1、 ICS 65.020.20 CCS B 05 41 河南省地方标准 DB 41/T 26072024 蓝莓组培快繁技术规程 2024-02-01 发布 2024-05-01 实施 河南省市场监督管理局 发 布 DB 41/T 26072024 I 目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 培养基的选择与改良.1 5 外植体的选择与接种.2 6 苗木培养.2 7 炼苗与移栽.3 附录 A（资料性）改良 WPM 培养基配方.4 DB 41/T 26072024 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则
2、的规定起草。本文件由河南省林业局提出并归口。本文件起草单位：平顶山市农业科学院 鲁山县瑞祥种植农民专业合作社 平顶山市农业农村局 平顶山市林业局 内黄县林业发展中心。本文件主要起草人：周威、曹秀敏、梁建、张佳伟、姬书惠、余祖运、许俊国、岳高飞、曹青军、栗苗苗、张九林、李蕴莹、王新兰、郭克歌、冯晓艺、蒋钦群、肖婉露、法丹丹。DB 41/T 26072024 1 蓝莓组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了蓝莓苗组培快繁过程中培养基的选择与改良、外植体的选择及接种、苗木培养、炼苗与移栽等。本文件适用于河南省蓝莓组培种苗的繁育。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语和定义 本文件没有
3、需要界定的术语和定义。4 培养基的选择与改良 WPM 培养基的改良 将WPM培养中的K2SO4、CaCL2、FeSO4、Na2EDTA改成 KNO3（190 mg/L）、Ca(NO3)2.4H2O（684 mg/L）、C10H13FeN2NaO8（73.4 mg/L）。改良 WPM 培养基的母液配制 将改良WPM培养基的化学成份按附录A所示的五大类分别用蒸馏水溶解后，配制成质量比为1:20、1:100、1:200、1:200、1:200的母液，装入广口瓶，母液配制宜使用蒸馏水或去离子水。分别贴上标签、标注名称、配制倍数和日期，置于2 4 冰箱保存，铁盐应存放在棕色容器中。激素的母液配制 将实验
4、所需的玉米素(zeatin，ZT)、萘乙酸(1-naphtahaleneacetin acid，NAA)、吲哚丁酸(indole-3-butyric，IBA)用1 mol/L的HCl或95酒精溶解，再用蒸馏水稀释后分别配制成100 mg/L的母液，装入棕色广口瓶中，置于2 4 冰箱保存。配制培养基 4.4.1 溶解琼脂、糖 按所需容量的70加蒸馏水，再加入0.65的琼脂，加热搅拌融化琼脂。琼脂融化后，加入3蔗糖，稍加热使其溶解。4.4.2 添加母液 糖溶解后，按培养基的配方及所需数量，依次加入改良WPM培养基母液和激素母液，并充分搅拌。DB 41/T 26072024 2 4.4.3 定容、调
5、 pH 值 搅拌均匀后，加蒸馏水定容至所需体积。再充分搅拌，用0.1 mol/L的盐酸或0.1 mol/L的氢氧化钠调节pH至5.20.1。芽诱导培养基：改良WPMZT 5.0 mg/L蔗糖30 g/L+琼脂粉6.5 g/L。增殖培养基：改良WPMZT 1.0 mg/LIBA 0.1 mg/L蔗糖30 g/L+琼脂粉6.5 g/L。生根培养基：1/2改良 WPMIBA 0.1 mg/L蔗糖25 g/L，琼脂粉6.5 g/L。以上三种培养基，pH值均为5.20.1。5 外植体的选择与接种 外植体的选择 5.1.1 取材时间和部位 取材应于春、秋两季蓝莓生长的旺盛时期，在晴朗的上午或午后没有露水时
