1、ICS 65.020.20CCS B 05DB3703淄博市地方标准DB3703/T 92023石榴组培快繁技术规程Code of practice for tissue culture and rapid propagation of pomegranate2023-11-15 发布2024-01-15 实施淄博市市场监督管理局发 布DB3703/T 92023I前 言本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由淄博市农业农村局提出、归口并监督实施
2、。本文件起草单位：山东省果树研究所、淄博市农业科学研究院、山东省农业科学院黄河三角洲现代农业研究院、山东省农业科学院、淄博锦川河富硒农业发展有限公司。本文件主要起草人：冯立娟、尹燕雷、安萌萌、王菲、付莹、王传增、杨雪梅、张锦超、乔峰、王增辉、唐海霞、焦其庆、唐贵敏、郭伟、常元胜。DB3703/T 920231石榴组培快繁技术规程1范围本文件规定了石榴组培快繁中培养基制备与灭菌、母株选择、外植体采集与灭菌、初代培养、增殖培养、生根培养、驯化移栽、质量要求、包装运输和档案管理等技术要求。本文件适用于石榴组织培养快速繁殖。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款
3、。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T 2289林木种苗生产经营档案3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4培养基制备与灭菌4.1培养基制备培养基制备方法见表 1。表 1培养基制备方法培养基类型配方初代培养基1.5 mg/L 6-BA、0.3 mg/L IBA、6 g/L 琼脂、30 g/L 蔗糖、2 g/L PVP 的 MS 培养基增殖培养基0.3 mg/L NAA、100 ml/L200 ml/L 椰汁、0.5 mg/L1.0 mg/L 6-BA、0.2 mg/L GA3、6 g/L琼脂、30
4、 g/L 蔗糖、2 g/L PVP 的 MS 培养基，或 100 ml/L 椰汁、0.6 mg/L 6-BA、0.5 mg/L IBA、0.2 mg/L GA3、6 g/L 琼脂、30 g/L 蔗糖、2 g/L PVP 的 B5 培养基生根培养基1.0 mg/L IBA、100 ml/L 椰汁、6 g/L 琼脂、30 g/L 蔗糖的 B5 培养基，或 0.6 mg/L IBA、0.1 mg/LNAA、6 g/L 琼脂、30 g/L 蔗糖的 1/2 MS 培养基，或 0.6 mg/L IBA、0.8 g/L 活性炭、6 g/L琼脂、20 g/L 蔗糖的 WPM 培养基4.2培养基灭菌配好的培养基
5、 pH 值调整为 5.86.0，分装在玻璃组培瓶或三角瓶中，宜采用高压蒸汽法灭菌。5母株选择选择适合当地气候条件、生长旺盛、无病虫害、优良性状典型的健壮植株作为外植体采集母株。DB3703/T 9202326外植体采集与灭菌6.1外植体采集6.1.1采集外植体时选择连续 3 d 以上的晴天。6.1.24 月6 月，采集生长健壮、无病虫害的当年生枝条顶端带芽茎段作为外植体。6.1.311 月翌年 3 月，采集成年植株一年生休眠枝条，插入装有清水的容器中，容器置于室温 18 25 下培养，待芽萌发抽枝长至 25 个节时，取其带芽茎段作为外植体材料。6.2外植体灭菌采集外植体材料后，去掉 2/3 叶
6、片，剪成 1.5 cm2 cm 左右的单腋芽茎段，用洗洁精稀溶液浸泡，振荡洗涤 10 min，自来水冲洗干净后，置于超净工作台上灭菌。75%酒精表面杀菌 30 s，无菌水冲洗 3遍，5%NaClO 溶液浸泡振荡 8 min，无菌水冲洗 5 遍。7初代培养将灭菌后的茎段置于 4 6 PVP 溶液中浸泡 10 min 取出，用无菌滤纸吸干表面水分，剪去两端变色部分 2 mm3 mm，然后形态学下端朝下接种于初代培养基中。在超净工作台中接种，每瓶接种 3 个4 个单腋芽茎段。将接种后的单腋芽茎段置于温度(241)，光照度 1 500 lx2 000 lx，光照时间14 h/d16 h/d 的条件下培
7、养。8增殖培养经初代培养诱导出的腋芽长至 2 cm3 cm 时，切去基部后，将剩余茎段转入增殖培养基中。灭菌前建议添加 PPM 抗菌剂，减少增殖苗污染。每瓶接种 3 个4 个单腋芽茎段。加入 GA3 防止玻璃化，加入椰汁防茎尖坏死和叶片变黄脱落。接种后置于温度(251)，光照度 2 000 lx2 500 lx，光照时间12 h/d14 h/d 的条件下培养。9生根培养当增殖芽长到 3 cm5 cm 时，从基部切下，转入生根培养基中，暗培养 7 d 后转入光照培养。光照温度为(251)，光照度 2 000 lx2 500 lx，光照时间 12 h/d14 h/d 的条件下培养。10驯化移栽10
8、.1驯化选择生长健壮、叶片伸展、根长度为 5 cm10 cm 的组培苗进行驯化。将组培苗放置到室温 25、相对空气湿度 70%90%的温室中静置 2 d，然后拧松瓶盖放置 2 d，再去掉瓶盖放置 2 d 以上。10.2移栽将瓶苗取出，用清水小心冲洗根部培养基，避免伤根。使用 5%高锰酸钾溶液浸泡 1 min，对组培苗进行杀菌消毒。去掉瓶苗下部 2 个4 个单叶后，栽入珍珠岩、蛭石、河沙和草炭质量等比配制的基质DB3703/T 920233中，浇透水。放于阴凉处覆膜保湿，每天早晚 2 次通风换气喷水；7 d14 d 后揭去薄膜，每天喷 1 次水，置于自然光照下生长。11质量要求11.1组培苗质量
9、要求苗木壮、挺直、有活力，具原品种苗木特性。苗高 3 cm5 cm，单叶5 个，大小协调、色泽正常。根5 条，长度 5 cm10 cm。同一批次组培苗达标率 90%以上，培养基无污染。11.2移栽苗质量要求苗木健壮、挺拔，形态完整，具原品种苗木特性。苗高 5 cm10 cm，单叶10 个，大小协调，色泽正常。根系完整、发达，数量 5 条10 条，长度 10 cm15 cm。同一批次移栽苗达标率 90%以上，无病虫害。12包装、运输12.1包装将已完成驯化的组培苗及培养瓶放在泡沫箱里，瓶口向上，泡沫箱外再用纸箱包装，外包装粘贴指示性标志。12.2运输运输时宜采用可调温的厢式货车，温度保持在 20 25。13档案管理按照 LY/T 2289 的规定执行。
