1、SC 1042-2000 前吉奥利亚罗非鱼，原产于非洲.80年代引进我国。为保护和保存引进的奥利亚罗非鱼的优良经济性状.防止苗种生产中种质混杂和性状退化，并开展该鱼种质的有效监测，特制定本标准e本标准是七五、八五科技攻关成果的总结。本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。本标准由农业部渔业局提出。本标准由中国水产科学研究院长江水产研究所归口。本标准起草单位g中国水产科学研究院淡水渔业研究中心.本标准主要起草人=潘锋、玉和海、胡攻。409 中华人民共和国水产行业标准奥利亚罗非鱼SC 1042 - 2000 BI ue tilapia 1 范围本标准给出了奥利亚罗非鱼(Oreochromis
2、aurea)主要生物学性状、生长与繁殖、遗传学特性及检测方法。本标准适用于奥利亚罗非鱼的种质检测。2 名称与分类2. 1 名称2. 1- 1 学名奥利亚罗非鱼(Oreochromisaurea)。2.1.2 !jJIJ名蓝罗非鱼、奥利亚非剑、奥利亚丽钢等。2.2 分类位置属自卢形目(Perciformes).丽鱼科(Cichlidae).孵光鲍罗非鱼属(Ore町加Omis)。3 主要生物学性状3- 1 外部形态特征3. 1. 1 形态特征体形侧扁，背部隆起，腹部呈弧形，无腹棱。吻圆钝，突出。口小端位，口裂不达眼前缘，无口须。体披柿鳞。体色蓝灰色，鲍盖后部有一深蓝色斑块。咽喉部呈银灰色。体侧上鳞
3、片中央的色素较边缘深，鱼体两侧有垂直晴带。成鱼背部略带蓝黑色，腹部颜色较淡。背鳝边缘红色。胸鳝淡灰色透明.臀鳝深蓝色。尾鳝终生有蓝绿色斑点，不形成明显的纵向或横向晴带条纹，其末端平截不分叉，呈现橙红色，腹鳝深蓝色，长有生殖突起。稚鱼青灰色带金色光泽，体侧有深灰色垂直暗带，背鳝硬棘幼鱼前期有一较大黑点，以后逐渐消失。各龄鱼体色因环境改变而迅速变淡或加深。奥利亚罗非鱼外形见图1。图1奥利亚罗非鱼外形图中华人民共和圄农业部20-02 -22批准410 2000- 04 -01实施3. 1. 2 可数性状3. 1.2.1 背鳝鳝式，D.XVX咽.1l13。3. 1.2.2 胸鳝鳝式，P.O.1l14.
4、 3. 1.2.3 腹鳝鳝式，V.I.5.3. 1.2.4 臀鳝鳝式，A.m .911. SC 1042 - 2000 3. 1.2.5 左侧第一鲸弓外侧鲸把数，2529.3. 1.2.6 侧线断折，呈不连续两行。侧线鳞数=上段为1829.下段为1218。3.1.2.7颁齿上下颁有圆锥状颁齿各为三列，最外一列为Y型。3. 1. 3 可量性状可量比例性状变动值见表1。表1可量比例性状变动值项目全长.cm体长.cm体长/体商体长/头*体长/尾柄长体长/尾柄商头长/吻*头*/III!径头长/眼间距注g此表为无铺地区2至3龄奥利亚罗非鱼的实测数据.3.2 内部结构特征3. 2. 1鲸鲸分二室，前室较大
5、，后室细长。3. 2. 2 肋骨肋骨数13对。3.2.3 下咽齿左、右下咽骨愈合，其上有浓密的商齿。3. 2. 4 脊椎骨脊椎骨总数(颅后椎数、腹椎数、尾椎数之和)为2930.3. 2. 5 腹膜黑色。4 生长与繁殖4. 1 生长池塘饲养条件下，不同年龄组鱼的体长和体重的理论值见表2.范围20.5-34.5 17.0-29.6 2.53-2.94 2.56-4.29 5.89-9.87 6.06-10.21 2.39-3.50 3.72-5.24 2.06-2.35 411 SC 1042-2000 表2不同年龄组鱼的体长和体重理论值年龄，龄1 2 3 体桂.cm13. 06:t0. 47 1
6、9. 49 :t1. 23 23.93土1.49 体重.g85.69:tl0.17 23 1. 95:t37. 6 417.14土44.99注g主要根据鳞片上的年轮数.在同等饲养条件下，雌鱼的生长率仅为同龄雄鱼的54%-90%。4.2 繁殖4.2.1 性成熟年龄雌、雄鱼初次性成熟为4-6月龄.4.2.2 产卵越冬鱼种在水温24-26C条件下，饲养1-l.5个月即可繁殖，年产卵3-5次，每次闵隔15-30 d , 4.2.3 繁殖水温繁殖最适水温为24-260C.水温低于20C或高于30C繁殖减少。4.2.4 怀卵最不同年龄组鱼的个体怀卵量见表3，表3不同年龄组鱼的个体怀卵量年龄，龄1 体置.g
