1、 ICS 65.020.20 CCS B 36 22 吉林省地方标准 DB22/T 35312023 人参组培不定根快速扩繁技术规程 Technical code of practice for micropropagation of ginseng adventitious root2023-09-28 发布2023-11-16 实施吉林省市场监督管理厅发 布 DB22/T 35312023 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省农业农
2、村厅提出并归口。本文件起草单位：吉林省农业科学院（中国农业科技东北创新中心）。本文件主要起草人：崔锡花、宋杭霖、金荣德、闫海洋、程正海、马襄鸿、武俊男、刘春光、宋宇博、兰西、李艳君。DB22/T 35312023 1 人参组培不定根快速扩繁技术规程 1 范围 本文件确立了人参组培不定根快速扩繁的程序，规定了不定根诱导、生物反应器培养组培不定根、收获及保存等阶段的操作指示，描述了记录与档案等追溯方法。本文件适用于人参组培不定根的快速扩繁。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，
3、其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 23062013 花卉种苗组培快繁技术规程3 术语和定义 NY/T 2306 界定的术语和定义适用于本文件。组培不定根 adventitious root 利用植物组织、器官或细胞等作为起始材料，通过植物组织培养方式生产获得的根状物。来源：NY/T 23062013，3.12，有修改 固体培养 solid culture 通过添加植物凝胶使配置好的营养液形成固体状态供植物生长的过程。继代 subculture 对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或器官)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养。来源：NY/T 2306
4、2013，3.2，有修改 植物生物反应器 plant bioreactor 以植物细胞的大规模培养技术为基础，根据植物培养细胞次级代谢全能性的理论，将细胞作为一个活的工厂生产特定化学物质的生物反应器。4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。2,4-D:2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-Dichlorophenoxyacetic acid）IBA:吲哚丁酸（Indole-3-butyric acid）DB22/T 35312023 2 FeNa-EDTA:乙二胺四乙酸铁钠盐 EDTA iron()sodium salt MS:Murashige and Skoog,1962 5 程序 人参组培不定根快速
5、扩繁技术规程包含 3 个阶段，程序流程图见图 1。图1 人参组培不定根快速扩繁程序 6 不定根诱导 材料及处理 6.1.1 以健康人参主根为外植体，用自来水冲洗 20 min，洗净后在超净工作台中切成 1 cm2 cm 方块，用 70%乙醇处理 30 s，再用次氯酸钠水溶液（有效氯为 1%）浸泡 40 min（每隔 10 min 用无菌水清洗 1 次）进行表面消毒。6.1.2 表面消毒后的根用无菌水清洗 3 次以上，切成（0.5 cm0.5 cm 0.4 cm）（长宽高）（0.7 cm0.7 cm0.4 cm）（长宽高）的块。愈伤组织诱导及继代 6.2.1 培养基配方：MS+2,4-D 1.0
6、 mg/L+蔗糖 30 g/L+植物凝胶 2.3 g/L，pH 5.75.8。6.2.2 培养条件：22 1 暗培养。6.2.3 消毒（6.1.2）后的小块接种在含有培养基（6.2.1）的培养皿中诱导愈伤组织 6 周8 周后，将诱导的愈伤组织接种到培养基中进行继代培养，每 2 周3 周继代一次，筛选高产愈伤组织。组培不定根诱导及继代 6.3.1 组培不定根诱导 6.3.1.1 培养基配方：MS+IBA 3 mg/L5 mg/L+蔗糖 30 g/L+植物凝胶 2.3 g/L，pH 5.75.8。6.3.1.2 培养条件：22 1 暗培养。6.3.1.3 接种：将愈伤组织接入含有培养基（6.3.1
7、.1）的培养皿中培养 6 周，诱导不定根。DB22/T 35312023 3 6.3.2 组培不定根继代 6.3.2.1 培养基配方：改良的 MS NH4+：NO3-=7.5（mM）:37.5（mM）；CuSO45H2O 0.05 mg/L；FeNa-EDTA 0.0373 g/L；肌醇 0.1 g/L+IBA 5 mg/L+蔗糖 50 g/L+植物凝胶 2.3 g/L，pH 5.75.8。6.3.2.2 培养条件：22 1 暗培养。6.3.2.3 接种：诱导的不定根在接入含有培养基（6.3.2.1）的培养皿中培养，每 4 周5 周继代一次，培养 4 代6 代后获得高产组培不定根材料。7 生物
8、反应器培养组培不定根 组培不定根增殖培养基 6.3.2.1 中的培养基去掉植物凝胶。培养条件 接种量 5 g/L7 g/L（鲜重），反应器工作体积为其容量（3 L20 L）的 70%80%，通气量为 0.05 vvm0.1 vvm，22 1 暗培养 7 周。注：vvm 指通气比，每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值。继代培养 将 6.3.2.3 中高产组培不定根材料接入气升式生物反应器内进行增殖培养，7 周后的增殖材料切成 1 cm 的不定根，按 7.2 的培养条件继代。8 收获及保存 培养 7 周后从生物反应器中收获人参组培不定根，用自来水清洗，50 55 烘干箱内烘干至含水量 5%，干品原料可存放在防潮的容器内室温保存。9 记录与档案 整个生产过程要有及时、详尽的记录，档案至少保存 3 年，做到可追溯。
