1、 ICS 65.020.20 B 05 武汉市地方标准 名优樱花组织培养快速繁殖技术规程 2017-06-20 发布2017-07-20 实施武汉市质量技术监督局 发 布 DB4201 DB4201/T 5302017 DB4201/T 530-2017 I 前 言 本规程按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本规程由江汉大学、武汉法雅园林集团有限公司提出。本规程由武汉市农业科学技术研究院归口。本规程起草单位：江汉大学、武汉法雅园林集团有限公司。本规程主要起草人：蒋细旺、况红玲、戴希刚、张灵灵、徐海芹、张兵、姚中华、徐建刚、陆露、翟敬华。DB4201/T 530-2017 1 名优樱
2、花组织培养快速繁殖技术规程 1 范围 本规程规定了武汉地区名优樱花的种类或品种及组织培养快速繁殖技术的启动培养、增殖培养、生根培养、炼苗和移栽、组培苗的田间管理的要求。本规程适用于武汉地区名优樱花组织培养快速繁殖，立地条件相近地区亦可参照执行。2 种类或品种 适宜本地栽植，观赏性、抗性强樱花种类或品种，如：山樱花（Cerasus serreulat）、染井吉野（C.yedoensis）、日本晚樱杨贵妃(C.serrulata var.lannesiana Mollis）、醉红（C.serrulata var.lannesiana Zuihong）等。3 组织培养快速繁殖技术 3.1 启动培养
3、3.1.1 茎段外植体的获得 将嫩枝剪成6 cm10 cm的茎段，室内用清水将材料洗净，自来水冲洗0.5 h2 h，在超净台上用70的酒精浸泡40 s，用无菌水冲洗4 次；再用0.1的升汞浸泡10 min，无菌水冲洗5 次。用滤纸吸干，将材料切成1 cm2 cm带一个腋芽的茎段。3.1.2 芽的启动与形成 3.1.2.1 培养基组成 以MS为基本培养基，将茎段接种于启动培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L蔗糖 30 g/L 琼脂 6 g/L，pH5.86.0（用0.1 mol/L的HCl或NaOH调节）。MS培养基配方见附录A。3.1.2.2 培养基制备 培养基先配
4、制，装大瓶，连直径90 mm的圆形玻璃培养皿一起用蒸汽高压灭菌锅121 灭菌20 min，再无菌分装，每个培养皿约含30 ml的培养基。腋芽萌发用灭菌培养皿培养。3.1.2.3 培养条件 培养室温度（252），日光灯光源，光照强度1 500 lx2 000 lx，光照周期16 d。3.1.2.4 接种 茎段外植体采用水平接种。3.1.2.5 芽的萌动与生长 DB4201/T 530-2017 2 培养4 周5 周后形成芽，直至幼苗高6 cm8 cm。3.2 增殖培养 3.2.1 培养基组成 当植株长至6 cm8 cm时，将植株切成带1 个节2 个节的茎段进行增殖。接种到增殖培养基 WPM+KT
5、 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L蔗糖 30 g/L琼脂 6 g/L0.5 g/L的活性炭颗粒，pH5.86.0。WPM培养基配方（pH 5.2）见附录B 3.2.2 培养基制备 增殖培养用400 ml的带有透气膜的培养瓶培养，每个培养瓶约含80 ml的培养基。培养基用蒸汽高压灭菌锅121 灭菌20 min。3.2.3 增殖培养条件 培养条件见3.1.2.3。增殖培养4 周5 周开始形成丛生芽。3.2.4 继代培养 将丛生芽切成单芽继代培养，每2 周4 周更换培养基。3.3 生根培养 3.3.1 含生长素的培养基培养 3.3.1.1 培养基组成 将增殖获得的幼苗，长至6 cm8 cm
