1、ICS 65.020.20CCSB61DB3707潍坊市地方标准DB3707/T 0512022菊花组培育苗技术规程Technical Regulation for in Vitro Propagation of Dendranthema morifolium2022-08-02 发布2022-08-31 实施潍坊市市场监督管理局发 布DB3707/T 0512022I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14外植体的选择和处理.14.1 外植体母株的选择.14.2 外植体的处理.14.3 外植体表面灭菌与接种.15试管苗培养.25.1 初代培养.25.2 继代培养.25.
2、3 生根培养.26试管苗驯化移植.26.1 驯化炼苗.26.2 移植方式.26.3 移植.36.4 移植后的管理.37组培苗出圃.37.1 出圃标准.37.2 包装运输.3DB3707/T 0512022II前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由自然资源和规划局提出、归口并组织实施。本标准起草单位：潍坊职业学院；潍坊市农业科学院。本标准主要起草人：孙曰波、丁雪珍、丁世民、任术琦、赵从凯、张二海、赵庆柱、邱玉宾、杨志莹、张海良、郭光智、冯宝春。DB
3、3707/T 05120221菊花组培育苗技术规程1范围本标准规定了菊花组培育苗中外植体的选择和处理、试管苗培养、试管苗驯化移植、组培苗出圃的技术要求。本标准适用于菊花组培种苗的繁育。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB6001 育苗技术标准NYT 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程3术语和定义NYT 2306-2013 中界定的术语和定义适用于本文件。4外植体的选择和处理4.1 外植体母株的选择4.1.1 从处于旺盛生长期的植株中选择具有繁育
4、品种典型特征、无病虫危害、生长健壮的植株。4.1.2 在取材前 2 周3 周，将入选株（母株）置于温室内培养，不要对叶面喷水，这样能够提高灭菌的成功率。4.2 外植体的处理4.2.1 接种前从入选株剪取无病虫害、粗壮的嫩枝作为外植体。4.2.2 将嫩枝上展开的叶片除去，留一段叶柄。4.2.3 将处理好的嫩枝用洗衣粉清洗，经自来水冲洗干净备用。4.3 外植体表面灭菌与接种4.3.1 在超净工作台上，将外植体嫩枝先放入 75%的乙醇溶液中浸泡 30 s60 s 后，再放入 2%次氯酸钠溶液中浸泡 15 min20 min，然后用无菌水冲洗 3 次。4.3.2 用已灭菌的剪刀、镊子将每个叶柄切口剪去
5、一小段，将嫩枝均匀切分成大小约 1.0 cm1.5 cmDB3707/T 05120222的小段，每段含 1 个2 个芽。4.3.3 按照生长的极性接种于事先准备好的初代培养基中（基部切口应插入培养基内），每瓶接种 1株。5 试管苗培养5.1 初代培养5.1.1 初代培养基本培养基为 MS（Murashige and Skoog）培养基。植物生长物质为 6-苄基氨基嘌呤（6-BA），使用浓度范围为 0.1 mg/L0.5 mg/L，pH 值 5.86.2。5.1.2 培养温度为 23 27，光照强度 1000 1x1500 1x 培养，光照时间 12 h/d16 h/d。5.1.3 待新芽生长
6、至大于 5 cm 后，将芽切下进行继代培养。5.2 继代培养5.2.1 基本培养基为 MS 培养基。植物生长物质有萘乙酸（NAA），使用浓度范围为 0.05 mg/L0.2mg/L，6-苄基氨基嘌呤（6-BA），使用浓度范围为 0.1 mg/L0.2 mg/L，pH 值 5.86.2。5.2.2 将初代培养获得的新芽剪下，切割成 1.0 cm1.5 cm 小段，每段含 1 个2 个芽，按照生长的极性接种于事先准备好的继代培养基中，每瓶接种 10 株。5.2.3 培养温度为 23 27，光照强度 1000 1x3000 1x，光照时间 12 h/d16 h/d。待小苗长至大于 5 cm 后，再次
7、进行继代转接，如此反复直到需要的数量。5.3 生根培养5.3.1 基本培养基为 MS 培养基。植物生长物质为萘乙酸（NAA），使用浓度范围为 0.05 mg/L0.1mg/L，pH 值 5.86.2。5.3.2 将继代培养获得的新芽剪下，切割成 1.5 cm2.0 cm 小段，按照生长的极性接种于事先准备好的生根培养基中，每瓶接种 15 株20 株。5.3.3 培养温度为 23 27，光照强度 2000 1x4000 1x，光照时间 12 h/d16 h/d。待小苗全部生根后（根长 0.5 cm1 cm），就可以出瓶驯化移植。6 试管苗驯化移植6.1 驯化炼苗将培养瓶放置温室自然散射光下，封口
8、炼苗 2 d3 d.然后再开口炼苗 1 d2 d，温度控制在 22 28。6.2 移植方式DB3707/T 05120223菊花试管苗可采用苗床移植或穴盘移植。移植基质要求疏松透气，有一定的保水保肥能力，推荐使用蛭石。由于试管苗原来的环境是无菌的，移植后应尽量不使菌类大量滋生，以利成活。所以应对基质进行高压灭菌。移植前将基质装好、浇透水。6.3 移植打开培养瓶盖，将已经锻炼的有根小苗用镊子轻轻夹出，洗净根部粘附的培养基，用竹签在基质上打一小孔，将幼苗插入孔中并将孔覆严，移植完毕喷一遍水，以保证根系与基质充分接触。6.4 移植后的管理6.4.1 移植时基质要浇透水，然后搭设小拱棚，初期 2 d3
9、 d 喷水一次，保持拱棚薄膜上有水珠出现。5 d7 d 后，发现小苗有生长趋势，可减少喷水次数，将拱棚两端打开通风，将空气湿度保持在 75%85%之间。约 15 d 左右揭去小拱棚的薄膜，逐渐减少浇水，促进小苗长得粗壮。6.4.2 初期在小拱棚上加盖遮阳网，遮光率为 40%，以防阳光灼伤小苗和增加水分的蒸发。当小植株有了新的生长时，逐渐加强光照，4 周后可直接利用自然光照，促进光合产物的积累，增强抗性，促其成活。6.4.3 适宜生长温度是 18 30，最好控制在 20 26，就可使试管苗在 18 d25 d 左右移栽成活，并长出新根新叶。6.4.4 移植 2 周后，可每周结合喷水时加入 0.1
10、%的尿素，或用 1/2MS 大量元素的水溶液作追肥，以加快幼苗的生长与成活。6.4.5 50%氯溴异氰尿酸 8001000 倍液喷施 7d10d 后，再喷施 33.5%喹啉铜悬浮剂 800 倍液，25d30d 后再喷施一次；或者使用浓度稀释 800 倍1000 倍的甲基硫菌灵喷施，7 d10 d 一次，以便有效的保护幼苗。7 组培苗出圃7.1 出圃标准组培苗高度 4 cm5 cm，具有 6 片8 片展开叶片，叶色浓绿，根系发达，植株矮壮。7.2 包装运输7.2.1 短距离运输时将菊花组培苗从苗床取出，100 株一把装入保鲜袋中，然后装入包装箱运到指定地点即可。7.2.2 长距离运输时将菊花组培苗从苗床取出后，100株一把摆放到阴凉处2小时4小时适当脱水，等植株变软后装入保鲜袋，装箱打包快递即可。DB3707/T 05120224_
