1、 ICS 65.020.01 CCS B 05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 32842023 北虫草菌种制作技术规程 Technology code of pratice of production for cordyceps militaris spawns 2023-12-29 发布2024-01-29 实施内蒙古自治区市场监督管理局发 布 DB15/T 32842023 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC 25）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农
2、牧业技术推广中心、内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古农业大学、赤峰市敖汉旗农牧局、兴安盟农牧技术推广中心。本文件主要起草人：李志平、鲍红春、苑兴文、肖强、于传宗、贺龙、朱玉成、王佐、李文彪、庞杰、李小雷、贺琪、贾晓东、邓海峰、闫庆琦、季祥、郑莎、肖杰、张娜。DB15/T 32842023 1 北虫草菌种制作技术规程 1 范围 本文件规定了北虫草菌种生产要求、菌种制备、检验、贮存技术。本文件适用于北虫草各级菌种生产。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修
3、改单）适用于本文件。GB 5749 生活饮用水卫生标准 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。北虫草 cordyceps militaris 又名蛹虫草、北冬虫夏草，隶属于子囊菌门、虫草科、虫草属，是一种药、食用菌。子实体为棒状或蝌蚪状，高45 mm50 mm，淡黄色。菌种 spawn 生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。液体菌种 liquid spawn 用液体培养基在生物发酵罐等容器中，通过深层培养技术生产的液体形态食用菌菌种。母种 stock culture 经分离、纯化
4、、杂交、诱变等各种方法选育得到的具有结实性菌丝培养物及其继代培养物，也称一级种。DB15/T 32842023 2 原种 preculture spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称为二级种。栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称为三级种。4 生产要求 技术人员 菌种生产的技术人员是经过培训能够掌握专业知识、制作菌种达到相关技术要求的。场地选择 4.2.1 选址 选择水电和交通便利、通风良好、便于供排水的场地。4.2.2 环境卫生 要求500 m之内无畜禽养殖场、无垃圾场、无污水和其它污染源，远离北虫草种植区，尤其是远离北虫草栽培废弃物晾晒场，用
5、水符合GB 5749相关规定。设施、设备 4.3.1 原材料库 通风、防雨、防潮、防虫、防鼠、防火、防杂菌污染等。4.3.2 配料室、分装室 水电便利，通风良好、空间充足，配料室配磅秤、天平、搅拌机，分装室配分装器等。4.3.3 灭菌室 水电安全便利、通风良好、空间充足，配有高压灭菌锅或灭菌柜、消防等设施。如果使用煤、天然气加热，要求灭菌设施的出料门与加热灶有隔断设施。4.3.4 冷却室及接种室 洁净、防尘。冷却室通风良好，配紫外灯；接种室门口设缓冲间或风淋室，配有超净工作台、接种枪、高压泵、酒精灯、紫外灯、防火设备等。4.3.5 培养室 洁净、水电畅通、通风良好，配有恒温培养箱或培养架、摇床
6、、发酵罐、空调、杀菌设备等。4.3.6 菌种检验室 DB15/T 32842023 3 水电畅通，配有显微镜、pH计、菌落计数器等。容器 4.4.1 母种 玻璃试管（18 mm180 mm或20 mm200 mm）或平板培养皿，（90 mm90 mm），试管塞带有砂芯或者不带砂芯的硅胶塞。4.4.2 原种 耐高温高压的透明洁净摇瓶或聚丙烯塑料瓶。4.4.3 栽培种 耐高温高压的带有透气盖（膜）玻璃瓶、聚丙烯塑料瓶或不同容积规格发酵罐。原料 葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾等化学试剂，马铃薯、小麦、麦麩等要求新鲜、干燥、无虫、无霉变。5 菌种制备 培养基制备 5.1.1 母种 配方为马玲薯20
7、0 g(煮汁)、葡萄糖20 g、琼脂20 g、蛋白胨5 g、牛肉膏0.5 g、酵母粉5 g、磷酸二氢钾1 g、硫酸镁0.5 g，加水定容1000 mL，pH6.57.0。分装至试管中，分装量掌握在试管长度的1/4。5.1.2 原种 配方为马玲薯200 g(煮汁)、葡萄糖20 g、蛋白胨5 g、牛肉膏0.5 g、酵母粉5 g、磷酸二氢钾1 g、硫酸镁0.5 g，加水定容1000 mL，pH6.57.0。将液体培养基分装至容器内，分装量不超总容积的3/5。5.1.3 栽培种 制备配方和方法同原种，分装量不超过摇床培养容器或发酵罐总容积的3/5。灭菌 培养基采用常压或高压灭菌，在高压 121 123
8、（0.11 MPa0.15 MPa）条件下灭菌 20 min 25 min，常压 100 105 灭菌 10 h12 h，自然冷却到 50 左右时，取出试管，摆放斜面，原种和栽培种取出备用。接种 5.3.1 母种 在超净工作台上，取一段消毒好的子实体或培养的菌丝体放入试管培养基质中间部位，操作过程按照NY/T 1731的规定执行。DB15/T 32842023 4 5.3.2 原种 每升接入45块（2 mm2 mm）母种，迅速置于原种培养基内，及时盖上瓶盖，所有操作按照NY/T 528的规定执行。5.3.3 栽培种 按栽培培养基体积的2%取原种，迅速放入栽培种培养基内，及时盖上瓶盖，所有操作按照NY/T 528的规定执行。培养 5.4.1 母种 将接好的试管置于20 的恒温培养箱中暗培养6 d8 d，长至4 cm5 cm时使用，或转置于光照强度为200 Lx下培养2 d3 d转色后使用。5.4.2 原种和栽培种 置于18 22、120 r/min150 r/min可控温摇床上或发酵罐中暗培养5 d7 d，当培养基颜色变为棕色或黄白色，且有大量菌丝碎片，不浑浊。6 检验 取少量培养后的菌种在显微镜上进行检测，无杂菌、无异味，有北虫草菌种特有的清香味即合格后使用。7 贮存 培养好的菌种可以置于0 5 的保鲜箱中贮存，母种贮存时间不能超过30 d，原种和栽培种贮存时间不能超过10 d。
