1、ICS 11.220CCS B 41黑 龙 江 省 绥 化 市 地 方 标 准DB2312DB2312/T 0872023胚培养灭活疫苗用种鸡蛋检验技术操作规程2023-11-30 发布2024-01-01 实施绥化市市场监督管理局发 布DB2312/T 0872023I前言本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由绥化市农业农村局归口。本文件起草单位：黑龙江省百洲生物工程有限公司、明水县农业综合行政执法大队。本文件主要起草人：李山峰、张洪楠、张越、王丹、
2、王海楠、王东升。DB2312/T 08720231胚培养灭活疫苗用种鸡蛋检验技术操作规程1范围本文件规定了胚培养灭活疫苗的种鸡蛋的蛋重、蛋形、孵化率、蛋壳表面细菌含量、蛋内容物细菌含量、卵黄抗体、病原7项检验方法。本文件适用于兽用生物制品生产企业对胚培养灭活疫苗用种鸡蛋检测及质量考察。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 16550鸡新城疫诊断技术GB/T 19167传染性法氏囊病诊断技术GB/T 23197鸡传染性支气管炎
3、诊断技术NY/T 551鸡产蛋下降综合征诊断技术NY/T 772禽流感病毒 RT-PCR 检测方法SN/T 4053鸡传染性贫血检疫技术规范中华人民共和国兽药典2020 年版（三部）3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4主要技术内容4.1蛋重使用电子天平称重（精度为 0.1g），应控制在 50g70g 之间，且整齐度不大于 10g。4.2蛋形肉眼观察应为卵圆形，表面光泽无裂纹、沙皮、畸形。4.3孵化率将种蛋洗净、消毒后入孵化器孵化，温度控制在 3838.5之间，湿度控制在 65%70%之间，每 60min 翻蛋一次，孵化 5d6d，用照蛋灯逐个照检，胚胎及血管发育正常为合格，孵化率应大
4、于 90%。4.4蛋壳表面细菌含量检测每批抽检 10 枚种鸡蛋，分别用无菌棉拭子在蛋壳表面擦拭 1cm2面积后马上折断棉拭子头放入准备好的含 10ml 生理盐水的无菌瓶内，将无菌瓶放在振荡器上 200r/min 振荡 10min，在超净工作台内分别吸取 0.1ml 生理盐水，涂布于 TSA 培养基平板上，37培养 48h，统计菌落数，为消毒效果提供数据指导。4.5蛋内容物细菌含量检测每批抽检 10 枚种鸡蛋，打开蛋壳倒出蛋清和蛋黄，按 1：2 加入无菌生理盐水用无菌组织捣碎机匀DB2312/T 08720232浆，在超净工作台内分别吸取 0.1ml 生理盐水，涂布于 TSA 培养基平板上，37
5、培养 48h，统计菌落数，为产品生产过程控制以及追溯提供数据支撑。4.6卵黄抗体每批抽检 10 枚种鸡蛋，卵黄直接稀释测定法检测：在样品管中加入 0.5ml 0.9%生理盐水，再吸取0.5ml 卵黄做 1:1 稀释，混匀后即为待检卵黄样品，依照中华人民共和国兽药典2020 版三部附录血凝抑制试验方法测定，判定结果时以完全抑制 4HA 单位抗原的最高稀释度作为判定终点，卵黄中鸡新城疫、禽流感（H9 亚型）或传染性支气管炎（M41 株)的抗体效价均应小于 1：4。在卵黄直接稀释测定法检测出现跳孔或测不出抗体时，采用卵黄氯仿萃取法检测，取上述 1:1 稀释过的卵黄稀释液 0.5ml，在通风橱中加入
6、0.5ml 氯仿，震荡混匀，室温静置 30min，3000r/min 离心 5min，作为待检卵黄样品，进行 HI 抗体检测，判定结果时以完全抑制 4HA 单位抗原的最高稀释度作为判定终点，读数加 1，卵黄中鸡新城疫、禽流感（H9 亚型）或鸡传染性支气管炎（M41 株)的抗体效价均应小于1：4。4.7外源病毒检测每批抽检 10 枚种鸡蛋，打开蛋壳倒出蛋清和蛋黄，用无菌组织捣碎机匀浆，重点检测经胚垂直传播的病原体。按照 NY/T 772 的规定检测禽流感，应为阴性；按照 GB/T 16550 的规定检测鸡新城疫，应为阴性；按照 GB/T 23197 的规定检测鸡传染性支气管炎，应为阴性；按照中华人民共和国兽药典2020 版三部附录 3302 ELISA 方法检测禽白血病，应为阴性；按照中华人民共和国兽药典2020 版三部附录 3304 间接免疫荧光试验（IFA)方法检测禽网状内皮增生症，应为阴性；按照 GB/T 19167 的规定检测鸡传染性法氏囊病，应为阴性；按照 SN/T 4053 的规定检测鸡传染性贫血，应为阴性；按照 NY/T 551 的规定检测产蛋下降综合征，应为阴性。5检验记录填写检验记录，并建立检验档案，内容包括：疫苗名称、厂家、批号、生产日期、有效期、保存温度、运输方式、冰箱温度观察记录、分层观察记录以及相关检验人、复核人和检查时间，必要时可以拍照留存电子记录。