6、时，切成带1 个2 个节的茎段进行生根培养。以1/2 WPM（大量元素减半）为基本培养基。接种到含生长素的生根培养基1/2 WPM+IBA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L 蔗糖 25 g/L琼脂 6 g/L0.5 g/L的活性炭颗粒，pH5.86.0。WPM培养基配方（pH 5.2）见附录B。3.3.1.2 培养基制备 生根诱导采用250 ml的锥形瓶培养，每瓶约含75 ml的培养基。培养基用蒸汽高压灭菌锅121 灭菌20 min。3.3.1.3 培养条件 培养条件见3.1.2.3。培养4 d6 d。3.3.2 不含生长素的培养基培养 3.3.2.1 培养基组成 将培养4 d6 d
7、的增殖材料转接到无激素的生根培养基1/2 WPM蔗糖 25 g/L琼脂 6 g/L 0.5 g/L的活性炭颗粒，pH5.86.0。WPM培养基配方（pH 5.2）见附录B。3.3.2.2 培养基制备 见3.3.1.2。DB4201/T 530-2017 3 3.3.2.3 培养条件 培养条件见3.1.2.3。培养4 周5 周。3.4 炼苗和移栽 3.4.1 苗床的准备 选择排水良好地块做苗床，苗床宽80 cm100 cm，高15 cm20 cm，长度6 m10 m。用蛭石、珍珠岩、泥炭土（体积比1：1：1）混合均匀作为基质，基质厚度15 cm20 cm。基质先喷多菌灵50 可湿性粉剂500 倍
8、液消毒，再用水淋透，放置1 d2 d，再用水淋透，搭盖拱高40 cm60 的塑料拱棚，然后用塑料薄膜覆盖保湿7 d，保证基质潮湿和较高空气湿度。3.4.2 练苗 生根培养后，当苗长至高5 cm7 cm，具有片5 片6 片叶，3 条4 条根时，可将试管苗进行适当炼苗，即将培养瓶在培养室，去掉封口膜，置于（252）练苗室通风炼苗4 d5 d，隔天用1/4 MS大量元素营养液喷洒叶面，10 d后将其移出练苗室外培养。3.4.3 移栽 从培养瓶中取出试管苗，用清水小心洗净粘附在根系上的琼脂，不可伤害根系和茎叶。移栽入基质，株行距4 cm10 cm。盖膜保湿，相对湿度为80 90。根据光照强度遮阴，保持
9、3 000 lx5 000 lx光照。3.5 组培苗的田间管理 3.5.1 温度、湿度和光照的控制 移栽后保持光照强度3 000 lx5 000 lx，晴天中午和下午揭开塑料薄膜2 次3 次通风。温度控制在25 30，6 d10 d内必须保持空气相对湿度95 以上；10 d20 d逐渐增加通风，揭膜，每天喷雾3 次5 次保持空气湿度80 90，逐渐减少浇水量，但保持基质湿润。7 d10 d幼苗即可成活，4 周5 周后移栽成活率为80 以上。3.5.2 苗期养分和病虫害管理 刚移栽的幼苗，20 d内间隔4 d6 d叶面喷0.2 的磷酸二氢钾2 次3 次至现水滴，25 d后基质浇0.4 的磷酸二氢
10、钾一次。当苗长至高8 cm12 cm，具有5 片8 片叶，5 条7 条根，且植株健壮、叶大而颜色深绿，可出圃。名优樱花组培苗的主要病虫害防治见附录C。DB4201/T 530-2017 4 附 录 A（规范性附录）MS 培养基配方 表A.1给出了MS培养基配方的内容。表A.1 MS 培养基配方 类别 成分 分子量 使用浓度 mg/L 大量元素 硝酸钾 KNO3 硝酸铵 NH4NO3 磷酸二氢钾 KH2PO4 硫酸镁 MgSO47H2O 氯化钙 CaCl22H2O 101.11 80.04 136.09 246.47 147.02 1900 1650 170 370 440 微量元素 碘化钾 K
11、I 硼酸 H3BO3 硫酸锰 MnSO44 H2O 硫酸锌 ZnSO47 H2O 钼酸钠 Na2MoO42 H2O 硫酸铜 CuSO45 H2O 氯化钴 CoCl26 H2O 166.01 61.83 223.01 287.54 241.95 249.68 237.93 0.83 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 0.025 铁盐 乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA 硫酸亚铁 FeSO47H2O 372.25 278.03 37.3 27.8 有机成分 肌醇（环乙六醇）甘氨酸（氨基乙酸）盐酸硫胺素（维生素B6）盐酸吡哆醇（维生素B1）烟酸（维生素B3或PP）100 2.0 0.1
