1、 ICS 65.020 CCS B61 43 湖南省地方标准 DB 43/T 24862022 灰毡毛忍冬组织培养育苗技术规程 Code of practice for propogation via tissue culture of Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.2022-12-09 发布 2023-03-9 实施湖南省市场监督管理局发 布 DB 43/T 24862022 I 目次 前言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 外植体采集.1 5 外植体处理.1 6 培养基制备.2 7 组织培养.2 8 移栽.3 9 容
2、器苗培育.3 10 苗木出圃.4 11 档案管理.4 附录 A（规范性）灰毡毛忍冬组织培养培养基配方.6 DB 43/T 24862022 III 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省林业科学院、湖南中医药研究院、江苏省中国科学院植物研究所、隆回县农业综合服务中心、金陵药业股份有限公司、溆浦县农业技术推广中心、重庆市秀山县中药材产业中心。本文件主要起草人：王湘莹、
3、王晓明、李永欣、蔡能、曾慧杰、陈艺、曾宏亮、陈雨、周融融、乔中全、王昊、冯煦、王颖、李剑、朱勇、杨美森。DB 43/T 24862022 1 灰毡毛忍冬组织培养育苗技术规程 1 范围 本文件规定了灰毡毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.）组织培养育苗技术的外植体采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、移栽、容器苗培育、苗木管理、苗木出圃、档案管理等要求。本文件适用于适用于灰毡毛忍冬组织培养育苗。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其
4、最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1000 容器育苗技术 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。毡毛忍冬 Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.为忍冬科忍冬属植物，俗称山银花、金银花。壮苗培养 strong seedling culture 将增殖的丛芽分成单芽茎段接种到壮苗培养基上，使其生长粗壮。4 外植体采集 采集时间 在34月晴天叶片表面露水干后采集外植体。外植体选择 选择生长健壮、无病虫害的35年生植株采集外植体。从当年生嫩枝上剪取带顶芽或腋芽的茎段，留
5、叶柄基部，去掉叶片。将采集的嫩枝低温保湿带回实验室，取嫩枝顶端4 cm6 cm作为外植体。5 外植体处理 清洗 DB 43/T 24862022 2 先用自来水冲洗外植体3次5次，每次5 min7 min，然后用软毛刷蘸中性洗洁精溶液轻轻刷洗，再用流水冲洗外植体至洁净。消毒 在超净台上将外植体在75%酒精浸泡10 s，无菌水冲洗2次3次，用0.1%升汞溶液（添加2滴3滴吐温80）浸没外植体5 min，无菌水冲洗4次5次，用灭菌滤纸吸干外植体表面水分。6 培养基制备 培养基配方 初代培养基、继代培养基、壮苗培养基与生根培养基的配方见规范性附录A。培养基配制、灭菌与保存 参照LY/T 1882执行
6、。7 组织培养 培养条件 培养温度为25 2，每天光照时间为12 h，光照强度为1 500 lx2 000 lx。初代培养 将灭菌的外植体切成长1.5 cm2.5 cm带腋芽的小茎段，接种在初代培养基上，培养30 d左右。继代培养 7.3.1 初代转接 将初代培养诱导的萌芽切成长2.0 cm2.5 cm的茎段，接种在继代培养基上。7.3.2 继代转接 将继代培养增殖的丛生芽按2个3个芽为一个单位分开，切去基部褐变的愈伤组织，接种在新的继代培养基上。7.3.3 继代周期 每隔25 d30 d将继代苗转接到新的继代培养基，继代培养控制在16代内。7.3.4 增殖材料更新 增殖材料继代培养超过16代
7、或出现退化导致苗细弱时，重新采集外植体更新繁殖材料。壮苗培养 将长2.0 cm2.5 cm的继代苗接种在壮苗培养基上。生根培养 DB 43/T 24862022 3 7.5.1 生根接种 从壮苗培养的组培苗中挑选高2.5 cm4.0 cm的健壮苗，分割成单株后转接在生根培养基上进行生根培养。7.5.2 生根周期 生根培养25 d30 d后，待长出完整的根系后炼苗移栽。炼苗 当组培苗根长度达到1.0 cm1.5 cm时进行炼苗，将组培瓶苗移到温室大棚。炼苗温度控制1530，自然光下闭口炼苗7 d10 d，敞口炼苗5 d7 d。8 移栽 容器 选用穴盘或底部有孔的育苗盘。基质 基质为泥炭土：珍珠岩
