1、ICS 65.020.20 B 62 武汉市地方标准 红掌组培育苗生产技术规程 2018-08-28 发布2018-09-28 实施武汉市质量技术监督局 发 布 DB4201 DB4201/T 5622018 DB4201/T 5622018 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由武汉市农业科学院提出并归口。本标准由武汉市农业科学院作物研究所起草。本标准主要起草人：王德欢、施先锋、陈祖平、周谟兵、葛米红、梁欢、孙玉宏、李爱成、张娜、宋奎琳、杨皓琼。DB4201/T 562-2018 1 红掌组培育苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了红掌组培育苗生产的设施条件
2、、试管苗的生产、穴盘苗的培育及出圃规格。本标准适用于武汉地区红掌组培苗的生产，其他地区可参考使用。2 范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 8321（所有部分）农药合理使用准则 NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 设施条件 场地及主要设施应符合NY/T 2306-2013。4 试管苗的生产 4.1 物品准备 4.1.1 培养基配制 4.1.1.1 以 MS 培养基为基本培养基，添加琼脂粉 7.0 g/L8.0 g/L，蔗糖 20
3、g/L30 g/L，并根据不同培养阶段添加适量植物生长调节物质，调节 pH 值为 5.86.0。4.1.1.2 愈伤组织诱导培养基：MS+6-BA 0.5 mg/L2.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L0.5 mg/L。4.1.1.3 不定芽分化培养基：MS+6-BA 0.5 mg/L1.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L0.3 mg/L。4.1.1.4 增殖与复壮培养基：MS+6-BA 0.1 mg/L0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L0.2 mg/L。4.1.1.5 生根培养基：MS
4、+NAA 0.1 mg/L0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L0.3 mg/L。4.1.1.6 培养基配制完毕后，按每支组培瓶 40 mL50 mL 容量及时分装并进行高压蒸汽灭菌。在 121下灭菌 20 min30 min，待灭菌锅压力表显示为零后尽快取出冷却备用，宜在 30 d 内使用。4.1.2 无菌水制备 用三角瓶分装不超过1/2体积的蒸馏水，在121下灭菌20 min30 min，待灭菌锅压力表显示为零后尽快取出冷却备用，宜在7 d内使用。4.1.3 无菌盘准备 将直径20 cm的铁盘装入高温消毒灭菌袋内，在121下灭菌20 min30 min，待灭菌锅压力表显示为零后取出烘干
5、备用，宜在7 d内使用。4.2 接种操作准备 4.2.1 接种室消毒 DB4201/T 562-2018 2 接种前30 min用75酒精擦拭超净工作台，摆上所需培养基、酒精灯、酒精消毒液、镊子、剪刀等物品；开启超净工作台吹风功能，打开超净工作台和接种室用紫外灯照射20 min30 min。此外，接种室应定期使用高锰酸钾与甲醛溶液进行熏蒸消毒处理。4.2.2 操作人员的消毒 进入接种室前，操作人员应洗净手（夏季露手臂操作还应洗净手臂）、穿戴上经过消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等，并经由配备风淋系统的缓冲间进入接种室。操作过程中要经常使用75酒精擦拭手（夏季露手臂操作还应擦拭手臂）。4.3 愈伤
6、组织诱导 4.3.1 外植体选取和处理 4.3.1.1 从生长健壮的植株上选择幼嫩的叶柄或叶片作为外植体。外植体在加有适量洗洁精或洗衣粉的自来水中浸泡 15 min，然后用自来水冲洗 20 min30 min，期间用手轻轻搓揉叶柄或叶片。冲洗结束后，转到 75酒精中浸泡 30 s60 s，再用无菌水冲洗 2 次3 次，接着用 0.1升汞溶液消毒 8 min10 min，最后无菌水冲洗 3 次5 次。4.3.1.2 若选取叶柄为外植体，则将叶柄切割成 1 cm 长度的小段；若选取叶片为外植体，则将叶片剔除叶缘与叶脉后、切割成 1cm2 的方块。4.3.2 诱导培养 将切割好的外植体接种于愈伤组织
7、诱导培养基。培养条件宜控制在温度25、光照强度2 000 lm/m2、光照时间12 h/d（前15 d光照时间0 h/d）。4.4 不定芽分化 培养60 d后，将愈伤组织切割，转接到不定芽分化培养基中。培养条件宜控制在温度25、光照强度2 000 lm/m2、光照时间12 h/d。4.5 增殖与复壮 将分化的不定芽从愈伤组织上沿基部切下，插入芽增殖与复壮培养基中；宜30 d40 d继代1 次。培养条件宜控制在温度25、光照强度2 000 lm/m2、光照时间12 h/d。4.6 生根培养 将增殖的芽去除底部愈伤组织与老叶，插入生根培养基中；生根培养30 d形成完整的根系。5 穴盘苗的培育 5.
8、1 炼苗 移栽前3 d，打开组培瓶盖，加注深宜0.5 cm1 cm无菌水，置温室中适当遮光炼苗，炼苗光强不宜超过12 000 lm/m2。5.2 5.2 移栽 取出试管苗，洗净培养基，用0.1高锰酸钾溶液浸泡试管苗10 s。选用纤维直径0 mm10 mm的红掌专用基质，将基质经净化水浸泡搅拌湿润后，填装128 孔穴盘。宜在光照强度小于12 000 lm/m2、温度18 28 的环境中进行移栽。移栽后，宜用50多菌灵可湿性粉剂1 000倍溶液喷施1次。农药使用应符合GB/T 8321 的要求。5.3 穴盘苗管理 5.3.1 移栽后 10d 内，宜控制温度 18 28、光照强度 5 000 lm/
9、m212 000 lm/m2、空气相对湿度 6080。5.3.2 移栽 10 d 以后，控制温室温度在 15 30、光照强度不超过 20 000 lm/m2，当温度 DB4201/T 562-2018 3 15 28 时、控制湿度在 6570，当温度在 28 30 时、控制湿度在 7085。宜每隔 2 d3 d，浇灌 1000 倍复合肥（20-10-20）溶液。此外，宜每隔 15 d，喷施一次 1 000 倍磷酸二氢钾叶面肥。5.3.3 穴盘苗培育期间，密切关注植株生长状况，定期轮换使用土霉素与多菌灵或百菌清预防病害发生。若发现感病植株，应及时剔除。农药使用应符合 GB/T 8321 的要求。6 出圃规格 培育90 d100 d，穴盘苗植株健壮，株高达到5 cm，叶片肥厚、色泽浓绿。_