7、50-150 绝对怀卵量1、拉250-600 相对怀卵量2，桩5-3 1)绝对怀卵量，指直观可数的卵植数。2)相对怀卵量，指单位体重地)所吉卵桂数.5 遗传学特性5. 1 同功酶2 200-350 800-1 200 4-3 醇脱氢醇(ADH)电泳图谱，肝中ADH有2个位点.2条谱带，无多态(见图2)。+ 图2奥利亚罗非鱼肝组织ADH同工酶电泳图谱5.2 染色体数体细胞染色体数2n=44, 503 核型3 400-600 1 300-2 500 3-2 雌、雄鱼核型完全一致，有亚中部着丝粒染色体(5m组)3对，亚端部着丝粒染色体(5t组)12对，端部着丝粒染色体(t组)7对，染色体臂数(NF)
8、50(见图3)。412 SC 1 042 2000 ll ，、均，、，Jlf ，、11，、4、iI、 ; .、4、I 4 1 6 ，、，、，、图3奥利亚罗非鱼染色体组型核型公式，6sm+24st+14t.6 检盟d方法6. 1 生化遗传分析6. 1. 1 电泳样品制备将鱼杀死，取肝脏组织0.3g.以4倍体积0.3%的氧化型辅酶I液匀浆，在冷冻离心机中以17000r/min离心2次，第一次离心后，去除上层泊膜，再第二次离心，至上层溶液澄清为止，取上清液点样。6.1.2 电泳步骤使用水平平板电泳仪和浓度为7.5%聚丙烯雕胶凝胶。电极缓冲液采用EBT缓冲液见附录A(标准的附录)J。步骤为ga)预电泳
9、。恒温5.C时，将预先制备好的聚丙烯酷胶凝胶放在冷却板上，在50mA电流下，预电泳30 min。b)前电泳。预电泳后，用微量加样器在每个点样孔内加人8L样品，在25mA电流下，前电泳10 min，再进行正式电泳。c)正式电泳。在275V电压下，电泳时间为3-5h。d)染色。将电泳后的电泳胶板放人在恒温箱3TC保温的染色液中染色，至酶带清晰显示为止。染色液配方见附录B(标准的附录)。6.2 染色体检测6. 2. 1 标本制备采用肾组织细胞加植物血凝聚素(PHA)短期培养法及空气自然干燥法，和j片，吉姆萨(Giemsa)染色。吉姆萨染色液配方见附录C(标准的附录。6.2.2 计数在光镜下，选取染色
10、体铺散良好、完整的中期分裂相计数染色体数目，确定2n数。6.2.3 形态分类选择10个以上的分裂相，进行显微拍照，按放大照片对染色体组型分析，按形态归类。6.3 结果判定各项测定结果，对照标准指标，综合分析判定，是否符合标准。同时，计算出符合标准的百分数。413 SC 1042 - 2000 附豪A(标准的附录)EBT电极缓冲液的配制A1 原渡配制三琵甲基氨基甲烧CTris)65.4 g 乙二胶四乙酸锅盐CNa，-EDTA)3.51 g 蒸馆水1 300 mL 另称棚酸约27g，用来调节pH值至8.6，并稀释至1500 mL. A2 电极用液正极用液E取原液79.4mL稀释至1000 mL.浓
11、度为O.028 6 molJL 0 负极用液s取原液111mL稀释至1000 mL，浓度为0.04mol/Lo 附录B(标准的附录)操色液配方B1 0.25 moJ/L Tirs-HCJ j酷色锺冲渡的配制称取Tirs30. 29 g.加蒸锢水900mL.和盐酸调节pH值至8.0.再稀释至1000 mLo B2 接色液配方0.25 mol染色缓冲液140 mL 氧化型辅酶I22 mg 氯化硝基四氨哇兰CNBT)10.5 mL 吩嚓甲醋硫酸盐(PMS)10.5 mg 95%乙醇4.5 mL 附录C标准的附录吉姆萨(Giemsa)挠色液配制C1 Giemsa染色母液的配制称取0.5gGiemsa椅
12、，量取33mL甘泊，在研钵中先用少量甘油与Giemsa粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余甘汹加人，在56C条件下保温2h.后，加入33mL甲酶，保存于棕色瓶内，C2 0.2 moJ磷酸缓冲液配制C2.1 A液(0.2mol/L磷酸氢二锅(Na，HPO，)液液称取磷酸氢二锅(Na2HPO， H,)36. 61 g定容于1L蒸馆水中或称取磷酸氢工销(Na，HPO， 414 sc 1042-2000 2H20)71. 64日定容于1L蒸馆水中。C2.2 B液(0.2mol/L磷酸二氢销(NaH2PO，)溶液称取磷酸二氢销(NaH，PO， H,O) 27. 6 g定容于1L蒸馆水中，或称取磷酸二氢销(NaH，PO， 2H20)31. 21 g定容于1L蒸馆水中。C2.3 pH7.2磷酸缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二锅(Na2HPO，)溶液72.0mL，加0.2mol/L磷酸二氢纳(NaH2PO，)溶液28.0 mL即成。C3 Giemsa工作染液取100mL pH7. 2磷酸缓冲液，加入3mL Giemsa染色母液即成。415