6、取材，避免低温阴雨天气取材。从具有品种典型性状的健康植株上选择长势旺盛、生长健壮、带有35个完整叶片的新生枝条，装入洁净的塑料袋封口带回实验室，2 4 冰箱保湿存放，所取材料2 d内使用完毕。5.1.2 外植体预处理 用剪刀将嫩枝上的叶片剪下，用洗涤剂刷洗后，经自来水冲洗30 min40 min，无菌滤纸吸干水分备用。外植体的消毒与接种 在用酒精消毒过的超净工作台面上，将清洗后的叶片一起先放入75乙醇溶液中振荡浸润30 s40 s，无菌水冲洗4次，无菌滤纸吸干水分后，用0.1的升汞消毒6 min8 min，再用无菌水冲洗5次6次，无菌滤纸吸干水分备用。将已消毒的幼嫩叶片置于无菌滤纸上，把叶片切
7、成1 cm见方的小块，接种到灭菌过的诱导培养基中，每瓶接种34个材料，向下稍微按压，让切口充分接触培养基。6 苗木培养 芽诱导培养及方法 将外植体叶片接种到灭菌过的芽诱导培养基中培养，培养温度为25 2，光照强度60 molm-2s-1100molm-2s-1、光照时间12 h/d16 h/d，初代诱导培养时间一般为3周5周。为最大限度保持母本特性,宜以直接诱导不定芽为主。增殖培养及方法 诱导培养3周5周后，产生大量丛生芽。继续培养，当苗高5 cm6 cm时剪取丛生苗，截成2.0 cm3.0 cm长的茎段，接种在增殖培养基中培养，培养温度为25 2、光照强度60molm-2s-1100 mol
8、m-2s-1、光照时间12 h/d16 h/d。培养时间一般为4周6周。继代增殖代数宜控制在1015代，增值系数2.54.0。生根培养及方法 DB 41/T 26072024 3 增殖培养3周4周后，苗子长到4 cm5 cm高时，剪取健壮一致的丛生苗接种到生根培养基上培养，培养温度为25 2、光照强度度60 molm-2 s-1100 molm-2 s-1、光照时间12 h/d16 h/d。经3周4周培养，苗子长到6 cm8 cm高，基部长出35条1 cm2 cm长的根时，即可进行炼苗移栽。7 炼苗与移栽 组培苗炼苗 炼苗时，选取具有该品种特征特性、生长健壮、叶色正常、根、茎、叶俱全的完整植株
9、进行炼苗。首先将培养瓶放置在有散射光（60 molm-2 s-1100 molm-2 s-1）的大棚或温室中，温度控制在25 2，封口培养5 d7 d后，再开口培养3 d4 d。炼苗前10 d，检修大棚或温室，覆盖棚膜，并在裙膜下面放风口的位置固定4050目白色防虫网，同时准备和棚膜大小相同的2针遮阳网，密闭棚室，用百菌清烟剂熏棚消毒。组培苗移栽 7.2.1 基质选择与配制 基质一般由泥碳土、珍珠岩、蛭石按3：1：1 的比例混合而成，或用粗粒蛭石与沙以3:1的比例混合，装入50孔黑色PS标准穴盘，并稍压紧，用0.5 g/L的多菌灵（80可湿性粉剂）溶液喷透备用。7.2.2 移栽 将洗干净的组培
10、苗栽入事先装好基质的穴盘中，轻轻覆盖根部、稍作按压，幼苗不倒即可。待整个穴盘栽满后用600倍的百菌清或多菌灵喷雾或作定根水浇灌，最后将穴盘苗分品种、移栽日期，在苗床上整齐摆放，盖薄膜保湿培养。DB 41/T 26072024 4 A A 附录A （资料性）改良 WPM 培养基配方 改良WPM培养基配方参照表A.1。表A.1 改良 WPM 培养基配方 名称 成分 含量(mg/L)大量 KNO3 190 MgS04.7H20 370 KH2P04 170 NH4N03 400 微量 MnS04.H20 22.5 ZnS04.7H20 8.6 CuSO4.5H20 0.25 Na2Mo04.2H20 0.25 钙盐 Ca(N03)2.4H20 684 铁盐 C10H13FeN2NaO8 73.4 有机物 肌醇 100 甘氨酸 2.0 VB1 0.1 VB6 0.5 烟酸 0.5
