1、7,江苏省市场监督管理局发 布中 国 标 准 出 版 社出 版水稻镉稳定低积累品种筛选和鉴定技术规范Technical specification for screening and identification of rice cultivars with stable low cadmium accumulation in grainCCS B 05DB32/T 54272026ICS 65.020.202026-07-20 发布2026-08-20 实施DB32/T 54272026前言本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起
2、草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省农业农村厅提出并组织实施。本文件由江苏省农作物标准化技术委员会归口。本文件起草单位：江苏省耕地质量与农业环境保护站、南京农业大学、中国科学院南京土壤研究所、江苏省生态环境监测监控有限公司、久田环境科技南京有限公司。本文件主要起草人：汪鹏、唐仲、姜海波、董歌、邱丹、骆永明、赵方杰、李真、栗鹏辉、范玉健、张明超、彭毅。DB32/T 54272026水稻镉稳定低积累品种筛选和鉴定技术规范1范围本文件规定了水稻镉稳定低积累品种筛选与鉴定的工作流程、试验设置、试验品种确定、试验田选择与准备、田间试验设计与管理、糙
3、米镉含量和品种基因型检测、水稻镉稳定低积累品种鉴定等技术要求。本文件适用于水稻镉稳定低积累品种的筛选与鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2762 食品安全国家标准 食品中污染物限量GB 5009.15 食品安全国家标准 食品中镉的测定GB 5084 农田灌溉水质标准GB 15618 土壤环境质量 农用地土壤污染风险管控标准（试行）GB/T 37874 核酸提取纯化方法评价通则GB/T 39917 主要农作物品种真实性和
4、纯度 SSR 分子标记检测 稻HJ 1315 土壤和沉积物 19 种金属元素总量的测定 电感耦合等离子体质谱法NY/T 1300 农作物品种试验与信息化技术规程 水稻3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1试验品种testing cultivar经人工选育或发现并经过改良育成，与现有品种有明显区别，形态特征和生物学特性一致，遗传性状稳定，具备利用价值和适当名称的水稻群体。注：本文件中试验品种包括常规稻和杂交稻。来源：NY/T 13002022，3.1，有修改3.2对照品种check cultivar符合试验品种定义，在生产或性状表现上具有代表性，用作试验品种性状表现对比基准的水稻品种。3
5、3品种试验cultivar trial在一定生态区域内，按照统一的试验方案和技术规程，对多个品种进行多试验点、多年份的筛选与鉴定，以确定其利用价值和适宜种植区域的试验。1DB32/T 542720263.4镉低积累对照品种low cadmium accumulation control cultivar通过多年多点试验验证，基因型和表型均稳定表现为镉低积累的水稻品种，用作试验品种糙米镉含量测定及分子标记分析的标准参照。3.5镉高积累对照品种high cadmium accumulation control cultivar通过多年多点试验验证，基因型和表型均稳定表现为镉高积累的水稻品种，用作
6、试验品种糙米镉含量测定及分子标记分析的阳性标准参照。3.6稳定性stability在不同年份、不同试验点、不同环境下，水稻糙米镉积累性状保持稳定的能力。4工作流程水稻镉稳定低积累品种筛选与鉴定的工作流程见图 1。图 1 工作流程图5试验设置试验组划分、试验点的选择、试验点的数量按 NY/T 13002022 第 4 章的规定执行。6试验品种确定6.1对照品种选择每组试验设置常规对照品种、镉低积累对照品种和镉高积累对照品种各 1 个。常规对照品种选择按照 NY/T 13002022 中 5.1 的规定执行。6.2试验品种选择试验品种数量、种子质量、种子数量和品种标识按照 NY/T 1300202
7、2 中 5.25.5 的规定执行。2DB32/T 542720267试验田选择与准备7.1试验田基本条件试验田土壤总镉含量介于 GB 15618 中风险筛选值与污染风险管控值之间。多点试验应覆盖风险筛选值的 1 倍2 倍、2 倍3 倍、3 倍4 倍和 4 倍5 倍的污染梯级，且土壤 pH6.0 的点位比例不少于 50%。其他要求按 NY/T 13002022 中第 6 章的规定执行。7.2土壤镉含量调查在秧苗移栽前 30 d，按照梅花形布点法，在各试验点田块的 5 个位置分别采集等量的表层（0 cm20 cm）土壤混合为 1 个样品，总量不少于 1.5 kg，土壤总镉含量测定按照 HJ 131
