1、 ICS 67.050 CCS X 04 34 安徽省地方标准 DB34/T 43352022 芽菜类蔬菜中喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法 Determination of quinolones residues in sprout vegetables by HPLC-MS/MS method 2022-10-26 发布 2022-11-26 实施安徽省市场监督管理局 发 布DB34/T 43352022 I 前言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别
2、专利的责任。本文件由安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会提出。本文件由安徽省市场监督管理局归口。本文件起草单位：安徽省食品药品检验研究院（国家农副加工食品质量监督检验中心）、安徽省产品质量监督检验研究院、合肥工业大学食品与生物工程学院、安徽拓维检测服务有限公司、安徽省食品微生物发酵与功能应用工程实验室、食品营养与安全研究中心。本文件主要起草人：李静、娄鹏祥、邓小芳、李建华、张安、张居舟、刘毅、余晓娟、程潇、谭炜、杨志才。DB34/T 43352022 2 芽菜类蔬菜中喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了芽菜类蔬菜中喹诺酮类药物残留量的液相色谱-质谱/质
3、谱的测定方法。本文件适用于黄豆芽、绿豆芽、黑豆芽、红豆芽、豌豆芽等芽菜中吡哌酸、麻保沙星、依诺沙星、氟罗沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、奥比沙星、加替沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星、莫西沙星、吉米沙星、巴洛沙星、妥苏沙星、西诺沙星、噁喹酸、萘啶酸、氟甲喹残留量的测定。芽菜类蔬菜中甲硝唑和羟基甲硝唑残留量的测定可按照本文件执行。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品
4、安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理 样品均质后经 0.3甲酸-乙腈溶液提取，提取液经固相萃取柱净化后，液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。5 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。试剂 5.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。5.1.2 甲酸（HCOOH）：色谱纯。5.1.3 甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.1.4 氯化钠（NaCl）。DB34/T 43352022 3 溶液配制 5.2.1 0.3甲酸-乙腈溶液（V/V）：吸取
5、3 mL 甲酸（5.1.2），加乙腈（5.1.1）至 1000 mL，混匀。5.2.2 0.1甲酸水溶液（V/V）：吸取 1 mL 甲酸（5.1.2），加水稀释至 1000 mL，混匀。标准品 喹诺酮类、甲硝唑和羟基甲硝唑标准品，纯度均95，见附录A。或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。标准溶液制备 5.4.1 标准储备液（100 g/mL）：按纯度折算后，准确称取适量标准品，先加少量水溶解，再用甲醇（5.1.3）定容至 100 mL，配制成含量为 100 g/mL 的各单标储备液，18避光保存，有效期 1 年。5.4.2 混合标准工作液（1 g/mL）：分别吸取 1 mL 各单标储备液（
6、5.4.1）于 100 mL 容量瓶，用甲醇配成质量浓度为 1 g/mL 的混合标准溶液，18避光保存，有效期 6 个月。5.4.3 基质匹配混合标准工作曲线 选择与被测样品性质相同或相似的空白样品，按照 8.18.2 部分进行前处理，得到空白基质溶液。精确吸取一定量的混合标准工作液（5.4.2），用空白基质溶液逐级稀释成质量浓度分别为0.5 g/L、1 g/L、2 g/L、5 g/L、10 g/L、20 g/L 的基质匹配混合标准工作曲线溶液。材料 5.5.1 通过式反相混合型亲水亲脂固相萃取柱：60 mg/3 mL，或性能相当者。5.5.2 微孔尼龙滤膜：0.22 m。6 仪器和设备 液相
7、色谱-质谱/质谱仪（液相色谱-三重四极杆质谱联用仪）：配电喷雾离子源（ESI）。电子天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。涡旋混匀器。离心机：转速不低于 8000 r/min。组织捣碎机。匀浆机。氮吹仪。7 试样制备 样品测定部位按照 GB 2763 的规定执行。随机取芽菜类样品，用组织捣碎机充分粉碎，并使均质，装入洁净容器中，密封并标记，18以下保存。8 分析步骤 DB34/T 43352022 4 提取 称取 10 g（精确至 0.01 g）试样置于 50 mL 塑料离心管中，准确加入 10 mL 0.3甲酸-乙腈溶液（5.2.1），涡旋振荡 1 min，加入 1 g NaCl（5.
