1、 ICS 65.020 CCS B 05 22 吉林省地方标准 DB22/T 34942023 茄子抗褐纹病鉴定技术规程 Technical code of practice for resistance evaluation of eggplant cultivars to Phomopsis blight 2023-09-28 发布2023-11-16 实施吉林省市场监督管理厅发 布 DB22/T 34942023 I 前言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识
2、别专利的责任。本文件由吉林农业大学提出。本文件由吉林省农业农村厅归口。本文件起草单位：吉林农业大学、吉林农业科技学院、辽宁省桓仁满族自治县农业发展服务中心。本文件主要起草人：陈姗姗、赵春波、韩玉珠、李爽、赵靖、段微、吴春燕、于占东、张莹、曹鑫、任瑞敏。DB22/T 34942023 1 茄子抗褐纹病鉴定技术规程 1 范围 本文件确立了茄子抗褐纹病鉴定的程序，规定了接种体制备、育苗、接种鉴定、病情调查、抗性评价等阶段的操作指示，描述了过程记录的追溯方法。本文件适用于茄子品种资源对茄子抗褐纹病的室内鉴定及评价。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
3、。3.1 茄子褐纹病 Phomopsis blight of eggplant 由半知菌类真菌茄褐纹拟茎点霉（有性态 Diaporthe vexans、无性态 Phomopsis vexans）引起的一种真菌病害。3.2 抗病性 disease resistance茄子品种（系）所具有的能够抵御或减轻茄子褐纹病侵染和危害的可遗传性状。3.3 接种体 inoculum 用于接种茄子以引起茄子褐纹病的分生孢子或菌丝体。3.4 病情指数 disease index（DI）全面考虑发病率与严重度两者的综合指标。4 程序框 DB22/T 34942023 2 图1 茄子抗褐纹病鉴定程序流程 5 接种体制
4、备 5.1 病原物分离和纯化 采用常规组织分离法。从典型病斑的病健交界处，用无菌刀片切取 5 mm10 mm 的病组织，75%乙醇消毒 30 s，无菌水冲洗 3 次4 次，用无菌滤纸吸干组织块表面水分，置于马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基中，每皿接入 3 块5 块，用封口膜将培养皿封口后置入 25 恒温箱中暗培养。待长出分生孢子器后，单孢法纯化获得纯培养物。5.2 茄子褐纹病菌的鉴定和保存 对经过柯氏证病法则验证的有致病性的分离物进行形态学观察。与茄子褐纹病菌（见附录 A）形态一致的分离物编号，用滤纸片法-20 冰箱长期保存菌种。5.3 接种体的繁殖和保存 5.3.1 将菌种转接于 PDA 培
5、养基，置于 25 恒温箱中培养 7 天后，用内径为 6 mm 的打孔器从菌落边缘打取菌饼，转接于 PDA 平板，培养至 21 天长出分生孢子器。5.3.2 用无菌的镊子夹取分生孢子器置于双层无菌载玻片压碎后，用少量无菌水冲洗，制成孢子悬液。在光学显微镜下使用血球计数板对菌悬液中的孢子进行计数，配成 1107 个/mL 的孢子悬浮液待用。6 育苗 6.1 将试验种子放入 10%磷酸三钠溶液，或 0.1%高锰酸钾溶液中浸种 20 分钟后，用清水冲洗 4 次，放在常温条件下浸种 10 小时 12 小时，然后放在 28 30 条件下催芽，每 10 小时用温水投洗一次。对照抗病和感病品种种子采取同样方式
