1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准2003-08-11发布GB/T 5009.124-2003 代替GB/T14965-1994 食品中氨基酸的测定Determination of amino acids in foods 2004-01-01实施中华人民共和剧卫生部发布中国国家标准化智昭委员会GB/T 5009.124-2003 116 前苦苦F司本标准代替GB/T14965-1994(食物中氨基酸的测定方法儿本标准与GB/T14965-1994相比主要修改如下.一一一修改了标准的中文名称，标准中文名称改为食品中氨基酸的测定沁一一按GB/T20001. 4-2001(标准
2、编写规则第4部分z化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位z中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所。本标准主要起草人贾健斌、赵熙和。原标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。GBjT 5009.124-2003 食品中氨基酸的测黯1 范围本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定食物中氨基酸的方法。本标准适用于食品中的天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缴氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、爵氨酸、苯丙氨酸、级氨酸、赖氨酸和精氨酸等十六种氨基酸的测定.其最低检出贯主为10pmol. 本标准不适用子3蓝白质含量低的水果、蔬菜、饮料
3、和淀粉类食品中氨基酸草草定e2原理食品中的蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与甜三翻溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量.3试剂3.1 浓盐酸s优级绪。3.2 6 mol/L盐酸:浓盐酸与水1+1混合。3.3 苯盼g须重蒸惰。3.4 (0.002 5 mol/L)混合氨基酸标准液(仪器制造公司出售) 3.5 缓冲液3.5.1 pH2.2约拧鲁摩梭锁缓玲液z称取19.6g拧穰酸锁(Na，C，H，O，.2日，0)和16.5mL浓盐酸如水稀释到1000四L，郑浓盐酸或5g/L岱氮氧化镇滚滚满节pH在2.2.3.5.2 pH3.3的拧橄被锁缓冲液z称取1
4、9啕6g拧橡峻锁和12mL浓盐酸加水稀辉到1000mL.用浓盐酸或500g/L的氮氧化锅溶液调节pH1 3. 3。3.5.3 pH4.0的拧橡酸销缓冲液2称取19.6g拧橡酸销和9mL浓盐酸加水稀释到1000mL.用浓盐酸或500g/L的氧氧化铺溶液调节pH至4.O. 3.5.4 pH3.3的狞糠酸铺缓冲液2称取19.6g拧被重重锁和46.8g氯化锅优级纯)加水稀释费j1000 mL，用浓主主理费或500g/L的氢氧化锁溶液演节pH至在.4.3.6 苟三藏溶液3.6.1 pH5.2的乙酸镀溶液z称取氮氧化键(LOHH，0)168踵，加入冰乙酸优级纯)279mL.加水稀释到1000mL.用浓盐酸
5、或500g/L的氮氧化销溶液调节pH1 5. 2. 3.6.2 苟三嗣溶液z取150mL二甲基5lE枫(C，H，OS)和乙酸镶溶液50mL加入4日水合苟三翻(C, H.O, H，O)和0.12g还原苟三周(C日100，2日，0)搅拌烹完全溶解.3.7 离纯氮气2纯度99.99%.3.8 冷冻J!l，市镖食盐与冰按1十3混合。4 仪器和设备4.1 真空泵。4.2 恒温干燥箱。4.3 水解管E耐E茧螺簇玻璃管或硬质玻璃镑，体积20四L-30mL。用去离子水冲洗干净并烘子。4.4 真空手续器滚滚J演节).117 GB/T 5009.124-2003 4.5 氨基酸自动分析仪。5 试样处理试祥采集后用
6、匀浆机打成匀浆(或者将试样尽量粉碎)于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。6 分析步.6.1 称样准确称取一定量均匀性好的试样如奶粉等，精确到0.0001g，(使试样蛋白质含量在10mg 20 mg范围内)，均匀性差的试样如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定前再稀释。将称好的试样放于水解管中。6.2 水解在水解管内加6mol/L盐酸10mL15 mL(视试样蛋白质含量而定)，含水量高的试样(如牛奶)可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馈的苯盼3滴4漓，再将水解管放人冷冻剂中，冷冻3min-5 min , 再接到真空泵的抽气管上，抽真空接近oPa)，然后充入高纯氮气;再抽真空充氮气，重复
7、三次后，在充氯气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110C士1C的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50mL容量瓶内用去离子水定容。吸取滤液1mL于5mL容量瓶内，用真空干燥器在40C 500C干燥，残留物用1 mL2 mL水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mL pH2. 2的缓冲液溶解，供仪器测定用。7 测定准确吸取0.200mL混合氨基酸标准，用pH2.2的缓冲液稀释到5mL，此标准稀释液浓度为5.00 nmol/50L，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标法测定试样测定液的氨基酸
8、含量.8 结果计算按下式计算:式中2cXXFXVXM x = . 50m = .0 X 100 m X 10 X一一试样氨基酸的含量，单位为克每百克(g/100g) , C一一试样测定液中氨基酸含量，单位为纳摩尔每50微升(nmol/50L)，F 试样稀释倍数;V 水解后试样定容体积，单位为毫升(mL)，M 氨基酸分子量;m 试样质量，单位为克(g)，击折算成每毫升试样测定的氨基酸含量，单位为微摩尔每升忡。川10 将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数。十六种氨基酸分子量z天冬氨酸，133.1，苏氨酸，119.1，丝氨酸，105.1，谷氨酸;147.1;脯氨酸-115. 1，甘氨酸，75
9、.1，丙氨酸，89.1，绩氨酸;117.2，蛋氨酸，149.2，异亮氨酸，131.2，亮氨酸，131.2，醋氨酸;181.2，苯丙氨酸，165.2，组氨酸，155.2，赖氨酸;146.2，精氨酸;174.2。118 GBjT 5009.124-2003 计算结果表示为自试样氨基酸含量在1.00 g/lOO g以下，保自由两位有效数字g含量在1.00 g/lOO g 以上，保留三位有效数字。9 精密度在重复性条牛下获得的两次独立草草定结果的绝对差值不得超过算术平均值的12%。10 标准画满标准图谱见图1，出峰顺序1 天各氨酸2 苏氨酸3 然氨酸4 辛辛辄酸5 脯氨酸6 甘氨酸7 F哥氨盟章I 8 缴费在毅16.65 保留传!哥min8.72 13.10 21. 24 22.06 34.62 40.75 思556.60 7.09 12.24 19.63 30.41 32.52 出梅颜序5.55 |jl酣6.60 异亮氨重量7.09 亮氨酸8.72 酶氨酸9.63 苯丙氨酸12.24 组氨酸13.10 被氨酸1乱65幸曹氨酸画1保留时i同/目in19.63 21. 24 22.06 24.52 25.76 30.41 32.57 4在75119