8、1.4），再涡旋振荡 1 min 后，以 8000 r/min 离心 5 min，取上清液，待净化。净化 吸取 3 mL 上清液（8.1），以约 1 mL/min 的流速全部通过固相萃取柱（5.5.1），收集流出液，精确量取1.0 mL流出液，45水浴氮吹至干，再加入 1.0 mL 初始流动相复溶，过 0.22 m 微孔尼龙滤膜（5.5.2），待测定。测定 8.3.1 液相色谱参考条件 如下：a)色谱柱：C18柱，2.150 mm，粒径 1.8 m，或性能相当者；b)流动相：A 相为 0.1甲酸水溶液（5.2.2），B 相为乙腈（5.1.1），梯度洗脱程序见表 1；c)流速：0.3 mL/mi
9、n；d)进样体积：2 L；e)柱温：35。表1 梯度洗脱程序 时间/min 0.1甲酸水溶液/乙腈/0 95 5 1.0 95 5 2.0 90 10 3.0 87 13 5.0 85 15 7.0 35 65 8.0 10 90 9.0 10 90 9.1 95 5 10.0 95 5 8.3.2 质谱参考条件 如下：f)离子源类型：电喷雾离子源（ESI）；g)扫描方式：正离子扫描；h)监测模式：多反应监测（MRM）；其他质谱参考条件见附录 B。8.3.3 定性测定 DB34/T 43352022 5 按照 8.3.1 和 8.3.2 所列的仪器参考条件，测定样品试液和标准工作溶液，若试液与
10、标准溶液中待测物的质量色谱峰保留时间的偏差在 2.5范围内；所有定性离子的信噪比均超过 3，且定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质匹配标准溶液的相对丰度一致，偏差不超过表2 的规定，则可判断样品中存在相应的待测物。表2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/50 2050（含）1020（含）10 允许相对偏差/20 25 30 50 8.3.4 定量测定 用基质匹配标准工作溶液（5.4.3）分别进样，以待测化合物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，外标法定量。标准物质的特征离子质量色谱图见附录C。8.3.5 试样溶液的测定 将基质匹配混合标准工作溶液和试样溶液依次注
11、入液相色谱-质谱/质谱仪中，保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，样品试液中待测物的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当稀释后再进行分析。空白试验 除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行操作。9 分析结果的表述 样品中待测物的含量按式（1）计算：i 10001000icVfm (1)式中：i 试样中待测物残留量的数值，单位为微克每千克（g/kg）；ci 由标准曲线求得试样溶液中待测物质量浓度的数值，单位为微克每升（g/L）；V 提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；m 试样质量的数值，单位为克（g）；f 稀释倍数；1000 换算系数；计算结果需
12、扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。10 精密度 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20。11 灵敏度 DB34/T 43352022 6 本文件对各化合物的方法定量限为 0.52.0 g/kg（见附录A）。DB34/T 43352022 7 A A 附录A （资料性）26 种化合物的名称、英文通用名、CAS 号和方法定量限 26种化合物的名称、英文通用名、CAS号和方法定量限见表A.1。表A.1 26 种各化合物的名称、英文名、CAS 号和方法定量限 序号 化合物名称 英文通用名称 CAS号 化学分子式 定量限（g/kg）
13、1 吡哌酸 Pipemidic acid 51940-44-4 C14H17N5O3 1.0 2 麻保沙星 Marbofloxacin 115550-35-1 C17H19FN4O4 1.0 3 依诺沙星 Enoxacin 74011-58-8 C15H17FN4O3 1.0 4 氟罗沙星 Fleroxacin 79660-72-3 C17H18F3N3O3 1.0 5 诺氟沙星 Norfloxacin 70458-96-7 C16H18FN3O3 1.0 6 氧氟沙星 Ofloxacin 82419-36-1 C18H20FN3O4 1.0 7 培氟沙星 Pefloxacin 70458-9
