1、 ICS 65.020.01 CCS B 16 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 33232024 番茄抗颈腐根腐病室内鉴定技术规程 Technical code of practice for evaluating resistance of tomato against Fusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersici 2024-01-25 发布2024-02-25 实施内蒙古自治区市场监督管理局发 布 DB15/T 33232024 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件
2、由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC 25）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古农业大学、内蒙古包头市九原区农业技术推广中心、辽宁省绥中县农业事务服务中心。本文件主要起草人：杨永青、王永、刘燕、高婧、李正男、孙平平、张磊、张俊、党媛玥、宋培玲、贾晓清、康立茹、乔慧蕾、刘富贵、白金。DB15/T 33232024 1 番茄抗颈腐根腐病室内鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了番茄抗颈腐根腐病室内鉴定方法，包括主要仪器、培养基的配制、分生孢子液的制备、鉴定材料的准备、人工接种、室内抗性鉴定。本文件适用于在室内条件下对番茄幼苗进行颈腐根腐病
3、抗性鉴定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 1858.3 番茄抗枯萎病鉴定技术规程第3部分：番茄抗枯萎病鉴定技术规程 3 术语和定义 NY/T 1858.3 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。番茄颈腐根腐病 Fusarium crown and root rot 由尖孢镰刀菌番茄颈腐根腐专化型（Fusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersici，FORL）引起的一种番茄土传病害，主
4、要症状为：初始发生时主根基部开始褐变，后扩展到土壤与植株茎基部交接处，环绕茎基部有浅褐色至深褐色病斑；严重时维管束褐变和根部腐烂，苗期发病时茎基部溢缩变褐，可从发病部位折倒而死亡；成株期发病严重时导致全株性萎蔫。4 主要仪器 高压灭菌锅、超纯水系统、恒温培养箱、超净工作台、光学显微镜、恒温振荡摇床、电子天平、血球计数板等。5 培养基的配制 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）将马铃薯洗净去皮切块，称 200 g 加 1000 mL 蒸馏水，煮沸 10min20 min，用四层纱布过滤，加入 20 g 葡萄糖和 20 g 琼脂粉，补加蒸馏水至 1000 mL，121 高压灭菌 20 min。马铃薯葡
5、萄糖液体培养基（PDB）同 5.1 中 PDA 的配制方法，不加琼脂粉。DB15/T 33232024 2 6 分生孢子液的制备 将已纯化并鉴定的番茄颈腐根腐病菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上培养 5 d7 d，从培养皿 3/4 处打取 3 块直径为 5 mm 的菌块置于盛有 100 mL 马铃薯葡萄糖液体培养基（PDB）的 500 mL三角瓶中，25，150 rpm/min 振荡培养 3 d，用 4 层无菌纱布过滤去除菌丝体获得分生孢子液，利用血球计数板计数，无菌水调节分生孢子液浓度至 1107个/mL，备用。7 鉴定材料的准备 育苗基质预先装入不锈钢托盘中，在 105 烘箱中干热
6、灭菌 3 h，自然冷却后加一定量无菌水拌匀（基质含水量约为 50%），装入 21 孔加深穴盘。选取饱满的种子，放入 50 55 的温水中浸种 15 min20 min，播种于穴盘中；待幼苗生长至 34 叶期时，进行室内人工接种。8 人工接种 鉴定对照材料 设“Moneymaker”番茄作为感病对照品种。接种方法 将水果刀（或手术刀）插入幼苗周围的基质中，对植株侧根进行伤根处理，然后将 30 mL 病原菌孢子液灌入其根系周围；将穴盘置于 18 22，16 h 光照、8 h 黑暗人工气候室中常规管理。每个材料设置 3 次重复，每次重复接种 20 株幼苗；同时设置接无菌水的植株为对照。9 室内抗性鉴
7、定 发病情况调查 接种 30 d 后，将植株根系清洗干净，按照附录 A 中的图 A.1 中病情分级标准和表 A.1 中各病情级别的症状描述准进行发病等级调查。病情指数计算 根据公式（1）计算病情指数：.（1）式中：DI为病情指数 disease index，DI；DV为病情级别代表的数值，分别为 0、1、2、3、4；n为各病情级别的植株数；DVX为最高病情级别的代表数值，本文件中为 4；N为同一种材料调查的总株数。DB15/T 33232024 3 抗性评价 按照下列抗性鉴定标准1对供试材料进行抗性评价。免疫：DI=0；高抗：0DI12.5；抗病：12.5DI25；中抗：25DI50；感病：5
8、0DI75；高感：75DI100。鉴定有效性判定 感病对照材料“Moneymaker”的病情指数50时，该批次抗性鉴定视为有效。DB15/T 33232024 4 A A 附录A （资料性）番茄抗颈腐根腐病鉴定中病情级别划分及分级标准 A.1 番茄颈腐根腐病抗性鉴定病情分级标准参考图示见图 A.1。标引序号说明：a：0 级；b：1 级；c：2 级；d：3 级；e：4级。图A.1 番茄颈腐根腐病抗性鉴定病情分级标准参考图示 A.2 番茄颈腐根腐病病情级别的划分见表 A.1。表A.1 番茄颈腐根腐病病情级别的划分 病情分级 症状描述 参考图示 0 级 主根白色、侧根白色或浅黄色、均无褐变，纵切维管
9、束正常 图 1a 1 级 主根基部轻微褐变，侧根正常，纵切维管束正常 图 1b 2 级 主根基部明显褐变，靠近主根基部的侧根褐变，纵切维管束褐变但褐变部位未到达地上茎部 图 1c 3 级 主根侧根明显褐变，侧根脱落，纵切维管束主根基部明显褐变，且褐变部位延维管束向上到达茎部，且超过株高的 1/4 但不超过株高的 1/2 图 1d 4 级 植株长势受限，根部严重褐变甚至腐烂，侧根脱落，纵切根、茎维管束严重褐变，且褐变部位超过株高的 1/2 图 1e DB15/T 33232024 5 参考文献 1 王梦蕊,刘淑梅,侯丽霞,王施慧,吕宏君,苏晓梅.2022.番茄颈腐根腐病抗性鉴定技术的建立及抗性种质资源筛选.中国农业科学,55(4):707-718.
