1、 ICS 65.150 CCS B50 43 湖南省地方标准 DB 43/T 27932023 渔业水体底泥中氯硝柳胺的测定 液相色谱-串联质谱同位素内标法 Determination of niclosamide in sediment from fishery waters by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry isotope internal standard method 2023-11-09 发布 2024-02-09 实施湖南省市场监督管理局发 布 DB 43/T 27932023 I
2、目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 方法原理.1 5 试剂与材料.1 6 仪器与设备.2 7 样品.2 8 测定步骤.3 9 结果计算与表达.4 10 方法的灵敏度、准确度、精密度.4 附录 A（资料性）氯硝柳胺选择反应监测（SRM)色谱图.6 DB 43/T 27932023 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省
3、水产科学研究所、农业农村部渔业产品质量监督检验测试中心（长沙）、衡阳市畜牧水产事务中心。本文件主要起草人：李小玲、索纹纹、陈湘艺、张光洁、刘伶俐、杨霄、万译文、肖维、曾春芳、何咏、谢仲桂、黄向荣、黄华伟、洪波、尹升福、谢玉昆、雷琴。DB 43/T 27932023 1 渔业水体底泥中氯硝柳胺的测定 液相色谱-串联质谱同位素内标法 1 范围 本文件规定了渔业水体底泥中氯硝柳胺的液相色谱-串联质谱同位素内标法测定方法。本文件适用于渔业水体底泥中氯硝柳胺的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；
4、不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 17378.5 海洋监测规范 第5部分：沉积物分析 HJ 494 水质 采样技术指导 底部沉积物采集 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法原理 底泥中的氯硝柳胺，经氨化乙腈提取，C18吸附剂净化，用带有电喷雾离子源的液相色谱串联质谱仪负离子模式测定，内标法定量。5 试剂与材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯；水应为符合GB/T 6682规定的一级水。试剂 5.1.1 乙腈（C2H3N）：色谱纯。5.1.2 氨水（NH3H2O）。溶液配制 5.2.1 2%
5、氨化乙腈溶液：取乙腈 70 mL，加入 2 mL 的氨水，用乙腈稀释定容至 100 mL。5.2.2 70%乙腈水溶液：取乙腈 70 mL，加入 30 mL 水，混匀。标准品 5.3.1 氯硝柳胺（Niclosamide，C13H8Cl2N2O4，CAS 号：50-65-7），含量96.0%。5.3.2 氯硝柳胺-13C6-水合物（Niclosamide-13C6-hydrate，13C6C7H8Cl2N2O4，CAS 号：1325808-64-7），含量99.0%。DB 43/T 27932023 2 标准溶液 5.4.1 标准储备溶液（100 g/mL）：取氯硝柳胺标准品约 10 mg，精
6、密称定，于 100 mL 棕色容量瓶中，加乙腈 10 mL，超声溶解后恢复至室温，用乙腈稀释定容至刻度，配制成浓度为 100 g/mL 的标准储备溶液。-18避光保存，有效期 3 个月。5.4.2 内标储备溶液（100 g/mL）：取氯硝柳胺-13C6-水合物标准品约 10 mg，精密称定，于 100 mL棕色容量瓶中，加乙腈 10 mL，超声溶解后恢复至室温，用乙腈稀释定容至刻度，配制成浓度为 100 g/mL的内标储备溶液。-18避光保存，有效期 3 个月。5.4.3 标准中间溶液（1.0 g/mL）：精密量取标准储备溶液 1 mL，于 100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，配
7、制成浓度为 1.0 g/mL 标准中间溶液。-18避光保存，有效期 30 天。5.4.4 混合标准工作溶液：根据需要，临用时吸取一定量的氯硝柳胺标准中间溶液和氯硝柳胺内标储备溶液，用 70%乙腈水溶液稀释配制成适当系列浓度的混合标准工作溶液，每毫升该混合标准工作溶液含有氯硝柳胺-13C6-水合物 10 ng。4避光保存，有效期 7 天。5.4.5 内标工作溶液（0.1 g/mL）：精密量取适量氯硝柳胺内标储备溶液，用乙腈配制成 0.1 g/mL 内标工作溶液。4避光保存，有效期 15 天。材料 5.5.1 C18吸附剂：粒径 40 m60 m，或相当者。5.5.2 微孔有机滤膜：0.22 m。
8、6 仪器与设备 液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源。分析天平：感量 0.01 g 和感量 0.0001 g。冷冻干燥机。涡旋混合器。高速离心机：转速8000 r/min。超声波清洗器。旋转蒸发仪。7 样品 样品采集 样品采集应符合HJ 494的要求。试样制备 将采集的底泥样品（一般不少于500 g）混匀后用四分法缩分至约100 g，将样品冷冻干燥后，剔除石块和植物体等异物，用研钵研磨后过60 目（孔径0.25 mm）网筛，混匀后装入样品袋内，在0 4 避光保存。试样含水率测定 应符合GB 17378.5的要求。DB 43/T 27932023 3 空白试样制备 选取不含氯硝柳胺的底泥样品，
9、按照7.2的方法制备。8 测定步骤 样品前处理 称取5 g（精确至0.02 g）试样于50 mL具塞离心管中，加入100 L氯硝柳胺内标工作溶液，加入2%氨化乙腈溶液20 mL，涡旋混合1 min，超声提取10 min，6000 r/min离心8 min，取上清液转移至茄形瓶中，于45下减压浓缩至近干，加入1.00 mL 70%乙腈水溶液涡旋振荡溶解残留物，再加入C18吸附剂200 mg涡旋振荡30 s，8000 r/min离心5 min，取上清液过0.22 m 微孔有机滤膜后，供液相色谱仪-串联质谱测定。测定 8.2.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：C18(1502.
