1、辽源市地方标准DB22/T 6-2022鸡蛋粉中 8 种喹诺酮类药物残留的测定液相色谱-质谱/质谱法Determination of eight quinolones residues in egg powder by liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry 2022-12-26 发布2023-01-26 实施辽 源 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布ICS 67.050CCS B 042204DB 2204/T 62022I前言本文件按照 GB/T1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草
2、规则的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽源市食品质量安全检测中心提出，由辽源市农业农村局归口。本文件起草单位:辽源市食品质量安全检测中心、长春海关技术中心、长春市产品质量监督检验院。本文件主要起草人:张威、胡婷婷、秦培余、陈露、隋佳琪、王银月。本文件主要参编人:王振雷、姜珊、孙舒、宋清莲、李燕鹭、王岩、陆鸣、宫世平、张凤栋、姚心茹、姜爽。DB 2204/T 620221鸡蛋粉中 8 种喹诺酮类药物残留的测定液相色谱-质谱/质谱法 1 范围本文件规定了鸡蛋粉中 8 种喹诺酮类药物残留液相色谱-质谱/质谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、试
3、验步骤、试验数据处理、精密度。本文件适用于鸡蛋粉中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星、依诺沙星等 8 种喹诺酮药物的测定。本方法鸡蛋粉中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星、依诺沙星等 8 种喹诺酮药物的检出限为 1.0g/kg。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 检验原
4、理试样中的喹诺酮类药物用 2%甲酸-乙腈提取，经 QuEChERS SPE 净化管净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。5 试剂和材料除另有规定，仅用分析纯试剂。5.1 水，符合 GB/T 6682 规定的一级水。5.2 8 种喹诺酮类药物混合标准物质:恩诺沙星 CAS 号:93106-60-6、环丙沙星 CAS 号:85721-33-1、诺氟沙星 CAS 号:70458-96-7、培氟沙星 CAS 号:6159-55-3、沙拉沙星 CAS 号:98105-99-8、洛美沙星 CAS号:98079-51-7、依诺沙星 CAS 号:74011-58-8、氧氟沙星 CAS 号:82419-
5、36-1。（纯度95%）5.3 乙腈（CH3CN）:色谱纯。5.4 甲酸（HCOOH）:优级纯。5.5 甲醇（CH3OH）:色谱纯。5.6 2%甲酸-乙腈溶液:量取 2 mL 甲酸（5.4）和 98 mL 乙腈（5.3），混匀备用。DB 2204/T 6202225.7 0.1%甲酸-水溶液:量取 1 mL 甲酸（5.4）和 999 mL 水（5.1），混匀备用。5.8 0.1%甲酸-乙腈溶液:量取 1 mL 甲酸（5.4）和 999 mL 乙腈（5.3），混匀备用。5.9 0.1%甲酸-水溶液+0.1%甲酸-乙腈溶液（9+1）:量取 90 mL 0.1%甲酸-水溶液（5.7）和 10 mL
6、0.1%甲酸-乙腈溶液（5.8），混匀备用。5.10 混合标准储备液:准确量取 8 种喹诺酮类药物混合标准品（5.2）1.0 mL，用乙腈（5.3）溶解并定容于 100 mL 棕色容量瓶中，配制成浓度为 1.0 g/mL 的混合标准储备液，4 条件下可使用 3 个月。5.11 混合标准工作液:将 8 种喹诺酮类药物混合标准储备液（5.10）用乙腈（5.3）稀释，配置适用浓度的混合标准工作液。现用现配。5.12 滤膜:0.22 m，有机系。5.13 QuEChERS SPE 净化管。6 仪器设备6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配备电喷雾离子源（ESI）。6.2 天平:感量为 0.01 g 和 0
