1、ICS 67.120.10CCSB 40DB36江 西 省 地 方 标 准 化 指 导 性 技 术 文 件DB36/Z 0022022动物源性食品中金刚烷胺的检测量子点微球荧光免疫层析法Determination of amantadine residue in animal derived food Quantum dot microsphere lateral flow immunoassay2022-12-06 发布2022-12-06 实施江西省市场监督管理局发 布DB36/Z 0022022I目 次前 言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14原理.15试剂和材料.16
2、仪器和设备.27试样制备.28测定步骤.29结果表述.310其他.3DB36/Z 0022022II前 言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江西省市场监督管理局提出并归口。本文件起草单位：南昌大学、江西省市场监督管理局、江西省检验检测认证总院、江西维邦生物科技有限公司。本文件主要起草人：赖卫华、龚启亮、郭平、余颐、彭娟、张威、熊华亮、熊勇华、陈媛、刘文娟、罗凯、李响敏、黄小林、唐丽君、张干、舒馨潓、翟文莉、程昱、熊佳、卢俊。DB36/Z 00220
3、221动物源性食品中金刚烷胺的检测 量子点微球荧光免疫层析法1范围本文件规定了动物源性食品中金刚烷胺残留量的量子点微球荧光免疫层析检测方法。本文件适用于鸡肉、鸡蛋和猪肉中金刚烷胺的快速检测。本方法检测金刚烷胺的检出限为0.1 g/kg，定量限为0.3 g/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB 31660.5食品安全国家标准 动物性食品中金刚烷胺残留量的测定液相色谱-串联质谱法3术语和定义本文件没有需要界
4、定的术语和定义。4原理本方法以量子点微球为荧光标记物，基于竞争抑制免疫层析技术原理，通过荧光免疫分析仪进行数据读取和分析，根据已设定的标准曲线计算样品中待测物质的含量，对动物源性食品中金刚烷胺进行定量检测。5试剂和材料除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。5.1乙酸乙酯(CH3COOC2H5)。5.2正己烷(C6H14)。5.3二水合磷酸二氢钠（NaH2PO42H2O）。5.4十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）。5.5氯化钠（NaCl）。5.6磷酸二氢钾（KH2PO4）。5.7氯化钾（KCl）。5.8盐酸（HCl）。5.9氢氧化钠（NaOH）。
5、5.10试样提取剂 A：称取 8.0 g 氯化钠（5.5）、0.2 g 磷酸二氢钾（5.6）、0.2 g 氯化钾（5.7）、2.9 g十二水合磷酸氢二钠（5.4），加入约 500 mL 水溶解，再加入盐酸（5.8）溶液 0.5 mL，加水定容至 1 L。DB36/Z 002202225.11试样提取剂 B：称取 20.0 g 氢氧化钠（5.9），加入约 900 mL 水溶解混匀，定容至 1 L。5.12试样复溶液磷酸盐缓冲液（10 mmol/L，pH 7.0）：称取 8.0 g 氯化钠（5.5）、2.77 g 十二水合磷酸氢二钠（5.4）、0.352 g 二水合磷酸二氢钠（5.3），用水溶解并
6、定容至 1 L。6仪器和设备6.1分析天平：感量为 0.01 g。6.2微量移液器：20L200 L、100L1000 L 和 1mL10 mL。6.3旋涡混合器：转速2500 r/min。6.4恒温孵育器：设定孵育温度为 37，误差不超过1。6.5荧光免疫分析仪：激发波长为 365nm5 nm，发射波长为 610nm5 nm。6.6样品浓缩仪：设定温度误差不超过1。6.7均质机：转速5000 r/min。6.8离心机：转速4000 r/min。6.9离心管：10 mL 和 50 mL。6.10金刚烷胺量子点微球免疫层析包装盒：含量子点微球免疫层析试纸条和标准曲线内置卡（ID 卡），ID 卡内
7、设对应批次标准曲线。7试样制备7.1试样制备称取约 200 g 具有代表性的组织或禽蛋（去壳）样品，充分均质混匀，均分成两份分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记。留样置于-20保存。7.2试样前处理7.2.1准确称取试样 2 g（精确至 0.01 g）于 50 mL 离心管中。7.2.2加入 2 mL 试样提取剂 A（5.10），涡旋振荡 2 min，加入 1 mL 试样提取剂 B（5.11），涡旋振荡 30 s，最后准确加入 4 mL 乙酸乙酯（5.1），手动振荡混匀 30 s，使用离心机（6.8）4000 rpm 离心2min 或静置 5min 待溶液分层。7.2.3准确吸取 2 m
8、L 上清液于 10 mL 离心管中，于 65用样品浓缩仪（6.6）吹干。7.2.4加入 1 mL 正己烷（5.2），漩涡振荡混匀 10 s，加入 500 L 试样复溶液（5.12），轻轻颠倒混匀，确保离心管壁上的残留均能被试样复溶液混匀（请勿振荡）。7.2.5静置 1 min，溶液分层后下层液体为待测液。注：不同厂家量子点微球免疫层析试纸条所用的样品前处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进行操作。8测定步骤8.1测试前打开荧光免疫分析仪（6.5），确认包装盒中的 ID 卡与产品批号是否匹配，插入 ID 卡，在仪器测试界面点击“读卡/读项目”，界面出现“读取完成”，点击“确认”即可使用
9、。8.2将恒温孵育器（6.4）开机，待温度升至 37即可使用。8.3从密封包装袋中取出金刚烷胺量子点微球免疫层析试纸条，在 30 min 内使用。DB36/Z 002202238.4将试纸条平放，用微量移液器吸取 90 L 待测液于量子点微球免疫层析试纸条的加样孔（S）中，在恒温孵育器中 37孵育反应 10 min。8.5反应时间结束后立即将金刚烷胺量子点微球免疫层析试纸条插入荧光免疫分析仪中，点击仪器界面的“测试”，仪器会自动给出定量测试结果，15 min 内测试，结果有效。注：不同厂家荧光免疫分析仪所用仪器界面设置可能不同，应按照仪器使用说明中规定方法进行。9结果表述试样中金刚烷胺的含量由荧光免疫分析仪自动计算并显示，单位为微克/千克（g/kg）。10其他10.1注意事项：使用前请仔细阅读说明书，仪器的具体操作详见仪器操作说明书；检测卡为一次性使用，检测时请勿触摸检测卡结果显示区，并避免阳光直射和电风扇直吹；请勿使用自来水、蒸馏水或去离子水作为阴性对照；结果的确证需要使用国家规定的参比标准方法进行。10.2本方法参比标准方法按照 GB 31660.5 的规定执行。