10、1 mm，粒径 3 m)，或相当者；b)流动相：A 为乙腈，B 为水，梯度洗脱条件见表 1；c)进样量：10 L；d)流速：0.30 mL/min；e)柱温：35。表1 流动相梯度洗脱条件 时间 min A%B%0 50 50 2.0 50 50 3.0 90 10 6.5 90 10 6.51 50 50 7.50 50 50 8.2.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下：a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：负离子扫描；c)检测方式：选择反应监测（SRM）；d)喷雾电压：-3.0 kV；e)离子传输毛细管温度：300；f)选择反应监测定性母离子、子离子和碰撞能量见表 2。DB 43/T 2
11、7932023 4 表2 母离子、子离子和碰撞能量 目标化合物 母离子 m/z 子离子 m/z 碰撞能量 eV 氯硝柳胺 324.9 289.0a 19 171.1 28 氯硝柳胺-13C6-水合物 331.0 294.9 19 a 定量离子。8.2.3 定性测定 在相同测试条件下，试样中待测物的保留时间与标准工作液中待测物的保留时间一致，偏差在2.5%以内；且试样中待测物定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液对应的定性离子的相对丰度一致，其允许最大偏差应符合表3的要求。表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K50%20%K50%10%K20%K10%允许的相对偏差 20
12、%25%30%50%8.2.4 定量测定 按8.2.1和8.2.2设置仪器条件，将标准工作溶液、试样溶液、空白试样溶液等体积进样测定，内标法定量。标准工作溶液和试样中目标物的响应值均应在仪器检测线性范围内。氯硝柳胺的选择反应监测（SRM）色谱图参见附录A，氯硝柳胺标准溶液的选择反应监测（SRM）色谱图见附录A中图A.1，空白试样的选择反应监测（SRM）色谱图见附录A中图A.2，空白试样中添加氯硝柳胺标准溶液的选择反应监测（SRM）色谱图见附录A中图A.3。空白实验 按照与上述测定步骤相同的条件进行空白试样（见7.4）的测定。9 结果计算与表达 试样中待测物含量按下列公式计算。计算结果须扣除空白
13、值，保留两位有效数字。=(1)(1)式中：试样中待测物的含量，单位为微克每千克（g/kg）；从标准工作曲线得到的待测物溶液浓度，单位为微克每升（g/L）；试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g）；试样含水率，单位为质量分数（%）。10 方法的灵敏度、准确度、精密度 DB 43/T 27932023 5 灵敏度 本方法氯硝柳胺的检出限为0.2 g/kg；定量限为0.5 g/kg。准确度 本方法添加浓度为0.5 g/kg20 g/kg时回收率为70%120%。精密度 本方法的批内相对标准偏差10%，批间相对标准偏差15%。DB 43/T 27932023 6 A A 附录A （资料性）氯硝柳胺选择反应监测（SRM)色谱图 图A.1 氯硝柳胺标准溶液（5.00 g/L）的选择反应监测（SRM）色谱图 图A.2 空白泥样试样的选择反应监测（SRM）色谱图 DB 43/T 27932023 7 图A.3 空白试样添加样品（1 g/kg）的选择反应监测（SRM）色谱图
