1、ICS 07.080 CCS A 40 DB36 江西省地方标准 DB36/T 16622022 量子点微球免疫层析试纸条评价技术规范 Technology specification for the evaluation of quantum dot microsphere lateral flow immunoassay test strip 2022-10-25 发布 2023-05-01 实施 江西省市场监督管理局 发 布 DB36/T 16622022 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 通用要求.2 5 评价指标.2 6 结果报告
2、.3 附录 A（资料性附录）评价指标计算方法.4 DB36/T 16622022 II 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江西省市场监督管理局提出并归口。本文件起草单位：南昌大学、江西省市场监督管理局、江西省检验检测认证总院、江西维邦生物科技有限公司。本文件主要起草人：赖卫华、郭平、余颐、熊勇华、张威、熊华亮、陈媛、刘文娟、罗凯、李响敏、彭娟、黄小林、吴仁伟、梅溪。DB36/T 16622022 1 量子点微球免疫层析试纸条评价技术规范 1
3、 范围 本文件规定了量子点微球免疫层析试纸条评价的术语和定义、通用要求、评价指标和结果报告。本文件适用于量子点微球免疫层析试纸条的技术评价。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。RB/T 214 检验检测机构资质认定能力评价 检验检测机构通用要求 SN/T 2775 商品化食品检测试剂盒评价方法 DB36/T 1335 食品快速检测盲样制备通用技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 量子点微球免疫层析试纸条 quantum dot m
4、icrosphere lateral flow immunoassay test strip 以量子点微球为荧光标记物，基于免疫层析技术原理制备，通过荧光信号读取仪进行数据读取和分析，对目标分析物进行半定量或定量检测的免疫层析试纸条。3.2 基质 matrix 样品中除目标分析物以外的一切组成。3.3 标准物质 reference material 具有一种或多种足够均匀和很好地确定了特性的，用以校准装置、评价测量方法或给材料赋值的一 种材料或物质。本文件所涉及到的标准物质主要是相关化学物质的有证标准品。3.4 参比方法 reference method 经过全面、系统研究，清楚而严密地描述所
5、需条件和程序，用于对目标分析物一种或多种特征值进行检测的方法，该方法已经证明具有与预期用途相称的准确度及其它性能。DB36/T 16622022 2 3.5 检出限 limit of detection 在给定的置信水平上，样品中的目标分析物能被可靠地与噪音背景区分的最低浓度或含量。3.6 定量限 limit of quantitation 样品中的目标分析物在一个可接受的精密度与准确度水平上能被定量检测的最低浓度或含量。3.7 准确度 accuracy 测试结果与接收参照值间的一致程度。3.8 重复性 repeatability 在同一实验室,由同一操作者使用相同的设备,按相同的测试方法,在
6、短时间内对同一被测对象相互独立进行的测试条件下的精密度。3.9 交叉反应率 cross reaction rate 目标分析物的结构类似物与检测抗体发生的免疫学反应称为交叉反应，目标分析物的IC50（半抑制浓度）与结构类似物的IC50的比值称为交叉反应率。3.10 关注浓度水平 level of interest 对判断样品中目标分析物是否符合法规规定和要求的有决定性意义的浓度。4 通用要求 4.1 实施机构要求 实施机构应具备检验检测机构资质，评价试验的人员、场所环境、设备和设施及日常运行等应符合RB/T 214的相关规定，并具备开展快速检测产品评价所涉及参比方法的能力。4.2 试样制备要求