12、 0.5 0.5 蔗糖 342.31 30 g/L 琼脂粉 7 g/L pH 5.86.0 DB4201/T 530-2017 5 附 录 B（规范性附录）WPM 培养基配方（pH 5.2）表B.1给出了WPM培养基配方（pH 5.2）的内容。表B.1 WPM 培养基配方（pH 5.2）类别 成分 分子量 使用浓度 mg/L 大量元素 硫酸钾 K2 SO4硫酸镁 MgSO47H2O 磷酸二氢钾 KH2PO4 硝酸铵 NH4NO3 101.11 246.47 136.09 80.04 990 370 170 400 微量元素 硫酸锰 MnSO44 H2O 硫酸锌 ZnSO47 H2O 硼酸 H3
13、BO3 硫酸铜 CuSO45 H2O 钼酸钠 Na2MoO42 H2O 223.01 287.54 61.83 249.68 241.95 22.3 8.6 6.2 0.25 0.25 钙盐 氯化钙 CaC24H2O 236.15 556 铁盐 乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA 硫酸亚铁 FeSO47H2O 372.25 278.03 37.3 27.8 有机成分 肌醇（环乙六醇）甘氨酸（氨基乙酸）盐酸吡哆醇（维生素B1）盐酸硫胺素（维生素B6）泛酸（维生素B5）100 2.0 1.0 0.5 0.5 蔗糖 342.31 20 g/L 琼脂粉 7 g/L pH 5.25.5 DB4201/T
14、 530-2017 6 附 录 C（规范性附录）樱花组培苗的主要病虫害防治 表C.1给出了樱花组培苗的主要病虫害防治的内容。表C.1 樱花组培苗的主要病虫害防治 病虫害名称 危害部位及症状 防治方法 褐斑病Mycosphaerella sentina 危害叶片，下部叶片开始发病，逐渐向上部蔓延，初期为圆形或近圆形褐色病斑，逐渐为不规则形的褐色大斑块，后期为黑色。严重时病斑可连成片，使叶片枯黄脱落。新稍萌发前，可喷洒3 波5 波美度石硫合剂，发病初期喷洒160倍波尔多液，50苯来特可湿性粉剂1 500倍2 000倍液。白粉病Erysiphe cichoracearum 危害叶片。叶两面产生白色粉
15、霉层，后出现黑色斑，湿度高易感病。666.7 m2用多菌灵50可湿性粉剂100 g200 g，兑水喷雾，于发病初期喷洒，共喷2次，间隔5 d7 d。蚜虫Myzus persicae、危害嫩枝、叶背，致使植株矮化、卷叶甚至死亡。叶片还受蚜虫排泄物影响，易遭致煤污病产生。蚜虫也是樱花病毒病害的主要传播者之一。喷2.5的溴氰菊酯5 000倍8 000倍液或20杀灭菊酯2 000倍4 000倍液或1 000倍1 500倍的50灭蚜松乳油进行防治。红蜘蛛Petrobia Latens 危害叶和嫩芽。刺吸汁液，使受害叶失绿枯焦甚至落叶；受害嫩芽发黄枯焦，不能展叶。影响正常生长，且能导致其它病害侵害。用黑光
16、灯诱杀成虫。或每666.7 m2用50辛硫磷乳油1 000倍2 000倍，兑水50L喷雾；或菊酯类药2 000倍4 000倍液喷雾；或氧化乐果、三氯杀螨等药剂。叶蝉Cicadella viridis 危害叶和茎。使受害叶、茎遭啃食，不能进行正常的光合作用。用50的磷胺乳剂2 000倍液、或菊酯类药5 000倍8 000倍液喷雾。白粉虱（小白蛾、白蝇）Trialeurodes vaporariorum 危害叶片。使受害叶失绿枯焦甚至落叶。用12扑虱灵乳油1 000倍液，或25灭螨猛乳油1 000倍液，或2.5天王星乳油3 000倍液、2.5功夫菊酯乳油2 000倍3 000倍液 喷洒。银纹夜蛾Plusia agnata 幼虫蛀食叶片，使受害叶遭啃食，不能正常生长。用每g含100亿以上孢子的青虫菌粉剂1 500倍液。此外，可选用10吡虫啉可湿性粉剂2 500倍液或5抑太保乳油2 000倍液，隔20 d 1 次，防治1 次或2 次。