8、5 的规定执行。7.3灌溉水农田灌溉水质符合 GB 5084 的要求。8田间试验设计与管理8.1田间试验设计品种筛选试验采用完全随机区组排列，3 次以上重复，小区面积不小于 20 m2，同一试验点小区面积应一致，一组试验宜布设在同一田块进行。小区内水稻栽插行距 30 cm、株距 20 cm，小区四周空出 100 cm种植常规对照品种作保护行。各区组间及区组与保护行间还应设置宽度 40 cm 的操作通道。田间布局见附录 A。8.2田间试验管理按照 NY/T 13002022 中第 8 章的规定执行。9糙米镉含量和品种基因型检测9.1取样孕穗期，每个品种的试验小区按 5 点混样法，采集 5 个以上
9、水稻主茎的叶片作为样品，4 保存备用。成熟期，每个品种的试验小区按 5 点混样法，选取 10 穴水稻，每穴采集 2 个分蘖穗，人工脱粒后作为一个籽粒样品。9.2糙米镉含量检测籽粒样品出糙后检测糙米中镉含量，测定方法按照 GB 5009.15 的规定执行。9.3品种基因型检测9.3.1DNA 提取DNA 提取及纯化按照 GB/T 37874 的规定执行。3DB32/T 542720269.3.2PCR 扩增以试验品种基因组 DNA 为模板，使用 qGCd2 和 LCd38 分子标记引物进行 PCR 扩增，引物信息见附录 B。反应体系与程序按照 GB/T 39917 的规定执行。9.3.3酶切处理
10、与电泳检测LCd38 的 PCR 扩增产物进行限制性内切酶处理，产物采用 4%琼脂糖凝胶进行电泳检测，操作按照 GB/T 39917 的规定执行。9.3.4基因分型电泳条带大小和位置判读基因型（见附录 C）。qGCd2：183 bp 为高镉基因型，149 bp 为低镉基因型；LCd38：112 bp 为高镉基因型，86 bp 为低镉基因型。10水稻镉稳定低积累品种鉴定10.1糙米镉含量鉴定试验品种的糙米镉含量应符合 GB 2762 的要求，且低于镉低积累对照品种的含量值。10.2品种基因型鉴定试验品种两个分子标记（qGCd2 和 LCd38）的检测结果均为低镉基因型。10.3综合评价试验品种满
11、足 10.1 和 10.2 的要求，评价为水稻镉稳定低积累水稻品种。4DB32/T 54272026附录A（资料性）品种筛选试验田间区组设计与品种排列示意图图 A.1 为品种筛选试验的田间区组设置与品种排列示意图，供试验设计参考使用。图 A.1 品种筛选试验田间区组设计及品种排列示意图5DB32/T 54272026附录B（资料性）水稻糙米镉积累相关分子标记信息表 B.1 列出了用于鉴定水稻糙米镉积累特性的主要分子标记（如 qGCd2 和 LCd38）的引物序列、染色体位置、多态性信息及相关内切酶，供基因型鉴定时参考使用。表 B.1 水稻糙米镉积累相关分子标记信息表标记qGCd2LCd38 注
12、上述序列中标示为加粗字体的碱基或片段表示该分子标记的多态性位点。引物FRFRCCCATTGATTAGTTCCCTGCATACCGCAATGACCTTATCGTCACAAAGAAGAAATAATGGCCTTATGGAATGCTTACCTACA染色体Chr02Chr10DNA 序列CCCATTGATTAGTTCCCTGATTTTTCACATAAGCAAAATCTTCTTCCCTGACGAAGTTGACAATGTTGCTCATCTCCCTGTTGGGTTTTATTTGCCAGCTCCGAGAGAGGCTGCCTGTCATGGAGGACATATGCGGTTTTGTATAGTATAAGGTAATCAG
13、ATAAGGTCATTGCGGTATGGTCACAAAGAAGAAATAATGGCACCATGGTAACTATGCAAGTGGTGAAAGTCTTCAACTGAAAAACCATTTGCTTTTGTTTTCCTTATGGTGCAGTATTCTAACCAAATCAAGAATCATATGTAGAGATTGCAGGGTATTTTATATTTTAATGAAACATTTCACAGGATAAGCATACAGATGCCTTCTCCAATACTGGCTTCAGACAAAAGCAAAGGATATCAGCTAAGACAGAATGATGATGTCATTGGCAGGCAGCAGGGAAGTGGTAAAAGCACCCACAYTGTGTAGGTAAGCATTCCATAAG起始位置3116911420089673内切酶BsrDI6DB32/T 54272026附录C（资料性）分子标记鉴定高镉与低镉积累水稻品种的基因型图示图 C.1 给出了两种分子标记（qGCd2 和 LCd38）在鉴定高镉与低镉积累水稻品种中的基因型差异图示，供基因型判定参考。图 C.1 两种分子标记在高镉和低镉积累水稻品种中的基因型差异图7