7、 试样制备要求应符合DB36/T 1335的相关规定，并按照具体评价项目选择相应标准方法制备试样。5 评价指标 5.1 产品包装 DB36/T 16622022 3 产品包装应符合SN/T 2775的相关规定。5.2 检出限 20 份空白样品测定均值加 3 倍标准偏差。5.3 定量限 20份空白样品测定均值加10倍标准偏差。5.4 准确度 根据目标分析物国家标准限量值或禁用目标分析物的参比方法定量限等因素，确定低、中、高三个关注浓度。制备低、中、高三个浓度水平的盲样，每个浓度水平进行6次重复实验。计算3个浓度水平的加标回收率。5.5 重复性 计算5.4中所得三个浓度水平实验数据的相对标准偏差。
8、5.6 特异性 根据检测目标分析物及其结构类似物的交叉反应率判断，交叉反应率小则特异性强。5.7 假阳性率 在实验条件下达到定量限时，将阴性结果判断为阳性的最大概率。5.8 假阴性率 在实验条件下达到定量限时，将阳性结果判断为阴性的最大概率。5.9 与参比方法一致性 与参比方法一致性分析可采用卡方检验，必要时也可采用t检验等。6 结果报告 结果报告应包含量子点微球免疫层析试纸条产品评价测试项目、样品基质信息及评价指标结果，其中评价结果应包含产品外观和说明书情况、检出限、定量限、准确度、重复性、特异性、假阳性率、假阴性率以及与参比方法一致性等指标。评价指标计算方法见附录 A。DB36/T 166
9、22022 4 A 附 录 A（资料性附录）评价指标计算方法 A.1 实验典型类型 A.1.1 空白样品 选取20个空白样品，用于评价检出限和定量限。A.1.2 盲样 可采用有证标准物质、参考物质或者质量控制品等，也可采用自行加标制备的样品。A.1.3 标准曲线 根据实际情况，使用试剂或基质溶液配制系列标准工作液，浓度范围应涵盖关注浓度。A.1.4 空白试验 除不加试样外，按产品说明书或评价作业指导书等资料进行测定。A.2 评价指标计算 A.2.1 检出限和定量限 通过对20个独立的空白样品进行测定，检出限以空白样品20次测定结果的均值加3倍标准偏差计算；定量限以空白样品20次测定结果的均值加
10、10倍标准偏差计算。A.2.2 准确度 综合考虑关注浓度（目标分析物国家标准限量值或禁用目标分析物的参比方法定量限），制备低、中、高三个浓度水平的盲样，每个浓度水平进行至少6次重复实验。浓度水平一般应包括国家标准限量值的0.5、1、2倍水平或禁用目标分析物的参比方法定量限的1、2、4倍水平。A.2.3 重复性 根据A.2.2准确度实验中的数据，计算三个浓度水平实验数据的相对标准偏差。A.2.4 特异性 目标分析物及其结构类似物的标准品用缓冲液配制成系列梯度浓度，做出标准曲线，得出IC50（半抑制浓度）后按照式（1）计算交叉反应率。交叉反应率%=IC50目标分析物IC50(目标分析物的结构类似物
11、)100（1）A.2.5 假阳性率 在实验条件下达到的实际最低检出水平时，将阴性结果判断为阳性的最大概率（至少50个阴性样本，以百分比计）。A.2.6 假阴性率 DB36/T 16622022 5 在实验条件下达到的实际最低检出水平时，将阳性结果判断为阴性的最大概率（至少50个阳性样本，以百分比计）。A.2.7 与参比方法一致性（卡方检验）A.2.7.1 综合考虑关注浓度（目标分析物国家标准限量值或禁用目标分析物的参比方法定量限），制备低、中、高三个浓度水平的盲样。浓度水平一般应包括国家标准限量值的0.5、1、2倍水平或禁用目标分析物的参比方法定量限的1、2、4倍水平。取三个浓度水平和阴性盲样
12、（各5个，共20个），分别用量子点微球免疫层析试纸条和参比方法进行检测，与参比方法一致性分析统计方法可采用卡方（2）检验，按照式（2）进行计算。2=(|1)2+（2）式中：C样品被快检方法证实为阳性而参比方法检验为阴性的数目；B样品被快检方法证实为阴性而参比方法检验为阳性的数目。A.2.7.2 卡方（2）检验结果按以下方法进行分析：23.84，表示快检方法与参比方法的阳性确证比率在 95%的置信区间内没有显著性差异；23.84，表示两种方法的阳性确认比率在 95%的置信区间内有显著性差异；如果能够证实快检方法比参比方法存在更高的回收率或灵敏度，则以上两种方法的阳性确证比率存在显著性差异是可以接受的。_
