1、 ICS 11.220 CCS B 41 DB22吉林省地方标准DB 22/T 34342023牛出血性败血病防治技术规范 Technical specifications for prevention and cure of bovine haemorrhagic septicaemia 2023-01-13 发布 2023-03-01 实施吉林省市场监督管理厅 发 布 DB22/T 34342023 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任
2、。本文件由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本文件起草单位：吉林省动物疫病预防控制中心、吉林省畜牧总站。本文件主要起草人：吴丹、于钦磊、王欣睿、马晓媛、白翠、刘冬冬、李伟、常帅、孙亮、胡泽宇、曹东阳、杨金鑫、朱奕霏。DB22/T 34342023 1 牛出血性败血病防治技术规范 1 范围 本文件规定了牛出血性败血病的诊断、防治措施、疫情报告和疫情处置的要求，描述了档案管理的证实方法。本文件适用于牛出血性败血病的诊断和防治。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过中文的规范性引用而构成文件的必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅注日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所
3、有的修改单）适用于本文件。GB/T 27530 牛出血性败血病诊断技术 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T 815 肉牛饲养标准 NY/T 3075 畜禽养殖场消毒技术 NY/T 3445 畜禽养殖场档案规范 NY/T 3467 牛羊饲养场兽医卫生规范 NY 5030 无公害农产品 兽药使用准则 NY 5032 无公害食品 畜禽饲料和饲养添加剂使用准则 DB22/T 3137 动物疫情报告管理规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 牛出血性败血病 bovine haemorrhagic septicaemia 又名牛巴氏杆菌病，由多杀性巴氏杆菌某
4、些血清型引起的一种牛的高度致死性、急性败血性传染病。4 诊断 4.1 流行病学特点 4.1.1 病原 多杀性巴氏杆菌（pasteurella multocida），革兰氏阴性球杆状或短杆状菌，两端钝圆，无鞭毛，不形成芽孢。根据荚膜抗原和菌体抗原区分血清型，前者可分为 A、B、D、E 和 F 5 个血清型，后者DB22/T 34342023 2 可分为 16 个血清型。其中对牛具有致病性的主要是荚膜血清 A 型、B 型或 E 型。引起牛出血性败血病的多杀性巴氏杆菌以血清型 6B 和 6E 为主。4.1.2 传播途径 主要通过病牛或带菌牛的排泄物、分泌物经消化道和呼吸道传播。多杀性巴氏杆菌进入动物
5、体内后大量寄生在牛的上呼吸道和消化道黏膜上，各种诱因使牛机体抵抗力降低时，发生内源性感染。外源性传染多经消化道，偶尔可经皮肤黏膜的损伤或吸血昆虫的叮咬而传播。气候突变、长途运输、饥饿、寒冷和饲养管理等不良因素可诱发该病。4.1.3 易感动物 各品种牛均可感染。4.1.4 潜伏期 潜伏期一般为 2 d5 d。4.1.5 发病季节 发病无明显季节性，冷热交替、气候剧变时多发。4.1.6 病死率 不同菌株致病性有所差异，强毒力菌株导致的病死率可接近 100%。在地方性流行地区，死亡病例主要为较大犊牛和青年牛。4.2 临床症状 符合 GB/T 27530 描述。4.3 病理变化 4.3.1 多数病牛呈
6、现由严重充血水肿引起的颈部明显肿胀。4.3.2 败血型呈一般败血症变化，内脏器官出血，淋巴结显著水肿，胸腹腔有大量渗出液。4.3.3 浮肿型在咽喉或颈下有浆液浸润，切开浮肿部流出深黄色透明液体，间或杂有出血，咽周组织和会咽软骨韧带呈黄色胶样浸润，咽淋巴结和颈前淋巴结高度急性肿胀。4.3.4 肺炎型主要表现为胸膜炎和格鲁布性肺炎，胸腔中有大量浆液性纤维素性渗出，肺切面呈大理石状，心包与胸膜粘连，内有干酪样坏死物。4.4 实验室诊断 4.4.1 样品采集 按 NY/T 541 规定采集鼻腔拭子、抗凝全血或病变组织。4.4.2 病原分离鉴定 按 GB/T 27530 规定执行。4.4.3 荧光 PC
7、R 法 见附录 A。DB22/T 34342023 3 4.5 结果判定 4.5.1 临床疑似病例 病牛或病死牛符合 4.1、4.2 和 4.3，判定为临床疑似病例。4.5.2 临床疑似病例 符合牛出血性败血病的流行病学特点、临床表现和病理变化，判定为临床疑似病例。4.5.3 确诊病例 对临床疑似病例，经上述任一实验室诊断方法检测，结果为阳性的，判定为牛出血性败血病阳性病例。5 防治措施 5.1 免疫 5.1.1 疫苗 应选择符合农业农村部兽药管理条例，且具有生产许可证和批准文号的牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗。5.1.2 程序 散发地区一年免疫 1 次，多发地区每年免疫 2 次，具体免疫时间根据