7、.0001 g。6.3 高速离心机:6000 r/min。6.4 超声波清洗机。6.5 涡旋混合器。6.6 氮吹仪。7 试验步骤7.1 提取称取 2 g（精确至 0.01 g）鸡蛋粉样品于 50 mL 具塞离心管中，加入 10 mL 2%甲酸-乙腈溶液（5.6）涡旋 30s，超声提取 10 min 后，于 6000 r/min 离心 10 min，上清液待净化。7.2 净化取上清液 2 mL 于 QuEChERS SPE 净化管（5.13）中，涡旋 30 s，于 6000 r/min 离心 5 min，取上清液 1 mL，于 40 水浴氮气吹至近干，加入 1 mL 0.1%甲酸-水溶液+0.1
8、%甲酸-乙腈溶液（9+1）（5.9）定容，超声波震荡 5 min,过 0.22 m 微孔滤膜，供 HPLC-MS/MS 测定。7.3 空白试验除不加样品外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。7.4 测定7.4.1 色谱参考条件色谱参考条件如下：a)色谱柱:C18 色谱柱，100 mm2.1mm，2m;b)流动相:A:0.1%甲酸-水溶液；B：0.1%甲酸-乙腈；梯度洗脱条件参见表 1;c)流速:0.1mL/min;d)进样量:20L;DB 2204/T 620223e)柱温:40。表 1 梯度洗脱条件时间（min）A%B%0.190102901030703035703040703045901
9、07.4.2 质谱参考条件本标准所使用的质谱参考条件如下:a)电离方式:电喷雾离子源（ESI）;b)扫描方式:正离子扫描，多反应监测（MRM）;c)电离电压:5.5 kV;d)离子源温度:550;e)气帘气压力（CUR）:10 psi;f)雾化气压力:50 psi;g)辅助气压力:50 psi;h)定性离子、定量离子、去簇电压、碰撞能量、保留时间见表 2。表 2 8 种喹诺酮类药物定性离子、定量离子、去簇电压、碰撞能量、保留时间化合物分子式分子量母离子m/z子离子m/z碰撞能量V去簇电压V保留时间min 316.1*2580恩诺沙星C19H22FN3O3359.35360.0245.13580
10、20.04 245.1*3380环丙沙星C17H18FN3O3331.34332.1288.1258017.58 318.3*2654氧氟沙星C18H20FN3O4361.37362.3261.3384816.59 302.3*2648诺氟沙星C16H18FN3O3319.33320.2276.3256616.60 290.4*2570培氟沙星C17H20FN3O3333.36334.3233.2275517.08 265.2*3170洛美沙星C17H19F2N3O3351.35352.3308.2235518.79 342.3*2460沙拉沙星C20H17F2N3O3385.36386.42
11、99.2356022.91 303.3*2450依诺沙星C15H17FN4O3320.32321.4234.1305015.20*:定量离子 注：对不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳DB 2204/T 6202247.4.3 标准工作曲线的制备将混合标准储备液（5.10）用初始流动相逐级稀释成浓度为 2.5 g/L100.0 g/L 的标准系列工作溶液，参考色谱和质谱条件测定。分别以 8 种喹诺酮类药物质量浓度为横坐标，相应的峰面积响应值为纵坐标，进行线性回归分析。7.4.4 定性分析在同一色谱-质谱/质谱条件下进行标准溶液和样品溶液的测定，如果样品溶液中检出的色
12、谱峰的保留时间与标准物质色谱峰的保留时间一致，所选择的两对子离子的质荷比也一致，而且样品定性离子的相对丰度与浓度相当标准工作溶液的定性离子的相对丰度相比较，相对偏差不超过表 3 规定的范围，则可判定样品中存在该物质。表 3 定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度50%20%-50%10%-20%10%允许的相对误差20%25%30%50%7.4.5 定量测定混合标准工作液和样液中被测组分的响应值均应在仪器线性响应范围内。外标法定量。8 试验数据处理按公式（1）计算样品中 8 种喹诺酮类药物残留含量，计算结果需扣除空白值。X=式中：X-样品中被测组分含量，单位为微克每千克（g/kg）;c-
13、被测组分溶液浓度，单位为微克每升（g/L）;V-样液最终定容体积，单位为毫升（mL）;m-样液所代表的最终样品的质量，单位为克（g）;计算结果保留三位有效数字。9 精密度9.1 重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的 15%，以大于这两个测定值的算术平均值的 95%的情况不超过 5%为前提。9.2 再现性在不同的实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的 20%，以大于这两个测定值的算术平均值的 95%的情况不超过 5%为前提。
