1、DB3301浙江省杭州市地方标准DB 3301/T 10622018铁皮石斛组织培养育苗技术规程2018 06 20 发布2018 06 20 实施杭州市质量技术监督局发 布DB3301/T 10622018I前 言本标准依据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由杭州市农业局提出并归口。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准起草单位：浙江传化生物技术有限公司。本标准主要起草人：米晓洁、张明奎、荣松、俞永奇。DB3301/T 106220181铁皮石斛组织培养育苗技术规程1范围本标准规定了铁皮石斛制种、组培育苗、炼苗与移栽的要求及模式图。
2、本标准适用于杭州市铁皮石斛组织培养育苗生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 3543（所有部分）农作物种子检验规程GB 4285农药安全使用标准DB33/T 6352015铁皮石斛生产技术规程3术语和定义DB33/T 6352015界定的术语和定义适用于本标准。4制种4.1品种选择根据生产实际，选择优质高产并经过鉴定确认，符合GB/T 3543（所有部分）要求的品种。4.2授粉4月6月，进行人工授粉，授粉后挂牌标记，采用物理隔绝。4.3采收9月
3、10月，当蒴果开始转黄时，选择饱满的果实采收备用。5组培育苗5.1蒴果消毒蒴果经过后熟，除去表面的杂物，在超净工作台上用75%的酒精浸泡30秒，无菌水清洗干净，再放入0.5%的次氯酸钠溶液中浸泡10分钟15分钟后，用无菌水冲洗3次5次。5.2种子保存DB3301/T 106220182在超净工作台上无菌手术刀、镊子将灭菌好的蒴果剖开，将种子密封贮藏于5毫升10毫升无菌玻璃瓶中，每瓶保存1个蒴果的种子。将装好种子的玻璃瓶置于35的冰箱中保存。保存4个月6个月。5.3萌发培养5.3.1播种用75%酒精擦拭装有种子的玻璃瓶表面，置于超净工作台上，用无菌镊子均匀撒播于萌发培养基中。萌发培养基的基本培养
4、基为MS，激素和添加物配方见附录A。5.3.2培养条件前期暗培养15天后，光照强度12.5molm-2s-137.5molm-2s-1培养，光照时间8小时/天12小时/天，培养温度为252。5.4分化培养5.4.1转接培养培养60天75天后，将原球茎均匀地转接到分化培养基上，分化培养基的基本培养基为MS，激素和添加物配方见附录A。5.4.2培养条件光照强度12.5molm-2s-137.5molm-2s-1，光照时间8小时/天12小时/天，培养温度为 252。5.5壮苗与生根培养5.5.1转接培养培养60天70天后，转接到壮苗与生根培养基上。壮苗与生根培养基的基本培养基为MS，激素和添加物配方
5、见附录A。5.5.2培养条件光照强度 12.5molm-2s-137.5molm-2s-1，光照时间8小时/天12小时/天，培养温度为252。组培苗达到DB33/T 6352015中合格苗标准时，即可炼苗。6炼苗与移栽6.1炼苗组培苗移栽前放置于栽培环境相近的设施大棚中，遮光率80%85%，温度2528，自然光闭瓶炼苗3周4周，定期用杀菌剂消毒。杀菌液应符合GB 4285规定。6.2移栽小心取出合格组培苗，用清水洗净培养基后，用0.1%高锰酸钾溶液浸泡3分钟5分钟。晾干至根部发白，种植于由松麟、木屑、碎石等组成的基质中。基质在使用前应堆制发酵或高温灭菌处理。DB3301/T 106220183
6、7模式图铁皮石斛组织培养育苗技术模式图见附录B。DB3301/T 106220184附录A（资料性附录）铁皮石斛组织培养各生长阶段培养基激素和添加物推荐配方铁皮石斛组织培养各生长阶段培养基激素和添加物推荐配方见表A.1表 A.1铁皮石斛组织培养各生长阶段培养基激素和添加物推荐配方主要生长阶段培养基主要激素及添加物配方使用方法萌发阶段NAA（萘乙酸）0.1 mg/l1.0mg/l配制母液马铃薯50 g/l100g/l去皮打浆分化阶段NAA（萘乙酸）0.025 mg/l0.25mg/l配制母液IAA（吲哚乙酸）0.005mg/l0.05mg/l配制母液香蕉10/g/l50g/l去皮打浆壮苗与生根阶段NAA（萘乙酸）0.025 mg/l0.25mg/l配制母液IAA（吲哚乙酸）0.005mg/l0.05mg/l配制母液马铃薯10 g/l50g/l去皮打浆香蕉10 g/l50g/l去皮打浆DB3301/T 106220185