8、=7：3（体积比）。时间 在春季、初夏和秋季时移栽。移栽方法 从培养瓶中取出炼苗后的生根苗，清水洗净根部培养基。在58%瑞毒霉锰锌可湿性粉剂1000倍溶液中浸泡3 min4 min，取出后移栽在盛有基质的移栽容器中，用该瑞毒霉锰锌溶液淋透移栽基质。移栽苗管理 将移栽的组培苗置于有自动喷雾设备的塑料大棚中，覆盖遮光率85%的遮阳网，开启自动喷雾设备。每隔10 d15 d用58%瑞毒霉锰锌可湿性粉剂800倍溶液喷洒1次。移栽50 d60 d后将成活的组培苗栽植在育苗容器中，进行容器苗培育。9 容器苗培育 容器 选用塑料营养杯，规格9 cm9 cm 或10 cm10 cm。基质 基质为泥炭土：珍珠岩
9、=8：2（体积比）。基质消毒 栽植组培苗前1 d2 d，用70%甲基托布津或75%百菌清或58%甲霜锰锌1000倍液淋透基质。DB 43/T 24862022 4 栽植方法 在育苗容器中装填约1/2的基质，将组培苗栽植在育苗容器中，加满基质，淋足定根水。苗木管理 9.5.1 光照控制 组培苗栽植在育苗容器后置于遮光率85%的遮阳棚内。栽植后30 d，选择阴天，揭去遮阳网。9.5.2 水分管理 根据基质的干湿情况适时浇水或喷水，保持基质湿润。9.5.3 施肥 每隔15 d20 d用氮磷钾（N20-P20-K20）或（N25-P10-K20）水溶性肥600倍800倍溶液浇苗1次。9.5.4 打顶摘
10、心 当苗木顶梢开始弯曲，应及时在弯曲处打顶摘心。9.5.5 病虫害防治 每隔15 d20 d喷施75%百菌清800倍液与25克/升溴氰菊酯乳油2000倍混合溶液。9.5.6 除草 参照LY/T 1000执行。10 苗木出圃 苗木质量分级 合格容器苗分为级、级苗，质量分级指标见表1。表1 灰毡毛忍冬组培容器苗质量分级指标 苗龄(月)I级苗 II级苗 综合控制指标 苗高(cm)地径(cm)苗高(cm)地径(cm)12 40.0 0.50 30.0 0.40 根系完整和发达，生长健壮，叶色正苗木检验 容器苗出圃应进行质量检验，检验方法和检测规则按GB6001规定执行。苗木出圃 按GB 6001规定执
11、行。11 档案管理 DB 43/T 24862022 5 应详细记录组织培养育苗全过程，建立完整、真实的技术档案资料，包括外植体采集与处理情况、组织培养和容器育苗技术措施、苗木管理、各项作业的用工量和原材料消耗等。DB 43/T 24862022 6 A A 附录A （规范性）灰毡毛忍冬组织培养培养基配方 表A.1 灰毡毛忍冬组织培养培养基配方 培养基成分类别 培养基成分 初代培养基 mg/L 继代培养基 mg/L 壮苗培养基 mg/L 生根培养基 mg/L 大量元素 NH4NO3 1650 825 825 825 KNO3 1900 0 0 950 MgSO4 7H2O 370 185 18
12、5 185 KH2PO4 170 85 85 85 CaCl2 2H2O 400 220 220 220 铁盐 FeSO4 7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 Na2-EDTA 37.3 37.3 37.3 37.3 微量元素 MnSO4 4H2O 22.3 22.3 22.3 22.3 ZnSO4 7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 CuSO4 5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 Na2 MoO4 2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 CoC12 6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 KI 0.83 0.83 0.83
13、 0.83 H3BO3 6.2 6.2 6.2 6.2 有机营养成分 烟酸 0.5 0.5 0.5 0.5 盐酸硫胺素 0.1 0.1 0.1 0.1 盐酸吡哆醇 0.5 0.5 0.5 0.5 甘氨酸 2.0 2.0 2.0 2.0 肌醇 100 100 100 100 防褐变剂 抗坏血酸 10 10 10 10 植物生长 调节物质 6-苄氨基嘌呤 1.0 0.51.0 0.5 吲哚丁酸 0.1 3.0 萘乙酸 0.1 0.050.1 糖 蔗糖 30 000 30 000 30 000 30 000 凝固剂 琼脂 7 000 7 000 7 000 7 000 附加物 活性炭 200 其它 生物素D 1.0 0.5 pH值 5.8 5.8 5.8 5.8