6、处理。DB22/T 34942023 3 6.2 出芽后播种于 10 cm 10 cm 装有营养土的营养钵中，营养土采用近五年未种过茄科植物的肥沃园田土 6 份、草炭土 3 份，充分腐熟的农家肥 1 份进行配制，在日光温室内育苗，白天温度 25 30，夜间温度 15 17，其他正常管理，育苗期间不使用任何杀菌剂。6.3 幼苗应生长健壮、整齐一致，待长至 5 叶期用于苗期接种。7 接种鉴定 7.1 接种时期 幼苗 4 片6 片真叶期进行接种。7.2 接种方法 采用喷雾法接种，用小型喷雾器将配制好的 1107 个/mL孢子悬浮液，均匀喷雾到每一片叶的正反面，每株接种孢子悬浮液 5 mL。每份鉴定材
7、料 3 次重复，每一重复 10 株苗。7.3 接种后的管理 接种 24 小时内，将植株置于鉴定室内黑暗保湿，相对湿度 90%95%，24 小时以后保持每天光照 14 小时，采用灌根浇水，保持土壤湿度近饱和，接种期间温度控制在 24 28 范围内。7.4 病情调查 7.4.1 调查时间 病情调查于接种后 10 天15 天进行。7.4.2 调查方法 调查每份鉴定材料接种后发病情况，根据病害症状描述，逐份进行材料调查，记载病情级别，计算出病情指数（DI）。茄子褐纹病苗期症状见附录 A，病情级别划分见附表 A.1。7.4.3 病情指数计算 病情指数（DI）按公式（1）计算：=()100(1)式中：DI
8、病情指数；s 各病情级别代表数值；n 各病情级别病株(叶)数；N 调查总株(叶)数；S 最高病情级别代表值。8 抗性评价 8.1 抗性水平 DB22/T 34942023 4 依据鉴定材料的病情指数（DI）平均值，确定抗性水平，划分标准见表 1。表1 茄子褐纹病抗性评价标准 病情指数 抗感评价 DI=0.0 免疫（I）0DI 5 高抗（HR）5DI15 抗病（R）15DI25 中抗（MR）25DI35 感病（S）35DI50 中感（MS）DI50 高感（HS）8.2 鉴定有效性判别 感病对照材料达到其相应感病程度（DI25）时，该批次鉴定视为有效。DB22/T 34942023 5 A A 附
9、录A （资料性）茄子褐纹病 A.1 学名 茄褐纹拟茎点霉（有性态 Diaporthe vexans、无性态 Phomopsis vexans）A.2 形态描述 A.2.1 茄褐纹拟茎点霉病斑上产生的黑色小点是病菌的分生孢子器。初埋生于寄主表皮下，成熟后突破表皮而外露。孢子器单独着生于子座上，呈凸透镜形，具有孔口，其大小为（55400）m（45250）m，可随寄主部位和环境条件而变化。A.2.2 分生孢子有 2 种不同形态：a)椭圆形或纺锤形，单孢无色，大小为（58）m(28）m，通常内含 2 个3 个油球；b)呈细长线状，并在一端弯曲成钩，单孢无色，大小为（12.228.0）m（1.22.0）
10、m。A.3 病情级别划分 幼苗病情级别及其相对应的症状描述见表 A.1。表A.1 茄子褐纹病病情级别划分 病情级别 症状描述 0 级 叶片不发病 1 级 病斑面积占叶片面积的 1%5%3 级 病斑面积占叶片面积的 6%10%5 级 病斑面积占叶片面积的 11%25%7 级 病斑面积占叶片面积的 26%50%9 级 病斑面积占叶片面积大于 50%A.4 病原菌培养性状 A.4.1 茄子褐纹病菌在 PDA 培养基上培养，温度为 28 30，湿度 80%以上，20 天后产生黑褐色分生孢子器，分生孢子器呈现不规则圆形，直径 7 mm 左右，中间隆起，表面不光滑，菌落形态见图 A.1。A.4.2 挑取黑
11、色分生孢子器，在载玻片上压片镜检，可观察到椭圆形分生孢子器和分生孢子，孢子尺寸为（48）m（26）m,分生孢子器形态见图 A.2。DB22/T 34942023 6 图A.1 茄子褐纹病菌在 PDA 培养基上的菌落形态 a）茄子褐纹病菌分生孢子器b）茄子褐纹病菌型分生孢子图A.2 显微镜下的茄子褐纹病菌分生孢子器形态 A.5 记录档案 对茄子褐纹病抗性鉴定过程进行详实的记录并存档，记录格式见表 A.2。表A.2 茄子抗褐纹病鉴定结果记载表 编 号 品 种 名 称 来源 病情级别 病情指数 抗性评价 0 级 1 级 3 级 5 级 7 级 9 级 播种时间：接种日期：接种生育期：接种病原菌分离编号：调查日期：