8、各地区牛出血性败血病流行情况而定。发生疫情时，应对同群的假定健康牛进行紧急接种。5.1.3 方法 依据疫苗使用说明操作。5.1.4 注意事项 免疫操作后应及时收集针头、注射器、疫苗瓶和残余疫苗，进行无害化处理。5.2 治疗 5.2.1 抗菌消炎疗法 可使用青霉素类、链霉素类、四环素类和磺胺类等抗菌药物进行治疗。宜根据药敏试验结果选择抗生素。兽药使用记录应按 NY 5030 规定执行。5.2.2 对症疗法 在应用抗菌消炎疗法的同时，再结合解热、镇痛、补液、解毒、强心的对症疗法。5.2.3 加强营养 治疗期间应适当补充维生素，并给予易消化饲料，饲料应符合 NY 5032 的要求。5.3 饲养管理
9、DB22/T 34342023 4 5.3.1 养殖场应按 NY/T 815 要求保证牛的营养需要。5.3.2 兽医卫生符合 NY/T 3467 要求。5.3.3 饲养人员应定期观察牛只的采食情况和精神状态。5.3.4 周边场发生疫情时，应提高观察频率。5.3.5 疾病发生或牛只死亡，应聘请当地具有执业兽医资质的人员进行诊断和治疗。5.4 消毒 5.4.1 养殖场消毒应按 NY/T 3075 规定进行，消毒药应经常更换。5.4.2 发生牛出血性败血病，应对感染和发病牛及其污染物、病死牛及其污染物、被污染环境和无害化处理环节实行有效实时消毒。6 疫情报告 应按 DB22/T 3137 规定执行。
10、7 疫情处置 7.1 确诊后应立即对隔离的病牛进行药物治疗，并对同群假定健康牛进行观察、测温，按 5.2 执行。7.2 病死牛及可能被污染的物品，应按农业农村部病死及病害动物无害化处理技术规范规定执行。8 档案管理 所有记录应按 NY/T 3445 规定进行管理。A DB22/T 34342023 5 附 录 A（规范性）多杀性巴氏杆菌荧光 PCR 检测方法 A.1 仪器设备 A.1.1 高速冷冻离心机，最高离心速度不低于 12 000 r/min。A.1.2 生物安全柜。A.1.3-20 冰箱。A.1.4 荧光定量PCR仪。A.1.5 微量移液器，0.5L10L、2L20L、20L200L、
11、200L1000L。A.2 耗材 A.2.1 滤芯吸头，10 L、200 L、1 000 L。A.2.2 Eppendorf 管，1.5 mL、0.5 mL、0.2 mL。A.2.3 PCR管，0.2 mL。A.3 质控品 A.3.1 阳性对照，含多杀性巴氏杆菌菌株的培养液。A.3.2 阴性对照，无核酸酶水。A.4 试剂 A.4.1 DNA提取试剂盒。A.4.2 荧光PCR预混液。A.4.3 引物与探针，见表 A.1。表A.1 引物与探针序列及浓度 名称 序列 浓度 上游引物 F 5-GCCACCTGCCATAAGATGAGC-3 10 pmol/L 下游引物 R 5-CGTAGGAGTCTG
12、GACCGTGTC-3 10 pmol/L 探针 5-FAM-GCCTACCAAGCCTGCGATCTCTAGC-TAMRA-3 5 pmol/L A.5 操作步骤 A.5.1 核酸提取 按 DNA 提取试剂盒方法或其他等效方法提取 DNA 模板。A.5.2 荧光定量 PCR 扩增体系 DB22/T 34342023 6 在试剂准备区打开和配制试剂，配制完毕后应及时将剩余试剂放回贮存区域。取 0.2 mL PCR 反应管，在冰浴条件下配制 20 L 反应体系，按照表 A.2 依次加入以下成分，同时设阴性、阳性对照。加完后盖紧盖子。表A.2 样品反应体系 体系组分 用 量 2PCR 预混液 10
13、.0 L 无核酸酶水 5.9 L 上游引物 F 0.8 L 下游引物 R 0.8 L 探针 0.5 L DNA 模板 2.0 L 总 量 20.0 L A.5.3 荧光 PCR 的扩增条件 在核酸扩增区将 PCR 管置荧光定量 PCR 仪上按如下程序扩增：95 预变性 30 s；95 变性 15 s，60 退火 1 min，共 40 个循环，荧光收集设置在 60 进行。A.6 结果分析条件设定 试验检测结束后，根据生成的荧光曲线和 Ct 值直接读取检测结果，Ct 值为每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。原则上可设定仪器自动模式分析确定阈值基线，特殊情况下阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，不同仪器可对阈值线的位置进行调整，然后读取检测结果。A.7 质控标准 阴性对照无 Ct 值并且无典型扩增曲线。阳性对照的 Ct 值应 30.0，并出现特定的扩增曲线。如阴性对照和阳性对照不成立，则实验视为无效。A.8 结果判定 A.8.1 无 Ct 值，无典型的扩增曲线，可判为多杀性巴氏杆菌核酸阴性。A.8.2 Ct 值 35.0，出现典型的扩增曲线，可判为多杀性巴氏杆菌核酸阳性。A.8.3 35.0 Ct 值 40.0，出现特定的扩增曲线，样品检测结果判为疑似。应重新检测，仍为疑似，判定为多杀性巴氏杆菌核酸阳性。_