14、2-3 C17H20FN3O3 1.0 8 环丙沙星 Ciprofloxacin 85721-33-1 C17H18FN3O3 1.0 9 洛美沙星 Lomefloxacin 98079-51-7 C17H19F2N3O3 1.0 10 达氟沙星 Danofloxacin 112398-08-0 C19H20FN3O3 1.0 11 恩诺沙星 Enrofloxacin 93106-60-6 C19H22FN3O3 1.0 12 奥比沙星 Orbifloxacin 113617-63-3 C19H20F3N3O3 1.0 13 加替沙星 Gatifloxacin 112811-59-3 C19H
15、22FN3O4 1.0 14 沙拉沙星 Sarafloxacin 98105-99-8 C20H17F2N3O3 1.0 15 双氟沙星 Difloxacin 98106-17-3 C21H19F2N3O3 1.0 16 司帕沙星 Sparfloxacin 111542-93-9 C19H22F2N4O3 1.0 17 莫西沙星 Moxifloxacin 151096-09-2 C21H24FN3O4 2.0 18 吉米沙星 Gemifioxacin 175463-14-6 C18H20FN5O4 1.0 19 巴洛沙星 Balofloxacin 127294-70-6 C20H24FN3O4
16、 1.0 20 妥苏沙星 Tosufloxacin 108138-46-1 C19H15F3N4O3 2.0 21 西诺沙星 Cinoxacin 28657-80-9 C12H10N2O5 1.0 22 噁喹酸 Oxolinic acid 14698-29-4 C13H11NO5 0.5 23 萘啶酸 Nalidixic acid 389-08-2 C12H12N2O3 0.5 24 氟甲喹 Flumequine 42835-25-6 C14H12FNO3 0.5 25 甲硝唑 Metronidazole 443-48-1 C6H9N3O3 1.0 26 羟基甲硝唑 Hydroxy metro
17、nidazole4812-40-2 C6H9N3O4 1.0 DB34/T 43352022 8 B B 附录B （资料性）质谱参考条件 质谱参考条件如下：i)毛细管电压：3000 V；j)离子源温度：230；k)干燥气流速：18 L/min；l)雾化气压力：35 psi；m)鞘气温度：335；n)鞘气流速：11 L/min；其他质谱参数见表 B.1。表B.1 保留时间、离子对和碰撞能 序号化合物 母离子(m/z)子离子(m/z)碰撞能/eV保留时间/min 保留时间窗口/min 1 吡派酸 304.1 217.1*；286.1 22；17 3.32 1.31 2 麻保沙星 363.1 319
18、.9*；344.9 13；20 3.87 1.14 3 依诺沙星 321.1 303.1*；232.0 22；43 3.99 0.71 4 氟罗沙星 370.1 326.1*；269.1 20；27 4.12 1.37 5 诺氟沙星 320.3 302.0*；233.1 20；20 4.19 1.17 6 氧氟沙星 362.1 318.1*；261.1 20；25 4.22 1.17 7 培氟沙星 334.2 316.2*；290.2 20；17 4.33 1.12 8 环丙沙星 332.2 314.0*；230.9 20；25 4.40 1.13 9 洛美沙星 352.2 265.1*；30
19、8.3 25；15 4.73 1.21 10 达氟沙星 358.2 340.1*；283.0 20；20 4.93 1.40 11 恩诺沙星 360.0 316.1*；342.1 20；20 5.16 1.40 12 奥比沙星 396.1 352.2*；295.1 18；25 5.32 1.24 13 加替沙星 376.2 332.2*；261.1 18；33 5.81 0.99 14 沙拉沙星 386.0 342.0*；299.0 20；20 6.04 1.17 15 双氟沙星 400.2 382.1*；356.1 20；15 6.12 1.14 16 司帕沙星 393.1 349.1*；2
20、92.1 20；25 6.20 0.88 17 莫西沙星 402.3 384.5；357.9 23；32 6.35 0.88 18 吉米沙星 390.0 372.2*；359.0 20；13 6.37 0.98 19 巴洛沙星 391.1 360.0*；314.0 25；15 6.39 0.86 20 妥苏沙星 405.0 387.0*；344.0 23；23 6.39 0.74 21 西诺沙星 263.0 245.0*；217.0 15；25 6.44 0.76 22 噁喹酸 262.0 244.0*；216.0 18；33 6.69 0.98 23 萘啶酸 233.0 215.0*；187
