1、43DB43/T 21752021 湖南省地方标准辣椒远缘杂交胚拯救技术操作规程Technical Regulation for embryo rescue of Distant Hybrid in PepperICSCCS 67.080.20B 31发 布湖南省市场监督管理局2021-08发布-292021-10实施-29DB43/T 21752021 I 目 次前言 1 范围 12 术语和定义 13 试剂和设备 14 胚拯救培养基制备 25胚拯救技术流程 2附录 A（资料性）辣椒胚拯救培养基配方 3DB43/T 21752021II DB43/T 21752021 III 前言本文件按照
2、GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件主要起草单位：湖南农业大学、湖南省蔬菜研究所。本文件主要起草人：杨博智、周书栋、郑井元、马艳青、戴雄泽、李雪峰、张竹青、陈文超、杨莎、梁成亮、李鑫、邹学校。DB43/T 21752021IV DB43/T 21752021 1 辣椒远缘杂交胚拯救技术规程1 范围 本文件规定了辣椒远缘杂交胚拯救的术语和定义、试剂和设备、培养基制备、胚拯救技术流程等操作规程。
3、本文件适用于辣椒远缘杂交胚拯救。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。2.1 远缘杂交 指不同种、属或亲缘关系更远的植物类型间进行的杂交。2.2 胚拯救 植物远缘杂交获得的合子胚常在发育早起阶段就败育或退化，无法收获杂交种子。胚拯救指采用组织培养技术，将合子胚转至适合的培养基中离体培养，使其能正常发育成完整植株的方式。3 试剂和设备 3.1 试剂 所有试剂等级均为分析纯，见表 1。表 1 辣椒远缘杂交胚拯救技术所需试剂试剂 名称 无机试剂 次氯酸钠、氢氧化钠、盐酸、硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、七水硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硼酸、四水硫酸锰、七水硫酸锌、钼酸钠、氯化钴、硫酸亚铁、EDTA 二
4、钠盐、有机试剂 酒精、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、叶酸、生物素 植物生长调节剂 萘乙酸、激动素、赤霉素、6-苄氨基腺嘌呤、吲哚-3-乙酸 其他 琼脂粉、蔗糖 3.2 仪器设备 超纯水仪、电子分析天平（精确度：0.0001 g）、pH 计（或 pH 试纸）、刻度容量瓶（量程分别为 100 mL、500 mL）、移液枪（量程分别为 100 L、1 mL、10 mL）、低温冷藏冰箱（温度范围：010）、高压蒸汽灭菌锅 DB43/T 217520212 4 胚拯救培养基制备 4.1 培养基类型 培养基包括胚拯救培养基和幼胚分化成苗培养基，其配方见附录 A。4.2 消毒和灭菌 培养基配制
5、好后，调 pH 值为 5.8，置于高压蒸汽灭菌锅中 121，1.05 kg/cm2条件下灭菌 15 min。5 胚拯救技术流程 5.1 授粉 收集父本花粉，选取母本植株上将开未开的花苞，去除雄蕊，对其进行人工授粉，授粉 24 h 后用75 mg/L 的 2,4-D 溶液涂抹母本植株上授粉花苞的花梗。5.2 幼胚培养 选用辣椒为授粉后 18 d 获得的青果，流水下冲洗果实表面 30 s，在超净工作台中，用 75酒精棉球擦拭果实表面，用消毒后的解剖刀将果实竖切成两半，再用无菌镊子取出果实内未成熟种胚，接种至胚拯救培养基中，黑暗培养至胚根产生。培养温度为（281）。5.3 幼胚分化成苗 在超净工作台
6、中，取出带胚根的辣椒胚，剥离种皮，接种于幼胚分化成苗培养基中培养至成苗。培养条件为光照阶段（281），黑暗阶段（201），光照时间 16 h/d，光照强度 2000 lx。5.4 炼苗与移栽 待再生苗长至（47）片真叶时，打开培养瓶瓶盖，置光照培养室中适应外界环境 2 d3d 后。将组培苗取出，洗净根部的培养基，移栽至基质中黑暗条件下炼苗，温度为（281），湿度 90。炼苗 5 d 后，将室内环境逐步调整到与辣椒苗在外界生长的环境相近，继续培养 15 d，移栽幼苗至室外。DB43/T 21752021 3 附 录 A（资料性）辣椒胚拯救培养基配方培养基名称 配方成分 胚拯救培养基 825 mg
7、/L 硝酸铵、950 mg/L 硝酸钾、220 mg/L 氯化钙、185 mg/L 七水硫酸镁、85 mg/L 磷酸二氢钾、0.5 mg/L 碘化钾、6.2 mg/L 硼酸、22.3 mg/L 四水硫酸锰、8.6 mg/L 七水硫酸锌、0.25 mg/L 钼酸钠、0.025 mg/L 氯化钴、27.8 mg/L 硫酸亚铁、37.8 mg/L EDTA 二钠盐、100 mg/L 肌醇、0.5 mg/L 烟酸、0.5 mg/L 盐酸吡哆醇、0.5 mg/L 盐酸硫胺素、2 mg/L 甘氨酸、0.5 mg/L 叶酸、0.05 mg/L 生物素、0.05 mg/L a-萘乙酸、0.25 mg/L 激动
8、素、0.2 mg/L 赤霉素、6 g/L 琼脂粉、30 g/L 蔗糖 幼胚分化成苗培养基 1650 mg/L 硝酸铵、1900 mg/L 硝酸钾、440 mg/L 氯化钙、370 mg/L 七水硫酸镁、170 mg/L磷酸二氢钾、0.83 m/Lg 碘化钾、6.2 mg/L 硼酸、22.3 mg/L 四水硫酸锰、8.6 mg/L 七水硫酸锌、0.25 m/Lg 钼酸钠、0.025 mg/L 硫酸铜、0.025 mg/L 氯化钴、27.8 mg/L 硫酸亚铁、37.3 mg/L EDTA 二钠盐、100 mg/L 肌醇、0.5 mg/L 烟酸、0.5 mg/L 盐酸吡哆醇、0.1 mg/L 盐酸硫胺素、2.0 mg/L 甘氨酸、2 mg/L 6-氨基腺嘌呤、0.5 mg/L 吲哚乙酸、6 g/L 琼脂粉、30 g/L 蔗糖
