品，可用其他分析方法进一步确定具体农药品种和含量。7 附则7.1 速测卡技术指标7.1.1 灵敏度指标z速测卡对部分农药的检出限见表1，表1部分农药的撞出限农药名称检出限/(mg/kg)农药名称撞出限/(mg/kg)
6、农药名称撞出限/(mg/kg)甲胶磷1. 7 乙酷甲胶磷3.5 久效磷2.5 对硫磷1. 7 敌敌畏0.3 甲荼威2.5 水肢硫磷3.1 敌百虫0.3 好年冬1. 0 马拉硫磷2.0 乐果1. 3 吱喃丹0.5 氧化乐果2.3 一一一- 7. 1. 2 符合率s在检出的30份以上阳性样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应在80%以上.B 说明8.1 葱、蒜、萝卡、韭菜、芹菜、香菜、菱白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株体)蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株(体蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。8.2 当
7、温度条件低于37:;.酶反应的速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用手指(体温)捏3min时可以变蓝，即可往下操作。注意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因g一是药片表面缓冲溶液加的少、预反应后的药片表面不够湿润，二是温度太低。8.3 红色药片与自色药片叠合反应的时间以3mn为准，3min后的蓝色会逐渐加深.24h后颜色会逐渐退去.酶抑制率法(分光光度法9原理在一定条件下，有机磷和氨基甲酸醋类农药对胆碱醋酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物(乙酿胆碱水解，其水解
8、产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酣类农药的存在。10试剂10.1 pH8.0缓冲溶液z分别取11.9 g无水磷酸氢二饵与3.2g磷酸二氢僻，用1000mL蒸馆水溶解。572 GB/T 5009. 199-2003 10.2 显色剂z分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6mg碳酸氢锅，用20mL缓冲溶液溶解.4C冰箱中保存。10.3 底物2取25.0mg硫代乙酷胆碱，加3.0mL蒸馆水溶解，摇匀后置4C冰箱中保存备用。保存期不超过两周。10.4 乙酷胆碱醋酶g
9、根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3min的吸光度变化M，值应控制在0.3以上。摇匀后置4C冰箱中保存备用，保存期不超过四天.10.5 可选用由以上试剂制备的试剂盒。乙lIIt胆碱酶酶的M。值应控制在0.3以上。11 仪器11. 1 分光光度计或相应测定仪。11. 2 常量天平。11. 3 恒温水浴或恒温箱.12 分析步骤12.1 样品处理g选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g.放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液，振荡1min-2 min，倒出提取液，静置3min-5 min，待用。12.2 对照溶液测试z先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入0.1
10、mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37C放置15min以上(每批样品的控制时间应一致入加入0.1mL底物播匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值Mo。12.3 样品溶液测试=先于试管中加人2.5mL样品提取液，其他操作与对照榕液测试相同，记录反应3 min的吸光度变化值&也。13 结果的表述计算13.1 结果计算见式(1)。抑制率(%)= (Mo 午4.，)/Mo X 100 . ( 1 ) 式中2M。对照溶液反应3min吸光度的变化值gM , 样品溶液反应3min吸光度的变化值.13.2 结果判定结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。当蔬菜样品提取液
11、对酶的抑制率注50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酣类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验2次以上。对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。14 附则14.1 酶抑制率法技术指标14. 1. 1 灵敏度指标s酶抑制率法对部分农药的检出限见表2。573 GB/T 5009. 199-2003 褒2离主事领事法对鹅分农董事的输出摞农药名称撞出限!(mg!kg)农药名称撞出限!(mg/kg)敌敌占是0.1 氧化乐果。.8声节硫磷1. 0 !jI基异柳磷5.0 带硫磷0.3 灾多威0.1 一-町【耶股幡2.0 丁硫克百威0.05 马拉硫碗4.0 激百虫0.2
12、 乐民3.0 峡喃丹。.0514.1.2 符合率s在检出的抑制率;50%的30份以上样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应在80%以上。15说明15.1 葱、蒜、梦卡、韭菜、芹菜、香菜、变白、蘑菇及番茄汁液啦，含有对戴有影嚼的援物次生物质，容易产生假阪傲。处您这类样品时，可采取整糠体蔬菜浸援.对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株体蔬菜浸挠的方法，减少色素的干扰。15.2 li1温度条件低于37(;，酶反应的速度随之放慢，加入酶液和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以胆碱醋酶空白对照测试3min的吸光度变化M，值在0.3以上，即可往下操作。注意样品放党时间应与空白对照溶液放置时间一致才有可比性。胆碱醋酶空白对照溶液3min的吸光度变化Mo值0.3的原因2一是酶的活性不够，二是温度太低。574