21、.0 13；25 7.11 0.97 24 氟甲喹 262.1 244.0*；202.0 18；38 7.18 0.98 25 甲硝唑 172.1 128.1*；82.0 15；30 1.79 0.96 26 羟基甲硝唑 188.1 123.1*；126.0 10；15 1.30 1.04 注：*为定量离子。C C DB34/T 43352022 9 附录C （资料性）26 种化合物特征离子质量色谱图 26种化合物特征离子质量色谱图见图C.1。图C.1 26 种化合物的特征离子质量色谱图（2.0 g/L）2.42.73.03.33.63.901234I/104t/min1.吡派酸304.1/2
22、17.1304.1/286.13.0 3.3 3.6 3.9 4.2 4.5 4.80.00.40.81.21.6I/104t/min2.麻保沙星363.1/319.9363.1/344.93.33.63.94.24.54.801234I/104t/min3.依诺沙星321.1/232.0321.1/303.13.3 3.6 3.9 4.2 4.5 4.8012345I/104t/min4.氟罗沙星370.1/326.1370.1/269.13.63.94.24.54.85.1012345I/104t/min5.诺氟沙星320.3/302.0320.3/233.13.3 3.6 3.9 4.2
23、 4.5 4.8 5.101234567I/104t/min6.氧氟沙星362.1/318.1362.1/261.13.6 3.9 4.2 4.5 4.8 5.10123456I/104t/min7.培氟沙星334.2/316.2334.2/290.23.64.04.44.85.20123456I/104t/min8.环丙沙星332.2/314.0332.2/230.94.24.54.85.15.40123456I/104t/min9.洛美沙星352.2/265.1352.2/308.34.2 4.5 4.8 5.1 5.4 5.701234I/104t/min10.达氟沙星358.2/340
24、.1358.2/283.04.44.85.25.66.0012345I/104t/min11.恩诺沙星360.0/316.1360.0/342.14.44.85.25.66.0012345I/104t/min12.奥比沙星396.1/352.2396.1/295.15.15.45.76.06.36.60.00.51.01.52.02.5I/104t/min13.加替沙星376.2/332.2376.2/261.15.45.76.06.36.60.00.51.01.52.02.5I/104t/min14.沙拉沙星386.0/342.0386.0/299.05.45.76.06.36.66.90.
25、01.53.04.56.0I/104t/min15.双氟沙星400.2/382.1400.2/356.15.76.06.36.602468I/104t/min16.司帕沙星393.1/349.1393.1/292.1DB34/T 43352022 10 图 C.1（续）5.76.06.36.66.90.00.51.0I/104t/min17.莫西沙星402.3/384.5402.3/357.95.76.06.36.66.90.00.81.62.43.24.0I/104t/min18.吉米沙星390.0/372.0390.0/359.05.76.06.36.66.902468I/103t/min
26、19.巴洛沙星391.1/360.0391.1/314.05.76.06.36.66.901234I/104t/min20.妥苏沙星405.0/387.0405.0/344.05.66.06.46.87.27.60123I/104t/min21.西诺沙星263.0/245.0263.0/217.06.06.36.66.97.27.50.00.61.21.82.4I/105t/min22.噁喹酸262.0/244.0262.0/216.06.66.97.27.57.80.00.51.01.52.0I/105t/min23.萘啶酸233.0/215.0233.0/187.06.66.97.27.57.80123456I/104t/min24.氟甲喹262.1/244.0262.1/202.01.21.51.82.12.40.00.51.01.5I/104t/min25.甲硝唑172.1/82.0172.1/128.10.91.21.51.82.1012I/103t/min26.羟基甲硝唑188.1/126.0188.1/123.1
