1、 ICS 65.020.40 CCS B61 43 湖南省地方标准 DB 43/T 27722023 羊踯躅组培育苗技术规程 Code of practice for propogation via tissue culture of Rhododendron molle 2023-09-27 发布 2023-12-27 实施湖南省市场监督管理局发 布 DB 43/T 27722023 I 目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 缩略语.1 5 无菌苗培养.1 6 处植体处理.2 7 组织培养.2 8 炼苗.2 9 移栽育苗.3 10 档案管理.3 DB
2、 43/T 27722023 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省林业局提出。本文件由湖南省林业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省植物园、常德市鼎城区林业局。本文件主要起草人：吴林世、廖菊阳、刘艳、李巧云、谢嘉浇、李曼、宋胤、王玲、易心钰、陈婵、张娟、刘馨蕴、王亚如。DB 43/T 27722023 1 羊踯躅组培育苗技术规程 1 范围 本文件规定了羊踯躅（Rhododendron molle G.Don）组培育苗的无菌苗培
3、养、外植体处理、组织培养、炼苗、移栽育苗和档案管理等技术要求。本文件适用于羊踯躅组培育苗。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。AC：活性炭粉（Charcoal activated powder）IBA：吲哚丁酸（Indole-3-Butytrie acid）NAA：-萘乙酸（-Naphthylacetic acid）TDZ：噻苯隆（Thidiazuron）WPM：木本植物培养基（Woody Plant Madium）ZT：玉米素（Zeatin）5 无菌苗培养 种子收集 9月10月，当蒴果由青绿色转变为
4、淡黄色时采集。置于干燥通风处阴干脱粒，置于4冰箱冷藏备用。消毒灭菌 种子使用75%的酒精浸泡10 s，无菌水漂洗1次，用5%次氯酸钠进消毒5 min，2%氯化钙溶液清洗2次，无菌水清洗5次，备用。诱导发芽 种子发芽培养基WPM+TDZ1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L。培养基分装完成后应在10 h内进行湿热灭菌，灭菌调节为121，20 min。灭菌后培养基放再储存间，储存时间不超过7 d。DB 43/T 27722023 2 消毒后每瓶接种10粒种子。培养基附加6.0 g/L琼脂和30.0 g/L蔗糖，用0.1 mol/L的氢氧化钠或氯化氢调节pH值至5.45.6，培养温度为（251），
5、光照强度为1500 lx2000 lx，每日光照时数12 h。6 处植体处理 处植体制作 选取生长健壮的羊踯躅无菌苗嫩叶，除去叶梢和叶柄，并在叶片中部垂直于叶脉横切一刀，剪成边长大约为0.5 cm的正方形，备用。接种 在超净工作台上，将叶片正面朝上平放于培养基上，每瓶接种3个4个外植体，酒精灯快速灼烧瓶口一圈后密封，注明标签。7 组织培养 培养条件 培养基附加6.0 g/L琼脂和30.0 g/L蔗糖，调节pH值至5.45.6，培养温度为（251），光照强度为1500 lx2000 lx，每日光照时数12 h。初代培养 初代培养基为WPM+TDZ1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L。叶片在培
6、养基上长出大量淡黄色的椭圆形颗粒，诱导形成愈伤组织。愈伤组织培育至叶片周边生长出蓬松状、黄绿色的颗粒为宜。分化培养 分化培养基为WPM+ZT1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L。将愈伤组织切割成小块放置培养基中，诱导分化长出健壮的不定芽。不定芽颜色嫩绿，高1.5 cm2.0 cm时进行下一步培养。增殖培养 增殖培养基为WPM+ZT1.5 mg/L+NAA1.0 mg/L。丛生芽切割为0.5 cm1.0 cm的小块，转接至增殖培养基上，得到大量的丛生芽。丛生芽高2.5 cm4.0 cm时进行生根培养。生根培养 生根培养基为WPM+IBA0.5 mg/L+AC3.0 g/L。将增殖丛生苗切割成
7、单株后转接至生根培养基。8 炼苗 质量要求 植株生长健壮，株高大于2.5 cm，展叶数量大于3片，新根数量大于3条，可进行炼苗。炼苗方法 炼苗后，培养瓶开盖后放置在有散射光的温室中培养10 d15 d，室温控制在（255）。DB 43/T 27722023 3 9 移栽育苗 栽培基质 栽培基质为轻基质育苗，珍珠岩与泥炭土按体积比1：2配成基质。基质铺满50孔穴盘，单孔口径4.8 cm，深5.0 cm。用75%可湿性多菌灵粉剂1000倍液喷淋灭菌后备用。洗苗 取出已生根的组培苗，置于清水中洗净根部培养基。移栽 组培苗移栽至穴盘基质中，保持根系舒展，幼苗直立，基质覆盖住组培苗基部，稍压实。苗期管理 苗期温度控制在22 28 之间，宜用遮光度50%的黑色遮阴网覆盖，避免阳光直射，并保持周边空气流通。空气湿度控制在70%85%之间。第一片新叶完全展开时，逐步降低空气湿度，最终将空气湿度控制在50%左右。出苗规格 幼苗生长健壮、株型饱满、具有完整发达的根系、苗高15 cm以上、叶片数6片以上可后续培育。10 档案管理 应建立育苗管理档案。档案主要内容包括材料采集、培养基制备、外植体消毒、培养条件、炼苗移植及具有保存价值的照片、文字、技术路线、实验设计与实验结果等。档案管理实行专人负责，准确及时填写归档，长期保存。
